茶多酚有效成分對(duì)淋巴細(xì)胞增殖的抑制和抗氧化作用

李偉，王遂泉，吳辛剛，洪為松，傅麗芳，盧良君，許愛(ài)娥

(杭州市第三人民醫(yī)院，浙江 杭州310009)

Effects of active ingredients of tea polyphenol on inhibiting lymphocyte proliferation and antioxidation

LI Wei, WANG Sui-quan, WU Xin-gang, HONG Wei-song, FU Li-fang, LU Liang-jun, XU Ai-e

(theThirdPeople′sHospitalofHangzhou，Hangzhou310009,China)

研究表明，茶多酚具有很強(qiáng)的消除有害自由基、抗衰老等多種藥理作用[1]，茶多酚臨床治療白癜風(fēng)具有較明顯的效果，但其各類(lèi)組分在臨床治療白癜風(fēng)所發(fā)揮的作用還未見(jiàn)報(bào)道。

1材料與方法

1.1動(dòng)物C57BL/6(B6)小鼠，體質(zhì)量(20±2)g，由浙江中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。

1.2主要藥品與試劑H2O2、EGCG均購(gòu)自美國(guó)Sigma公司，槲皮苷、山奈苷均購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所，沒(méi)食子酸(中國(guó)食品藥品檢定研究院)，CD8+T細(xì)胞分離抗體(Miltenyi，德國(guó)) ，MTS細(xì)胞增殖試劑盒(Promega，美國(guó)),CD3單抗、CD28單抗(eBioscience，美國(guó))

1.3實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1CD8+T淋巴細(xì)胞分離培養(yǎng)及藥物成分干預(yù)小鼠脾臟制成單細(xì)胞懸液，經(jīng)CD8+T細(xì)胞Biotin-Antibody Cocktail、MicroBead Cocktail孵育分離出CD8+T細(xì)胞。調(diào)整細(xì)胞密度為1×109·L-1，除空白及陰性對(duì)照孔，各孔均預(yù)先用5 mg·L-1的CD3抗體、CD28抗體包被。藥物成分干預(yù)孔分別加入不同濃度的4種組分，各樣品作3個(gè)復(fù)孔。

1.3.2MTS法檢測(cè)CD8+T淋巴細(xì)胞增殖各藥物成分處理96 h后測(cè)A490。

1.3.3IFN-γ測(cè)定IFN-γ抗體和CD3及CD28活化抗體鋪板，4℃過(guò)夜，按每孔5×104細(xì)胞加入CD8+T細(xì)胞、藥物處理48 h，最后加入IFN-γ結(jié)合抗體和顯色劑，計(jì)數(shù)。

1.3.4MTS法測(cè)黑素細(xì)胞活性鼠永生化黑素細(xì)胞(B10BR細(xì)胞)常規(guī)培養(yǎng)，調(diào)整細(xì)胞為5×103/孔，除空白對(duì)照組僅加入培養(yǎng)液，其余各孔加入藥液培養(yǎng)24 h。加入H2O224 h后測(cè)A490。

2結(jié)果

2.14種成分對(duì)CD8+T細(xì)胞增殖能力的影響槲皮苷有輕微的抑制作用，山奈苷顯示較明顯促進(jìn)作用，沒(méi)食子酸和EGCG均有明顯的抑制效果(P<0.05)。

2.2EGCG、沒(méi)食子酸對(duì)CD8+T細(xì)胞分泌IFN-γ的影響EGCG在0.3 mg·L-1時(shí)，IFN-γ分泌量較陽(yáng)性對(duì)照無(wú)明顯變化，1、3、10 mg·L-1時(shí)，分泌量明顯減少；沒(méi)食子酸隨著其作用濃度的不斷升高，IFN-γ分泌逐漸減少。

2.3藥物預(yù)處理對(duì)H2O2損傷細(xì)胞的保護(hù)作用H2O2單獨(dú)處理后黑素細(xì)胞活性為57.3%±4.2%，明顯低于空白對(duì)照組(P<0.05)；4種成分預(yù)處理均能提高黑素細(xì)胞的活性 (P<0.05)。

