劉海燕 ，黃卓堅(jiān) ，夏 星，馮 橋 ，黃 歡 ，鄧裕彥，王志萍

（1.廣西中醫(yī)藥大學(xué)，廣西高校中藥制劑共性技術(shù)研發(fā)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣西 南寧 530001；2.廣西壯族自治區(qū)民族醫(yī)藥研究院，廣西 南寧 530001）

白背葉根為廣西民間常用草藥，系壯藥材之一，為大戟科野桐屬植物白背木Mallotus apelta（Lour.）Muell.Arg.的干燥根，白背葉根含有三萜類［1］、香豆素類［2］、有機(jī)酸類［3］等化合物。壯醫(yī)藥理論認(rèn)為，其性平，微澀、微苦，具有通谷道、除濕毒、清熱毒的功效，可用于肝炎、脾腫大、降白呆（帶下）、肉扭（淋證）、白凍（泄瀉）、兵嘿細(xì)勒（疝氣）、火眼、中耳炎、子宮下垂、脫肛［4］。中醫(yī)藥理論認(rèn)為，其性平，味微苦澀，歸肝、脾經(jīng)。具有清熱解毒、收澀消瘀、抗肝纖維化、抗乙肝病毒、抗肝損傷作用，對降低轉(zhuǎn)氨酶和縮小肝脾也有一定作用［5-8］，用于慢性肝炎、肝脾腫大、子宮脫垂、脫肛、白帶、妊娠水腫［9］。本課題組曾對白背葉根提取物進(jìn)行體外抑菌研究［10-11］，現(xiàn)進(jìn)一步對白背葉根提取物的急性毒性及抗炎作用進(jìn)行研究，為進(jìn)一步研究開發(fā)白背葉根提供理論及實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 藥品與試劑 白背葉根采于廣西南寧市郊老虎嶺，經(jīng)廣西中醫(yī)藥大學(xué)壯醫(yī)藥學(xué)院韋松基教授鑒定為大戟科野桐屬植物白背木Mallotus apelta（Lour.）Muell.Arg.的干燥根。稱取白背葉根粗粉適量，置于圓底燒瓶中，按料液比1∶8加入50%乙醇，用電熱套加熱，回流提取2次，每次1 h，過濾，合并濾液，減壓濃縮至無醇味，繼續(xù)濃縮至濃度為2 g/ml藥液［10］，噴霧干燥，得提取物干燥粉末，再分別加蒸餾水配成所需相應(yīng)濃度的白背葉根提取物溶液。醋酸地塞米松片（浙江仙琚制藥股份有限公司，批號(hào)：1103120）；二甲苯（天津市化學(xué)試劑廠，批號(hào)：090516）；水合氯醛（天津市光復(fù)精細(xì)化工研究所，批號(hào)：20120728）。

1.2 動(dòng)物 昆明種小鼠，18～22 g，雄性，由廣西醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，許可證號(hào)：SCXK桂2009-0003。

1.3 儀器 L-600臺(tái)式低速自動(dòng)平衡離心機(jī)（長沙湘儀離心機(jī)儀器有限公司）；EL-204電子天平［梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司］；GZX-9420 MBE電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱（上海博迅有限公司醫(yī)療設(shè)備廠）；PV-200足趾容積測量儀（成都泰盟科技有限公司）。

2 方 法

2.1 急性毒性試驗(yàn)［12］經(jīng)預(yù)試驗(yàn)，白背葉根提取物經(jīng)過干燥成粉末后，測得其最大溶解量為0.233 g（藥粉重）/ml，一次給藥后無小鼠死亡，無法測出LD50，故進(jìn)行最大給藥量試驗(yàn)。方法：選用昆明種小鼠40只，雌雄各半，隨機(jī)分為給藥組、對照組各20只。給藥組每次灌胃容積為40 ml/kg，灌胃藥液濃度為0.233 g/ml，24 h內(nèi)灌胃3次（每次間隔6 h），累計(jì)劑量為27.96 g/（kg·d），相當(dāng)于有效給藥量的78倍。對照組給予等量生理鹽水。灌胃后4 h內(nèi)注意觀察小鼠無中毒反應(yīng)，隨后每天觀察小鼠1次。每3天稱重1次，連續(xù)觀察15 d。第16天將所有供試鼠脫頸椎處死，剖檢小鼠的心、肝、脾、肺、腎、胃等臟器有無異常。

