盧曉華

（廣西萬通制藥有限公司，廣西 南寧 530003）

萬通炎康片由苦玄參、腫節(jié)風(fēng)經(jīng)提取加工制成，腫節(jié)風(fēng)為處方中的主藥，異嗪皮啶為腫節(jié)風(fēng)藥材中抗菌消炎、抗腫瘤的有效成分，是該制劑的含量測定指標(biāo)［1］。在生產(chǎn)過程中，通過監(jiān)測萬通炎康片清膏的異嗪皮啶含量，在中間環(huán)節(jié)可有效地控制產(chǎn)品質(zhì)量，評(píng)估藥材在生產(chǎn)過程中的轉(zhuǎn)移率。本文應(yīng)用高效液相色譜法測定萬通炎康片清膏中異嗪皮啶的含量，方法簡單、結(jié)果準(zhǔn)確、靈敏度高，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 儀器 高效液相色譜儀：日本島津LC-10A高效液相色譜儀，LC-10Atvp泵，SPD-10Avp可變波長檢測器；威瑪龍色譜工作站；WondaSil GL Sciences C18柱（5.0 μm，4.6 mm×250 mm）。1.2 試藥 乙腈：色譜純；水：超純水；磷酸：色譜純；異嗪皮啶對(duì)照品（中國藥品生物制品檢定所，批號(hào)：110837-201206，供含量測定用）；萬通炎康清膏（由廣西萬通制藥有限公司提供，批號(hào)：131101、131104、131106、131110、131112、131128、131130、131201、131203、131205）。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱：Wondasil GL Sciences C18柱（5.0 μm，250 mm×4.6 mm）；流動(dòng)相：乙腈-0.1%磷酸（25∶75）；流速：1.0 ml/min；檢測波長：344 nm；理論板數(shù)按異嗪皮啶計(jì)算不低于3 500。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對(duì)照品溶液的制備 取異嗪皮啶對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 ml含20 μg的溶液，即得。

2.2.2 供試品溶液的制備 取萬通炎康片清膏約1 g，精密稱定，置錐形瓶中，加水20 ml，超聲處理20 min，放冷，轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，加三氯甲烷輕輕振搖提取5次，每次10 ml，合并三氯甲烷提取液，蒸干，殘?jiān)蛹状既芙獠⑥D(zhuǎn)移至25 ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜（0.45 μm）濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.2.3 陰性樣品溶液的制備 按處方比例制備缺腫節(jié)風(fēng)藥材的萬通炎康片清膏，精密稱取清膏適量，按供試品溶液的制備方法進(jìn)行提取制成陰性樣品溶液。

取對(duì)照品、供試品和陰性樣品溶液，分別進(jìn)樣10 μl，異嗪皮啶保留時(shí)間大約為9 min，在此色譜條件下，供試品可達(dá)到完全分離，陰性樣品在9 min出峰處無干擾峰。HPLC圖見圖1。

圖1 HPLC色譜圖

2.3 方法學(xué)考察

2.3.1 線性關(guān)系考察 取異嗪皮啶對(duì)照品適量，精密稱定為8.125 mg，置25 ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取 1.0，2.0，3.0，4.0，5.0 ml溶液，分別置于 50 ml量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，分別精密吸取10 μl，按上述色譜條件注入色譜儀，測定峰面積值，以峰面積值為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣量（μg）為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并求得標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程為：Y=35 498 X-15 176，r=0.9998，異嗪皮啶在0.065～0.325 μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系。

2.3.2 精密度試驗(yàn) 精密吸取對(duì)照品溶液10 μl，重復(fù)進(jìn)樣5次，峰面積的RSD為0.39%（n=5）。

2.3.3 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一供試品（批號(hào)：131101），依法制備供試品溶液，每隔 2 h（0，2，4，6，8，10 h）進(jìn)樣 1 次，進(jìn)行了10 h考察，峰面積的RSD為1.28%（n=6），結(jié)果表明供試品溶液在10 h內(nèi)測定保持穩(wěn)定。

2.3.4 重現(xiàn)性試驗(yàn) 分別取同一批樣品（批號(hào)：131101）5份，每份重約1 g，精密稱定，按“樣品測定”方法進(jìn)行提取、測定，計(jì)算，結(jié)果其平均含量為 250.87 μg/g，RSD 為 0.77%（n=5）。

2.3.5 加樣回收率試驗(yàn) 取已測知含量的樣品（批號(hào)：131101，含量為0.2512 mg/g）1 g，精密稱定。精密加入異嗪皮啶對(duì)照品溶液1 ml（濃度0.2400 mg/ml），按“樣品測定”方法進(jìn)行提取，測定，計(jì)算，結(jié)果異嗪皮啶平均回收率98.56%，RSD為1.02%（n=6）。見表 1。

表1 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果 （n=6）

2.3.6 樣品測定 取10批樣品，按含量測定方法依法測定異嗪皮啶含量，結(jié)果見表2。

表2 樣品含量測定結(jié)果 （n=2）

3 討 論

3.1 在供試品的制備過程中，使用三氯甲烷振搖提取時(shí)，為防止產(chǎn)生乳化現(xiàn)象，應(yīng)避免劇烈振搖。

3.2 根據(jù)10批實(shí)驗(yàn)測定結(jié)果，清膏中異嗪皮啶含量最高為291.26 μg/g，最低為 252.76 μg/g?？紤]到不同藥材的來源含量不一，結(jié)合相對(duì)應(yīng)藥材批次轉(zhuǎn)移率的考察，將清膏中異嗪皮啶的含量定為不低于220 μg/g，以此作為中間產(chǎn)品的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)實(shí)際生產(chǎn)具有良好的指導(dǎo)意義。

［1］中華人民共和國藥典委員會(huì)．中華人民共和國藥典［S］．一部.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：465.