鄧德英， 張宏偉， 吳瑞環(huán)， 張振凌， 李 雅

（河南中醫(yī)學(xué)院/呼吸疾病診療與新藥研發(fā)河南省協(xié)同創(chuàng)新中心，河南鄭州450008）

千金子種子、種仁及種皮中重金屬測定

鄧德英， 張宏偉， 吳瑞環(huán)， 張振凌*， 李 雅

（河南中醫(yī)學(xué)院/呼吸疾病診療與新藥研發(fā)河南省協(xié)同創(chuàng)新中心，河南鄭州450008）

目的比較千金子種子、種仁及種皮中重金屬含有量，進(jìn)一步確定千金子去皮殼的意義。方法原子吸收法測定千金子種子、種仁和種皮中重金屬元素含有量。其中銅用火焰原子吸收法 （FAAS），鉛、砷、鎘采用石墨爐原子吸收法 （GFAAS），汞用冷吸收法 （HGAAS）測定。結(jié)果不同批次千金子種皮中銅、鎘、鉛、砷、汞的量均高于種仁中量。結(jié)論千金子凈制去殼具有一定合理性。

千金子；重金屬；凈制去殼；炮制工藝

千金子藥材來源為大戟科Euphorbiaceae植物續(xù)隨子Euphorbia lathyris L.的干燥成熟種子［1］。歷代炮制有 “去殼”、 “去殼，研”、 “去殼，紙裹壓去油”等方法炮制，均要求除去種皮后應(yīng)用［2］。查閱了37部古代炮制相關(guān)著作，其中有34部要求 “去殼”炮制操作［3］，而現(xiàn)今對于千金子去皮的合理性確有爭議，李英霞等［4］通過測定比較種仁與種皮中脂肪油含有量及其組成、總香豆素含有量否定了去殼操作的合理性；而李群［5］通過對千金子種皮得率、脂肪油含有量及理化常數(shù)對比、總?cè)艹龀煞郑?］、秦皮乙素和秦皮甲素含有量對比［7］，認(rèn)為千金子凈制去殼是必要的。本研究利用原子吸收分光光度法［8-10］進(jìn)一步測定千金子種子、種仁及種皮中重金屬含有量，研究去種皮后應(yīng)用凈制的意義。

1 儀器與材料

1.1 儀器 Aanalyst 800原子吸收分光光度計（美國珀金埃爾默公司）；Milli-Q超純水發(fā)生器（美國密理博公司）；MARS-5微波消解儀 （美國培安公司）；AE240電子分析天平 （瑞士梅特勒-托利多公司）；BS210S電子天平 （北京賽多利斯天平公司）；鉛、銅、鐵、鎘、錳、鈣、鎂、鉀、鋅空心陰極燈，汞、砷無極放電燈 （美國）；電爐。

1.2 試藥 鉛 （Pb）、汞 （Hg）、砷 （As）、銅（Cu）、鎘 （Cd）標(biāo)準(zhǔn)液，批號分別為：GSB04-1742-2004，GSB04-1729-2004，GSB04-1714-2004，GSB04-1725-2004，GSB 04-1721-2004（國家有色金屬及電子材料分析測試中心），質(zhì)量濃度均為1 000μg/mL；實驗用水為去離子水；氫氧化鈉、硝酸為優(yōu)級純；過氧化氫為分析純；硼氫化鈉、硝酸鎳為光譜純；玻璃器皿用前用30%硝酸浸泡過夜，然后去離子水沖干凈，烘干，備用。

2 方法與結(jié)果

2.1 樣品的處理

2.1.1 測定鉛 （Pb）、銅 （Cu）、砷 （As）、鎘（Cd）的樣品處理 分別取千金子種子、種仁及種皮樣品粉末0.3 g（3批供試樣品，批號分別為20110707、20100330、20110912），精確稱量，置于消解罐中，加入2 mL過氧化氫，6 mL濃硝酸置入微波消解儀中，按表1中程序進(jìn)行微波消解［11-12］，待程序結(jié)束，消解罐冷卻后，取出，開啟罐蓋，用少量去離子水清洗消解罐蓋子和內(nèi)壁，在電爐上濃縮溶液至約1 mL，冷卻后，移入量瓶中，去離子水定容至50 mL，作為測定鉛 （Pb）、銅（Cu）、砷 （As）、鎘 （Cd）元素的供試品溶液。隨同試樣做2份空白對照。

