QuEChERS-液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法測定茶葉中10種農(nóng)藥殘留

羅紀(jì)軍

（蚌埠市出入境檢驗(yàn)檢疫局，安徽蚌埠 233000）

摘 要：該文建立了一種液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法（LC-ESI-MS/MS）快速準(zhǔn)確測定茶葉中10種農(nóng)藥殘留含量。通過設(shè)計(jì)一系列實(shí)驗(yàn)對樣品前處理進(jìn)行了優(yōu)化分析研究，茶葉樣品經(jīng)加入適量水活化，乙腈提取，QuEChERS法凈化后，采用HPLC-ESI-MS/MS檢測分析，外標(biāo)法定量。本方法的檢出限為5μg/kg，在0.001～0.2mg/kg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好（相關(guān)系數(shù)r>0.99），茶葉樣品平均添加回收率在75%～95%。該方法簡便、高效、準(zhǔn)確，各項(xiàng)技術(shù)指標(biāo)均能滿足國內(nèi)外有關(guān)茶葉中農(nóng)藥殘留限量要求，能夠用于茶葉中10種農(nóng)藥殘留的定性定量分析。

關(guān)鍵詞：QuEChERS；農(nóng)藥殘留；高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜

中圖分類號 S517.1 文獻(xiàn)標(biāo)識碼 A 文章編號 1007-7731（2014）24-132-03

Determination of Multi-residue of Pesticide in Vegetables by QuEChERS-HPLC-MS/MS

Luo Jijun

（Bengbu Entry-exit Inspection and Quarantine Bureau，Bengbu 233000，China）

Abstract：A new method using of ultra-performance liquid chromatography-electrospray ionization tandem mass spectrometry for the analysis of multi-residue of pesticide has been developed.Sample preparation and HPLC-MS/MS analytical conditions are examined and optimized critically by use of a series of experiments in this study.Samples are extracted by acetonitrile，then cleaned up，and ultimately adopted LC-ESI-MS/MS method for qualitative and quantitative analysis .Limits of quantification（LOQ）and limits of detection（LOD）was 1μg/kg.The method showed good linearity（r>0.99）；The average recoveries were from 70% to 75% .The method is simple，efficient，sensitive，accurate and can meet the requirements of determination for residue of pesticide in vegetables.

Key words：QuEChERS；Pesticide residues；LC-ESI-MS/MS

進(jìn)入21世紀(jì)以來，隨著全球工業(yè)化進(jìn)程的飛速發(fā)展和人口的急劇增加，農(nóng)藥已被廣泛應(yīng)用于農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中。但由于當(dāng)前農(nóng)藥的生產(chǎn)和使用范圍管理制度仍不太完善，高毒農(nóng)藥生產(chǎn)和使用沒有得到有效合理的控制，濫用農(nóng)藥現(xiàn)象仍廣泛存在且比較嚴(yán)重，造成了各種農(nóng)產(chǎn)品中的農(nóng)藥殘留超標(biāo)問題。近年來不斷有媒體報(bào)道了茶葉中存在的農(nóng)藥殘留問題，這也反映出人們對茶葉中的農(nóng)藥殘留問題越來越受關(guān)注[1]。

當(dāng)前，國家對農(nóng)藥殘留問題越來越重視，也在不斷完善農(nóng)藥的生產(chǎn)和使用管理制度。而建立快速、準(zhǔn)確、高效的農(nóng)藥殘留分析檢測技術(shù)，可以為監(jiān)控農(nóng)藥殘留提供技術(shù)支持，目前檢測茶葉中農(nóng)藥殘留的方法主要有氣相色譜、液相色譜等。由于茶葉中基質(zhì)復(fù)雜，多達(dá)數(shù)百種化學(xué)成分，因此對茶葉中農(nóng)藥多殘留檢測分析研究，已經(jīng)成為國際上食品安全檢測技術(shù)研究的難點(diǎn)和熱點(diǎn)。目前廣泛使用的前處理方法主要有溶劑提取、固相萃取，但都存在操作過程復(fù)雜，使用大量有機(jī)溶劑等問題；此外，有機(jī)溶劑價(jià)格昂貴、易揮發(fā)、不穩(wěn)定，易對人類健康和環(huán)境產(chǎn)生不利影響。

QuEChERS（QuEChERS來源于Quick、Easy、Cheap、Effective、Rugged and Safe的縮寫，即為“快速、簡易、廉價(jià)、有效、穩(wěn)定、安全”的萃取方法）前處理方法簡易快捷，在各領(lǐng)域農(nóng)藥分析中的應(yīng)用日益增多，但大部分報(bào)道都是利用氣質(zhì)方法對農(nóng)藥殘留進(jìn)行檢測分析，而針對茶葉中農(nóng)藥殘留液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法檢測的研究報(bào)道并不多[2-3]。為此，本文擬建立一種快速準(zhǔn)確測定茶葉中10種農(nóng)藥殘留含量的液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法，為茶葉中農(nóng)藥殘留的監(jiān)控提供有力的技術(shù)支持。

