李 偉，施文浩，任文娟，李明昭，師娟子

(陜西省婦幼保健院，陜西 西安710003)

不同冷凍原因FET周期移植結(jié)局的分析

李 偉，施文浩，任文娟，李明昭，師娟子

(陜西省婦幼保健院，陜西 西安710003)

目的 分析輔助生殖技術中不同冷凍原因的玻璃化凍融胚胎移植結(jié)局。方法 對2009年3月至2011年5月1 186個玻璃化凍融胚胎移植周期進行回顧性統(tǒng)計學分析，根據(jù)不同的冷凍原因分為預防卵巢過度刺激綜合征(OHSS)全胚冷凍組(A組)、新鮮周期移植后剩余胚胎冷凍組(B組)、宮腔積液原因取消移植胚胎冷凍組(C組)和其他原因胚胎冷凍組(D組)，分析各組的臨床妊娠率。結(jié)果 A、B、C、D組的妊娠率分別為64.2%、45.5%、44.0%、51.5%，A組與B組、C組均有顯著性差異(χ2值分別為35.080、4.119，均P<0.05)。但與D組無顯著性差異(χ2=2.113，P>0.05)，B組與C組、D組間均無顯著性差異(χ2值分別為0.022、0.461，均P>0.05)。結(jié)論 對于有過激風險和宮腔積液的患者，進行凍融胚胎移植是一種有效的助孕方法。

冷凍原因；凍融胚胎移植；妊娠率；輔助生殖技術

凍融胚胎移植(frozen-thawed embryo transfer，F(xiàn)ET)是一項重要的輔助生殖技術。FET能夠增加一次取卵周期妊娠的幾率，防止胚胎的浪費，還可以為某些不適合移植的病人提供擇期移植的機會。自Trounson等首次采用凍融胚胎移植獲得成功妊娠至今，這項技術得到了不斷地改進和發(fā)展，已經(jīng)廣泛的用于各個生殖中心。胚胎冷凍的原因有很多，本研究通過對大量臨床樣本的分析，探討不同冷凍原因的玻璃化凍融胚胎移植結(jié)局。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

回顧性分析2009年3月5日至2011年5月31日在陜西省婦幼保健院生殖中心接受玻璃化凍融胚胎移植的1 186個周期。根據(jù)不同的冷凍原因分為：預防卵巢過度刺激綜合征(ovarian hyperstimulation syndrome，OHSS)全胚冷凍組的372個周期(A組)；新鮮周期移植后剩余胚胎冷凍組的756個周期(B組)；宮腔積液原因取消移植胚胎冷凍組的25個周期(C組)；其他原因胚胎冷凍組的33個周期(D組)。所有周期均為受精后72小時玻璃化冷凍胚胎。本文相關數(shù)據(jù)來源及試驗設計均得到醫(yī)院倫理道德委員會批準。

1.2 方法

1.2.1 胚胎質(zhì)量分級及冷凍胚胎選擇

本中心是根據(jù)胚胎卵裂球數(shù)量、均勻性以及碎片的量綜合起來對第3天的胚胎評級[1-2]?；诼蚜亚虻臄?shù)量的評級：8～10評Ⅰ級；6～7或大于10評Ⅱ級；4～5評Ⅲ級；小于4評Ⅳ級。基于卵裂球體積均勻性的評級：均勻評Ⅰ級；不均勻評Ⅱ級；非常不均勻評Ⅲ級?；谂咛サ乃槠康脑u級：沒有碎片評Ⅰ級；碎片量<20%評Ⅱ級；碎片量20%～30%評Ⅲ級；碎片量≥30%評Ⅳ級。聯(lián)合上面3個評價標準，選擇評級為Ⅰ～Ⅲ的胚胎進行玻璃化冷凍。FET移植胚胎的級別為Ⅰ～Ⅲ；優(yōu)胚級別為Ⅰ～Ⅱ。

1.2.2 胚胎玻璃化冷凍方法

采用Vitrification 試劑盒(Kitazato，Japan)進行玻璃化冷凍，冷凍液分為ES液和VS液，4℃保存。使用前在室溫(25℃)條件下平衡30分鐘。將胚胎吸入ES液，室溫下放置約5分鐘。胚胎卵裂球出現(xiàn)皺縮再擴張，待胚胎卵裂球擴張至原體積的80%以上，將其放入VS液。然后胚胎放置于有患者信息的無菌載桿上，迅速投入液氮中。

1.2.3 胚胎解凍

胚胎解凍于移植前一天的下午進行。采用Vitrification試劑盒(Kitazato，Japan)，解凍液分為TS液、DS液，WS1液和WS2液，4℃保存。使用前，TS液在37℃平衡30分鐘，其他解凍液在室溫(25℃)條件下平衡30分鐘。將冷凍載桿從液氮中取出，迅速將前端葉片浸入TS液中，1分鐘內(nèi)胚胎脫落到TS液中。將胚胎依次移入DS、WS1和WS2液中，分別放置3分鐘、5分鐘、5分鐘。轉(zhuǎn)入預平衡好的培養(yǎng)液中觀察，有≥50%細胞數(shù)目存活的胚胎記為復蘇，其余的丟棄。隨后放入37℃，6%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)過夜。