表1 微波消解程序Tab.1 M icrowave digestion procedure

2.1.2 測定汞（Hg）的樣品處理 按照“2.1.1”項下方法進(jìn)行消解制備千金子種子、種仁及種皮樣品溶液，將溶液移入量瓶中，用去離子水定容至50 mL，作為測定汞 （Hg）元素的供試品溶液。隨同試樣做2份空白對照。

2.2 對照品溶液的制備

2.2.1 銅 （Cu）對照品溶液的制備 分別精密量取1 000μg/mL Cu標(biāo)準(zhǔn)液0.05、0.1、0.3、0.5 mL，分別置于100 mL量瓶中，0.5%硝酸溶液定容，即得質(zhì)量濃度分別為0.5、1、3、5μg/mL的對照品溶液。

2.2.2 鉛 （Pb）、鎘 （Cd）、砷 （As）對照品溶液的制備 分別精密量取1 000μg/mL Pb、As、Cd標(biāo)準(zhǔn)液0.1 mL，分別置于100 mL量瓶中，0.5%HNO3溶液定容。分別精密量取5、1、1 m L上述Pb、As、Cd溶液，分別置于100 m L量瓶中，0.5%HNO3溶液定容，即得50μg/L Pb對照品貯備液和10μg/L As、Cd對照品貯備液，再經(jīng)儀器自動稀釋成5、10、20、35、50μg/L Pb對照品溶液，2、4、6μg/L Cd對照品溶液，2、4、6、8、10μg/L As對照品溶液。

2.2.3 汞 （Hg）對照品溶液的制備 精密量取1 000μg/m LHg標(biāo)準(zhǔn)液0.1 m L，置于100 m L量瓶中，0.5%HNO3溶液定容。然后再分別精密量取上述溶液0.1、0.3、0.5、0.7 mL于100 mL量瓶中，0.5%HNO3溶液定容，即得質(zhì)量濃度分別為1、3、5、7μg/L的對照品溶液。

2.3 儀器參數(shù)的設(shè)定 銅用火焰原子吸收法（FAAS）測定［13］，鉛、砷、鎘采用石墨爐原子吸收法（GFAAS）測定，汞用冷吸收法（HGAAS）測定［14］。不同金屬離子設(shè)定不同的儀器工作參數(shù)，見表2、3、4。

表2 FAAS儀器工作參數(shù)表（Cu）Tab.2 Flam parameters of Cu

表3 GFAAS儀器工作參數(shù)表（Pb、Cd、As）Tab.3 Graphite furance parameters of Pb、Cd、As

表4 HGAAS儀器工作參數(shù)表（Hg）Tab.4 Hydride generation-cold parameters of Hg

2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 精密吸取各對照品溶液20μL，按照儀器的操作條件，進(jìn)行測定，以質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)，計算線性回歸方程和相關(guān)系數(shù)見表5。

表5 各元素標(biāo)準(zhǔn)曲線Tab.5 Standard curves of five elements

2.5 方法學(xué)考察

2.5.1 精密度試驗 取上述各對照品溶液，重復(fù)進(jìn)樣5次，測定吸光度，RSD＜3.0%，精密度良好，結(jié)果見表6。

表6 精密度試驗（n=5）Tab.6 Results of precision tests（n=5）

2.5.2 重復(fù)性試驗 分別精密稱取千金子種仁樣品 （批號20110912）5份，每份約0.3 g，按照“2.1”項下方法，制備供試品溶液，精密吸取20 μL，測定，RSD＜3.0%，重復(fù)性良好，結(jié)果見表7。

表7 重復(fù)性試驗（n=5）Tab.7 Results of reproducibility tests（n=5）

2.5.3 加樣回收率試驗 取已知含有量的千金子種仁樣品 （批號20110912）5份，每份約0.15 g，精密稱定，置于消化罐中，加入一定量的Cu、Cd、Pb、As、Hg標(biāo)準(zhǔn)溶液，按照 “2.1”項下方法，制備供試品溶液，各精密吸取 20μL，測定，RSD＜3.0%，準(zhǔn)確度良好，結(jié)果見表8。

表8 加樣回收率試驗（n=5）Tab.8 Results of recovery tests（n=5）

2.6 樣品測定 按照儀器的操作條件，精密吸取各供試品溶液，進(jìn)行測定，計算，結(jié)果見表9。

表9 千金子種子、種仁和種皮重金屬測定結(jié)果Tab.9 Determ ination results of heavy metals contents in seeds，kernel and kind shell of Euphorbiae Semen