1 材料與方法

1.1 主要儀器和試劑 液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀（6490 Triple Quad LC/MS，美國安捷倫公司）；離心機(jī)（HERMLE Z-323 K，德國）；氮吹儀（Organomation Associates，Jnc，美國）；超聲波清洗器（KQ5200 DE，昆山市超聲儀器有限公司）；混勻器：（IKA MS 3basic，德國）；Milli-Q去離子水發(fā)生器（Millipore公司，美國）。甲醇、乙腈、甲酸（色譜純，TEDIA，USA）；試驗(yàn)用水為Milli-Q去離子高純水；有機(jī)微孔過濾膜（孔徑0.22μm）；50mL聚丙烯離心管；多菌靈、吡蟲啉、啶蟲脒、氯唑磷、滅多威、克百威、涕滅威、甲萘威、抗蚜威和殘殺威等10種農(nóng)藥的標(biāo)準(zhǔn)品溶液均購于農(nóng)業(yè)部環(huán)境保護(hù)檢測所。endprint

1.2 樣品前處理

1.2.1 提取 稱取0.5g粉碎茶葉試樣（精確至0.01g）于10mL具塞塑料離心管中，加入2mL水浸泡2h，再加入2mL乙腈，室溫下水浴超聲20min后，加入2g氯化鈉，10 000r/min離心10min待凈化。

1.2.2 凈化 有機(jī)相中取1mL加入含有150mg無水硫酸鈉、25mg PSA粉末和25mg C18固相吸附劑的2mL離心管中，渦旋后10 000r離心2min。取0.5mL上清液加入0.5mL 0.1%甲酸溶液混勻，過0.22μm有機(jī)相濾膜后供LC-MS分析。

1.3 儀器分析條件

1.3.1 液相色譜條件 色譜柱：Agilent ZORBAX SB C18柱，1.8μm，50mm×2.1mm（內(nèi)徑）或相當(dāng)者；柱溫：35℃；流速：0.30mL/min；進(jìn)樣量：10μL；流動相：A，0.1%甲酸水溶液；B，乙腈；梯度洗脫條件見表1。

表1 流動相及梯度洗脫條件

[時間（min）＼&流速（mL/min）＼&A（%）＼&B（%）＼&0＼&0.3＼&90＼&10＼&1＼&0.3＼&80＼&20＼&3＼&0.3＼&60＼&40＼&5＼&0.3＼&40＼&60＼&5.01＼&0.3＼&10＼&90＼&7＼&0.3＼&10＼&90＼&7.01＼&0.3＼&90＼&10＼&9.00＼&0.3＼&90＼&10＼&]

1.3.2 質(zhì)譜分析條件 離子源：電噴霧離子源（ESI+）；掃描方式：正離子掃描；檢測方式：多反應(yīng)監(jiān)測模式；干燥氣溫度：300℃；干燥氣流速：10L/min；霧化器壓力；40psi；毛細(xì)管電壓：3 000V；對于所有的目標(biāo)化合物，其最佳的碰撞電壓以及相應(yīng)的定性離子對、定量離子對、保留時間及碰撞能量見表2。

表2 多反應(yīng)監(jiān)測（MRM）條件

[農(nóng)藥中文

名稱＼&英文

名稱＼&監(jiān)測

離子對＼&錐孔電壓

（eV）＼&碰撞電壓

（eV）＼&滅多威＼&Thiodicarb ＼&163.2>106＼&380＼&5＼&163.2>88＼&380＼&10＼&克百威＼&Carbofuran＼&222.2>165.2＼&380＼&15＼&222.2>123＼&380＼&25＼&涕滅威＼&Aldicarb＼&213>98＼&380＼&5＼&213>89＼&380＼&10＼&甲萘威＼&Carbaryl＼&202.1>145.1＼&380＼&5＼&202.1>127.1＼&380＼&20＼& 氯唑磷＼&Isazofos＼&314>162＼&380＼&10＼&314>120＼&380＼&20＼& 吡蟲啉＼&Imidacloprid＼&256>209＼&380＼&10＼&256>1175＼&380＼&15＼&抗蚜威＼&Pirimicarb＼&239.2>182.1＼&380＼&15＼&239.2>71.9＼&380＼&20＼&啶蟲脒＼&Acetamiprid＼&223.2>126＼&380＼&15＼&223.2>56.1＼&380＼&20＼&殘殺威＼&Propoxur＼&210.1>168.1＼&380＼&5＼&210.1>111＼&380＼&10＼&多菌靈＼&Carbendazim＼&192.1>160.1＼&380＼&15＼&192.1>132.1＼&380＼&30＼&]