1.2.4 胚胎移植

采用B超引導下移植。

1.3 統(tǒng)計學方法

采用SPSS 16.0統(tǒng)計軟件分析，計量資料以均數(shù)±標準差表示，組間均數(shù)的比較方法采用t檢驗，計數(shù)資料的比較方法采用χ2檢驗，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 不同冷凍原因凍融胚胎移植周期的基本情況

本研究的1 186個FET周期中，預防OHSS組占372周期，剩余胚胎冷凍組占756周期，宮腔積液組占25周期，其他原因組占33周期。在促排卵年齡方面，宮腔積液組患者最高，與另3組相比均有顯著性差異(t值分別為3.775、2.554、2.361，均P<0.05)；剩余胚胎組與預防OHSS組相比有顯著性差異(t=5.715，P<0.05)剩余胚胎組的胚胎冷凍時間最長，與預防OHSS組和其他組(D組)相比均有顯著性差異(t值分別為8.212、4.681，均P<0.05)。對移植時內(nèi)膜厚度而言，其他組(D組)均顯著性高于預防OHSS組和宮腔積液組(t值分別為2.445、2.651，均P<0.05)；剩余胚胎組顯著高于預防OHSS組(t=2.322，P<0.05)。剩余胚胎組的移植胚胎數(shù)最多，與預防OHSS組和其他組(D組)相比均有顯著性差異(t值分別為8.207、3.255，均P<0.05)。對于移植優(yōu)胚數(shù)而言，剩余胚胎組最少，與預防OHSS組和宮腔積液組相比均有顯著性差異(t值分別為4.417、3.116，均P<0.05)，見表1。

2.2 不同冷凍原因凍融胚胎移植周期的妊娠結(jié)局

在種植率上，預防OHSS組最高，剩余胚胎組最低，兩組間差異顯著(χ2=43.364，P<0.05)。在妊娠率上，也是預防OHSS組最高，與剩余胚胎組和宮腔積液組相比均有顯著性差異(χ2值分別為35.080、4.119，均P<0.05)，見表2。

注：a表示與預防OHSS組比差異顯著(P<0.05)；b表示與剩余胚胎冷凍組比差異顯著(P<0.05)；c表示與宮腔積液組比差異顯著(P<0.05)。

表2 不同冷凍原因凍融胚胎移植周期的移植結(jié)局(%)

Table 2 The outcomes of FET with different frozen reasons(%)

注：a表示與預防OHSS組比差異顯著(P<0.05)。

3 討論

3.1 胚胎冷凍原因及其妊娠結(jié)局

OHSS是輔助生殖過程中非常嚴重的并發(fā)癥，發(fā)生于因排卵障礙而進行誘發(fā)排卵時或控制性超排卵后[3]。因其發(fā)病機制還沒有完全闡明，目前為止還沒有明確的治療方法，主要以預防為主。為了預防嚴重的OHSS而進行全胚胎冷凍的方法被越來越多的應用在輔助生殖領域。近期研究顯示，預防OHSS全胚冷凍后行FET與新鮮周期移植相比臨床結(jié)局沒有明顯差異，不過全胚冷凍可以預防中重度OHSS的發(fā)生，降低患者的治療風險[4-5]。研究發(fā)現(xiàn)，全胚冷凍后首次移植組與新鮮移植組的臨床妊娠率差異不顯著(63.89% vs 58.48%)，但能夠避免遲發(fā)型OHSS[6]。而Absalan等[7]發(fā)現(xiàn)對于OHSS的患者，凍融胚胎移植的臨床妊娠率顯著高于新鮮胚胎移植(63.1% vs 55.1%)。另有研究表明，全胚胎冷凍可以預防中、重度OHSS 的發(fā)生，并且其后行FET比同期新鮮周期有更高的妊娠率[8]。

本研究的1 186個FET周期中，主要的冷凍原因是預防OHSS和剩余胚胎冷凍。預防OHSS組的種植率和妊娠率要明顯高于剩余胚胎組，這可能是由于預防OHSS組凍存的胚胎質(zhì)量比剩余胚胎組高，由表1可見，預防OHSS組移植的優(yōu)胚數(shù)明顯高于剩余胚胎冷凍組，而且前者的促排卵年齡低于后者組，胚胎的凍存時間也較短，這些可能是預防OHSS組比剩余胚胎冷凍組移植結(jié)局好的原因。宮腔積液組與預防OHSS組相比，其妊娠率明顯低于后者，可能是由于促排卵年齡高的原因。對于其他原因冷凍組，新鮮周期取消移植的原因主要包括內(nèi)膜因素、發(fā)熱、出水痘、意外等，該組基本情況與預防OHSS組一致，種植率和妊娠率也沒有明顯差異。

3.2 移植后剩余胚胎的冷凍

將新鮮周期移植后剩余的可用胚胎冷凍，若新鮮周期未能成功，則行FET治療，這種方法可以最大限度的提高一個促排周期的效率，避免胚胎的浪費，也可以減少患者的治療費用。蘇燕等[9]的研究顯示，剩余胚胎冷凍后行FET治療有44.4%的臨床妊娠率。在本研究中，B組有26%的種植率和45.5%的臨床妊娠率。這就表明剩余胚胎冷凍后FET是一種可以選擇的有效方法。