根據(jù)上表結(jié)果計算出3個不同批次種皮、種子、種仁重金屬含有量平均值，其中種皮中Cu平均含有量為58.02μg/g，高于種子（44.31μg/g），且二者均高于種仁 （38.24μg/g）；種皮中Cd平均含有量為77.87μg/g，高于種子（29.02μg/g），均高于種仁（1.570μg/g）；種皮中Pb平均含有量為1.280μg/g，高于種子（0.587 6μg/g），均高于種仁（0.269 6μg/g）；種皮中As平均含有量為29.74μg/g，高于種子（5.853μg/g），均高于種仁（-3.044μg/g）；種皮中Hg平均含有量為0.8444μg/g，高于種子（0.651 5μg/g），且均高于種仁（0.434 9μg/g）。

3 討論

千金子的種子、種仁、種皮中，千金子種皮中銅、鎘、鉛、砷、汞5種重金屬的含有量最高，其次是種子的重金屬含有量，最后是種仁的重金屬含有量。因此，千金子凈制去皮具有科學(xué)性。千金子種皮在種子占比例較大，千金子制霜使用摻入種皮影響其外觀性狀和臨床療效，因此在千金子入藥或制霜應(yīng)用時，剝?nèi)シN皮是十分必要的。

中華人民共和國對外貿(mào)易經(jīng)濟(jì)合作部公告2001年第4號文件，藥用植物及制劑進(jìn)出口綠色行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)重金屬限量標(biāo)準(zhǔn)：Cu≤20 mg/kg、Cd≤0.3 mg/kg、Pb≤5.0 mg/kg、As≤2 mg/kg、Hg≤0.2 mg/kg［15］。將其換算為與實驗數(shù)據(jù)相一致的單位為：Cu≤20μg/g、Cd≤0.3μg/g、Pb≤5.0 μg/g、As≤2μg/g、Hg≤0.2μg/g。與3個不同批次種皮、種子、種仁重金屬含有量的平均數(shù)對比顯示：千金子種仁Pb、As含有量均在規(guī)定范圍內(nèi)，雖然千金子種仁中其他重金屬含有量超過規(guī)定標(biāo)準(zhǔn)，但是千金子種皮的重金屬含有量超出標(biāo)準(zhǔn)值最多，種皮中含Cu量約是標(biāo)準(zhǔn)值的2.9倍左右，含Cd量是標(biāo)準(zhǔn)的259.6倍左右，含As量約為標(biāo)準(zhǔn)的14.9倍，含Hg量約為標(biāo)準(zhǔn)的4.2倍。種仁中含Cu量是標(biāo)準(zhǔn)值的1.9倍左右，含Cd量約是標(biāo)準(zhǔn)的5.2倍，含Hg量約為標(biāo)準(zhǔn)的2.2倍。相比較，種仁中重金屬的含有量更接近于標(biāo)準(zhǔn)值，種皮中重金屬的含有量遠(yuǎn)超標(biāo)準(zhǔn)值。因此，凈制去皮能降低千金子中重金屬含有量。

由于千金子種子較小不易剝?nèi)シN皮，在實驗研究過程中考察了傳統(tǒng)手工去殼操作和幾種農(nóng)作物去殼機(jī)械應(yīng)用于千金子去殼操作，傳統(tǒng)手工去殼工作量大，耗費(fèi)大量時間；而機(jī)械操作去皮效率低，均不適合千金子去殼操作。因此需要進(jìn)一步研究較好的去殼設(shè)備應(yīng)用于千金子的去殼操作，以保證千金子炮制的可操作性。

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Determ ination of heavy metals contents in seed，kernel and testa of Euphorbiae Semen

DENG De-ying， ZHANG Hong-wei， WU Rui-huan， ZHANG Zhen-ling*， LIYa
（Collaborative Innovation Center for Respiratory Disease Diagnosis and Treatment&Chinese Medicine Development of Henan Province，Henan University of Traditional Chinese Medicine，Zhengzhou 45008，China）

Euphorbia Semen；heavymetals；net system to shell；process technology

R284.1

：A

：1001-1528（2015）06-1305-04

10.3969/j.issn.1001-1528.2015.06.032

2014-07-28

中醫(yī)藥行業(yè)專項課題 “千金子炮制方法傳承與規(guī)范化應(yīng)用研究”（201107008）

鄧德英，女，實驗師，從事中藥標(biāo)本與質(zhì)量分析研究。E-mail：dengdeying2014@126.com

*通信作者：張振凌，女，教授，博士導(dǎo)師，從事中藥飲片炮制教學(xué)與研究。E-mail：zzlhnzy@126.com