2.2 白背葉根提取物對二甲苯致小鼠耳廓腫脹的影響［13］采用隨機(jī)方法將雄性小鼠昆明種60只分為空白對照組，陽性對照組，白背葉根低、中、高劑量組，每組12只，灌胃給藥。空白對照組灌胃等量生理鹽水；陽性對照組用地塞米松灌胃給藥，劑量為0.008 g/kg；白背葉根低、中、高劑量組給藥劑量分別為0.179 g/kg、0.358 g/kg、0.717 g/kg。各組連續(xù)給藥 7 d，末次給藥后45 min在小鼠右耳背腹兩側(cè)均勻涂抹二甲苯各10 μl，15 min后頸椎脫臼處死，用6 mm打孔器打下左右兩耳同一部位的組織塊，分別稱重，腫脹度（mg）=右耳耳片重（mg）-左耳耳片重（mg）。

2.3 白背葉根提取物對棉球致小鼠肉芽腫脹的影響［13］采用隨機(jī)方法將昆明種雄性小鼠50只分為空白對照組，陽性對照組，白背葉根低、中、高劑量組，每組10只。每組小鼠用水合氯醛麻醉，在腋下切開小口，用眼科鑷將已稱重為10 mg的滅菌棉球植于皮下，隨即縫合皮膚，手術(shù)次日開始給藥，連續(xù)7 d。空白對照組用等量生理鹽水灌胃；陽性對照組用地塞米松灌胃給藥，劑量為0.008 g/kg；白背葉根低、中、高劑量組給藥劑量分別為0.179 g/kg、0.358 g/kg、0.717 g/kg。于第8天處死小鼠，打開原切口，將棉球連同周圍結(jié)締組織一起取出，剔除脂肪組織，放入烘箱中60℃烘干6 h，稱重，減去棉球原重量即得肉芽腫脹的重量。

2.4 白背葉根提取物對蛋清致小鼠足趾腫脹的影響［13］采用隨機(jī)方法將昆明種雄性小鼠50只分為空白對照組，陽性對照組，白背葉根低、中、高劑量組，每組10只?？瞻讓φ战M給予等量生理鹽水；陽性對照組用地塞米松給藥，劑量為0.006 g/kg；白背葉根低、中、高劑量組給藥劑量分別為0.179 g/kg、0.358 g/kg、0.717 g/kg。每日灌胃給藥1次，在第5天用足容積測量儀測定每只小鼠右足趾正常足趾容積后給藥，給藥0.5 h后，在每只小鼠右足趾部皮下注射10%蛋清溶液50 μl。用足趾容量測定儀分別測定致炎后1、2、3、4 h的足趾容積，計(jì)算腫脹度。腫脹度=［（致炎后右足趾容積-正常右足趾容積）/正常右足趾容積］×100%。

2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)分析軟件，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，兩組間均數(shù)差異采用t檢驗(yàn)，P＜0．05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1 急性毒性試驗(yàn)結(jié)果 小鼠給藥后行動(dòng)略顯遲緩，1 h后恢復(fù)正常。在15 d的觀察期內(nèi)，給藥組小鼠進(jìn)食、飲水、大小便均正常，體重與對照組體重比較無顯著性差異（P＞0.05），結(jié)果見表1。整個(gè)試驗(yàn)過程無小鼠中毒及死亡現(xiàn)象出現(xiàn)。第16 d將所有供試鼠脫頸椎處死，剖檢小鼠，給藥組小鼠與對照組小鼠比較，內(nèi)臟無異常。白背葉根醇提物最大耐受量為27.96 g/（kg·d），相當(dāng)于有效給藥量的78倍。

3.2 白背葉根提取物對二甲苯致小鼠耳郭腫脹的影響 見表2。

在表2中，與空白對照組比較，白背葉根提取物高、中劑量均能顯著減輕二甲苯致小鼠耳廓腫脹度（P＜0.01）；地塞米松亦能顯著減輕二甲苯致小鼠耳廓腫脹度（P＜0.01）。

3.3 白背葉根提取物對棉球誘導(dǎo)小鼠肉芽腫脹的影響 見表3。

表1 白背葉根提取物給藥前后體重變化 （±s，n=10）

表1 白背葉根提取物給藥前后體重變化 （±s，n=10）

組別時(shí)間給藥組 對照組雌雄雌雄給藥前 20.81±1.19 18.17±1.00 20.58±1.10 18.04±1.28第 3 天 23.30±1.95 21.23±1.83 23.68±1.90 21.81±1.66第 6 天 25.37±2.39 22.66±2.11 26.32±2.54 23.87±2.00第 9 天 26.48±2.29 23.46±2.07 27.41±2.54 24.86±2.24第 12 天 26.41±2.54 23.75±1.78 26.55±2.60 25.09±1.65第 15 天 27.92±2.42 25.44±1.85 29.30±3.31 26.53±1.94