在輔助生殖過程中，宮腔積液會影響子宮內(nèi)膜對胚胎的接受性，從而影響種植率與妊娠率。因此，對于有宮腔積液的患者可以取消新鮮周期移植，將其胚胎冷凍，擇期行凍融胚胎移植，這樣可以有效的防止宮腔積液的影響。在我們的研究中，宮腔積液組的臨床妊娠率為44.0%，雖然低于預防OHSS組，但這可能是由于患者的促排卵年齡高所致。因此，對于有宮腔積液的患者可以選擇將胚胎冷凍擇期移植。

綜上所述，在輔助生殖過程中，有各種原因需要進行胚胎冷凍，然后擇期移植。隨著胚胎冷凍和解凍方法的優(yōu)化，凍融胚胎移植的結(jié)局也越來越好。尤其是對于有過激風險和宮腔積液的患者，進行凍融胚胎移植是很好的助孕方法。

[1]Hardarson T, Hanson C, Sj?gren A,etal. Human embryos with unevenly sized blastomeres have lower pregnancy and implantation rates: Indications for aneuploidy and multinucleation [J].Human Reproduction,2001,16(2):313-318.

[2]Van Royen E,Mangelschots K,Vercruyssen M,etal.Multinucleation in cleavage stage embryos [J].Human Reproduction ,2003,18(5):1062-1069.

[3]Chen S U,Chen R J, Shieh J Y,etal. Human chorionic gonadotropin up-regulates expression of myeloid cell leukemia-1 protein in human granulosa-lutein cells:Implication of corpus luteum rescue and ovarian hyperstimulation syndrome[J].J Clin Endocrinol Metab,2010,95(8):3982-3992.

[4]魯振宇, 徐鳳琴, 張云山,等. OHSS高危胚胎移植與全胚胎冷凍移植不孕患者結(jié)局分析[J]. 天津醫(yī)藥,2010,38(3): 189-191.

[5]許偉標, 楊桂艷, 鄭煜麗. 卵巢過度刺激綜合征全胚胎冷凍后首次凍融移植臨床分析[J].中華臨床醫(yī)師雜志,2011,5(1): 236-238.

[6]賀玲, 陳雷寧, 李紅,等.全胚胎冷凍后首次移植對卵巢過度刺激綜合征高?；颊吲R床結(jié)局的影響[J].婦產(chǎn)與遺傳(電子版),2012,2(1):20-23.

[7]Absalan F, Ghannadi A, Kazerooni M.Reproductive outcome following thawed embryo transfer in management of ovarian hyperstimulation syndrome[J].J Reprod Infertil，2013，14(3):133-137.

[8]趙亞瓊, 金銳, 王瑩, 等.全胚冷凍在預防OHSS中的價值探討[J]. 寧夏醫(yī)學雜志,2013, 35(9): 823-824.

[9]蘇雁, 張軍強, 李秀玲,等. Cryotop玻璃化冷凍人類卵裂期胚胎的臨床應用[J].江蘇醫(yī)藥,2012, 38(4): 409-411.

[專業(yè)責任編輯：呂淑蘭]

Analysis of the outcomes of FET with different frozen reasons

LI Wei, SHI Wen-hao, REN Wen-juan, LI Ming-zhao, SHI Juan-zi

(MaternalandChildHealthCareHospitalofShaanxiProvince,ShaanxiXi’an710003,China)

Objective To analyze the outcomes of the vitrified frozen-thawed embryo transfer (FET) with different frozen reasons in assisted reproductive technology. Methods A retrospective analysis was performed in 1 186 vitrified thawing cycles from March 2009 to May 2011. The cycles were divided into four groups according to different frozen reasons: frozing the whole embryos to avoid ovarian hyperstimulation syndrome (OHSS) (group A), frozing the surplus embryos after fresh transferring (group B), frozing the whole embryos for endometrial cavity fluid (ECF) (group C) and frozing the embryos for other reasons (group D). The pregnancy rate of different groups was analyzed. Results The pregnancy rate of group A, group B, group C and group D was 64.2%, 45.5%, 44.0% and 51.5%, respectively. The pregnancy rate of group A was significantly different from group B and group C (χ2value was 35.080 and 4.119, respectively, bothP<0.05), but it was not significantly different from group D (χ2=2.113,P>0.05). Group B was not statistically different from group C and group D (χ2value was 0.022 and 0.461, respectively, bothP>0.05). Conclusion FET is an effective method for the patients with the risk of OHSS and ECF.

frozen reasons, frozen-thawed embryo transfer (FET), pregnancy rate;assisted reproductive technology

2014-07-09

李 偉(1987-)，男，初級檢驗技師，碩士，主要從事胚胎工程研究。

師娟子，主任醫(yī)師。

10.3969/j.issn.1673-5293.2015.01.043

R711.6

A

1673-5293(2015)01-0111-02