3討論

機(jī)制研究表明，茶多酚可對(duì)抗CD8+T細(xì)胞對(duì)黑色素細(xì)胞的殺傷，對(duì)黑素細(xì)胞有一定的保護(hù)作用[2]。我們的結(jié)果發(fā)現(xiàn)，同樣濃度下沒(méi)食子酸對(duì)CD8+T細(xì)胞分泌IFN-γ的抑制比EGCG更強(qiáng)，由于CD8+T細(xì)胞只有在活化狀態(tài)下才分泌IFN-γ，此表明EGCG和沒(méi)食子酸能有效抑制CD8+T細(xì)胞的活化。EGCG、槲皮苷、沒(méi)食子酸均在10 mg·L-1時(shí)達(dá)到最大抗氧化作用，但隨著濃度升高，EGCG抗氧化能力變化不大，后二者處理的細(xì)胞活性明顯下降，提示槲皮苷與沒(méi)食子酸在大于10 mg·L-1會(huì)對(duì)黑素細(xì)胞產(chǎn)生毒性作用，而EGCG安全范圍較大。鑒于EGCG在茶多酚中含量較高，又有較強(qiáng)的抗氧化與抑制CD8+T細(xì)胞活化增殖的作用，可以認(rèn)為其是茶多酚治療白癜風(fēng)的主要有效成分。以上研究結(jié)果可為今后應(yīng)用茶多酚以及EGCG在臨床治療白癜風(fēng)提供依據(jù)和參考。

參考文獻(xiàn):

[1]陳旭, 胡園, 李青山, 等. 表沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯對(duì)H2O2誘導(dǎo)的SH-SY5Y神經(jīng)細(xì)胞損傷的保護(hù)作用[J]. 中國(guó)藥理學(xué)通報(bào), 2011,27(3):320-4.

[1]Chen X, Hu Y, Li Q S, et al. The protective effect of EGCG on hydrogen peroxide induced SH-SY5Y cell injury[J].ChinPharmacolBull, 2011,27(3):320-4.

[2]歐陽(yáng)杰，吳紀(jì)龍，周妙妮，等.茶多酚對(duì)CD8+T細(xì)胞殺傷白癜風(fēng)患者黑素細(xì)胞的保護(hù)作用研究[J].中華皮膚科雜志，2013，46(1)：20-3．

[2]Ou Y J, Wu J L, Zhou M N, et al．Protective effects of tea polyphenols against the destruction of melanocytes by CD8+T cells from vitiligo patients[J].ChinJDermatol, 2013，46(1)：20-3．

網(wǎng)絡(luò)出版時(shí)間：2015-1-9 13:37網(wǎng)絡(luò)出版地址：http://www.cnki.net/kcms/doi/10.3969/j.issn.1001-1978.2015.02.029.html

◇研究簡(jiǎn)報(bào)◇

中國(guó)圖書(shū)分類(lèi)號(hào)：R-332;R284.1;R331.125;R392.11;R392.12;R758.41

關(guān)鍵詞:茶多酚；抑制；黑素細(xì)胞；抗氧化；CD8+T淋巴細(xì)胞；細(xì)胞增殖

Key words:tea polyphenol；inhibit; melanocytes；antioxidant；CD8+T lymphocytes；cell proliferation

通訊作者許愛(ài)娥(1945-)，女，教授，博士生導(dǎo)師，研究方向：色素性皮膚病，，Tel:0571-87827535，E-mail:xuaiehz@msn.com

作者簡(jiǎn)介：李偉(1987-)，男，碩士生，研究方向：色素性皮膚病，E-mail: liwei1586@126.com；

基金項(xiàng)目：國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(No 81271758)；杭州市重大科技創(chuàng)新專(zhuān)項(xiàng)(No 20122513A02)；浙江省公益性技術(shù)應(yīng)用研究計(jì)劃項(xiàng)目(No 2011C23134)；杭州市科技局項(xiàng)目(No 20110733Q03)

收稿日期：2014-11-04，修回日期：2014-11-28

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

文章編號(hào)：1001-1978(2015)02-0294-02

doi:10.3969/j.issn.1001-1978.2015.02.029