表2 白背葉根提取物對二甲苯致小鼠耳廓腫脹的影響（±s，n=12）

表2 白背葉根提取物對二甲苯致小鼠耳廓腫脹的影響（±s，n=12）

注：與空白對照組比較，①P ＜0.05，②P ＜0.01；下同

腫脹抑制率（%）空白對照組 — 7.95±4.10 —地塞米松組 0.008 2.20±1.60② 72.20白背葉根高劑量組 0.717 3.40±2.12② 57.23白背葉根中劑量組 0.358 3.79±2.42② 39.87白背葉根低劑量組 0.179 5.60±4.10 29.43組 別 劑量（g/kg）腫脹度（mg）

表3 白背葉根提取物對小鼠棉球肉芽腫脹的影響（±s，n=10）

表3 白背葉根提取物對小鼠棉球肉芽腫脹的影響（±s，n=10）

腫脹抑制率（%）空白對照組 — 9.23±2.29 —地塞米松組 0.008 5.81±3.96① 37.05白背葉根高劑量組 0.717 6.62±2.11① 28.28白背葉根中劑量組 0.358 7.17±4.56 22.32白背葉根低劑量組 0.179 9.15±2.69 0.87組 別 劑量（g/kg）棉球肉芽腫脹（mg）

在表3中，白背葉根提取物高劑量能顯著減少棉球誘導(dǎo)小鼠肉芽腫脹重量（P＜0．05）；地塞米松亦能顯著減少棉球誘導(dǎo)小鼠肉芽腫脹重量（P ＜0．05）。

3.4 白背葉根提取物對蛋清致小鼠足趾腫脹的影響 見表4。

在表4中，白背葉根提取物高、中劑量均能顯著降低蛋清致小鼠腫脹足的 1，2，3 h的腫脹率（P＜0.05或P＜0.01）；地塞米松亦能顯著降低蛋清引發(fā)的小鼠足1，2，3，4 h的腫脹率（P＜0.01）。白背葉根提取物在1 h時(shí)開始起效，2 h時(shí)作用達(dá)到頂峰之后，3 h時(shí)藥效有一定程度的減弱，4 h時(shí)藥效消退。

4 結(jié) 論

炎癥是機(jī)體對細(xì)菌、病毒、微生物等侵入物或損傷、過敏反應(yīng)等事件產(chǎn)生的保護(hù)性反應(yīng)，但不被控制的、持續(xù)的炎癥反應(yīng)會(huì)對組織產(chǎn)生損害，有的甚至可能導(dǎo)致功能喪失和死亡。因此，及時(shí)中止炎癥過程對維持生命是至關(guān)重要的。近年來，中藥抗炎作用已經(jīng)受到廣泛關(guān)注，白背葉根為廣西民間常用草藥，屬于地道的廣西壯藥材，本試驗(yàn)采用的二甲苯誘導(dǎo)小鼠耳廓腫脹試驗(yàn)、棉球致肉芽腫脹試驗(yàn)、蛋清致小鼠足趾腫脹試驗(yàn)為常規(guī)的急、慢性炎癥模型。試驗(yàn)結(jié)果表明，白背葉根提取物能減輕二甲苯致小鼠耳廓腫脹反應(yīng)，抑制棉球致小鼠肉芽組織的增生及蛋清致小鼠足腫脹的程度，顯示出明顯的抗炎作用，這為今后開發(fā)白背葉根提供了科學(xué)依據(jù)。

表4 白背葉根提取物對蛋清致小鼠足趾腫脹的影響 （±s，n=10）

表4 白背葉根提取物對蛋清致小鼠足趾腫脹的影響 （±s，n=10）

腫脹度（%）1 h 2 h 3 h 4 h空白對照組 — 0.16±0.03 48.72±22.25 63.79±24.67 53.01±20.96 34.53±18.97地塞米松組 0.006 0.16±0.02 11.82±6.84② 34.78±12.36② 27.61±12.86② 8.85±3.73②白背葉根高劑量組 0.717 0.18±0.02 23.00±11.54② 41.42±17.29② 34.55±18.77② 20.15±10.47白背葉根中劑量組 0.358 0.16±0.02 21.42±8.34② 42.45±14.44① 34.96±13.64① 21.08±15.32白背葉根低劑量組 0.179 0.17±0.03 32.14±11.49 48.07±15.28 37.78±10.66 25.35±13.20組 別 劑量（g/kg）給藥前足趾體積（ml）

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