2 結(jié)果與分析

2.1 樣品提取條件優(yōu)化 本方法研究的是茶葉中農(nóng)藥殘留的測定，傳統(tǒng)方法和文獻(xiàn)報(bào)道較多的提取溶劑有丙酮、石油醚、二氯甲烷等或者它們的混合溶劑。通過對比試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，用丙酮提取時，提取雜質(zhì)較多，需要凈化步驟多；而用乙腈提取，雜質(zhì)少，凈化簡單。針對QuEChERS方法的商品化的凈化管種類比較多，在參考其他文獻(xiàn)的基礎(chǔ)上最終選擇了含有150mg無水硫酸鈉、25mg PSA粉末和25mg C18固相吸附劑的2mL商品化離心管，經(jīng)過加標(biāo)實(shí)驗(yàn)?zāi)軌驖M足檢驗(yàn)要求。因此本試驗(yàn)選擇商品化凈化管直接凈化，這樣就省去了稱取凈化管中所需試劑的時間，大幅縮短了實(shí)驗(yàn)時間，提高檢驗(yàn)效率。

2.2 儀器條件的選擇 在液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜分析中，色譜的分離和質(zhì)譜數(shù)據(jù)的采集是同時進(jìn)行的。為了使每個組分都能夠得到有效分離和鑒定，以便獲得最大的靈敏度，要選擇合適的液相和質(zhì)譜分析條件，特別是質(zhì)譜條件。色譜條件有色譜柱類型、流動相組成、流動相大小、柱溫、進(jìn)樣體積等。質(zhì)譜條件有離子源、離子化模式、離子源溫度、霧化氣流量、質(zhì)量掃描范圍、檢測模式等。這些都要根據(jù)目標(biāo)物的情況進(jìn)行優(yōu)化分析，得出最優(yōu)的儀器條件，獲得高靈敏度。MRM色譜見圖1。

圖1 標(biāo)準(zhǔn)樣品多反應(yīng)監(jiān)測（MRM）色譜（濃度為20μg/L）

2.3 線性關(guān)系、回收率、精密度與檢出限 按照優(yōu)化好的測定條件，配制一系列不同濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行測定，以各組分定量離子的峰面積和濃度繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線，線性關(guān)系和相關(guān)系數(shù)見表3。結(jié)果表明，在0.001～0.2mg/kg范圍內(nèi)，10種農(nóng)藥質(zhì)量濃度和定量離子的峰面積有良好的線性關(guān)系。采用在空白樣品中添加標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的方法，分別對不同茶葉樣品中10種農(nóng)藥殘留進(jìn)行6個水平的回收率實(shí)驗(yàn)，每個水平進(jìn)行6次重復(fù)實(shí)驗(yàn)，平均相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為2.78%～5.26%。10種農(nóng)藥殘留的檢出限均為5μg/kg。

表3 10種農(nóng)藥在茶葉樣品中的線性關(guān)系、添加回收率、RSD和檢出限

[農(nóng)藥

名稱＼&回收率（%）＼&精密

度（RSD）＼&檢出限（μg/kg）＼&線性

范圍

（mg/kg）＼&線性

方程

Y=ax+b＼&相關(guān)

系數(shù)

R2＼&滅多威＼&71＼&3.17＼&5＼&0.001～0.2＼&Y=20571x+17949＼&0.9982＼&克百威＼&75＼&4.23＼&5＼&0.001～0.2＼&Y=136208x+248344＼&0.9931＼&涕滅威＼&70＼&4.37＼&5＼&0.001～0.2＼&Y=5687x-1063＼&0.9890＼&甲萘威＼&71＼&2.78＼&5＼&0.001～0.2＼&Y=24836x+46562＼&0.9870＼&氯唑磷＼&72＼&2.45＼&5＼&0.001～0.2＼&Y=541614x+1739345＼&0.9714＼&吡蟲啉＼&74＼&4.56＼&5＼&0.001～0.2＼&Y=34687x+46800＼&0.9965＼&抗蚜威＼&80＼&5.12＼&5＼&0.001～0.2＼&Y=196819x-36663＼&0.9999＼&啶蟲脒＼&85＼&3.58＼&5＼&0.001～0.2＼&Y=147407x+118856＼&0.9973＼&殘殺威＼&76＼&4.63＼&5＼&0.001～0.2＼&Y=62725x+125106＼&0.9912＼&多菌靈＼&83＼&5.26＼&5＼&0.001～0.2＼&Y=559413x-250567＼&0.9999＼&]

3 結(jié)論

本文建立了一種液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜（HPLC-ESI-MS/MS）法快速、準(zhǔn)確測定了茶葉中10種農(nóng)藥殘留。該方法與傳統(tǒng)方法相比較起來，具有快速、靈敏、準(zhǔn)確和操作簡單的特點(diǎn)，能夠很好的應(yīng)用于各種茶葉中的農(nóng)藥殘留分析檢測，從而為茶葉中農(nóng)藥殘留的有效監(jiān)控提供了技術(shù)支持。

參考文獻(xiàn)

[1]顧亮，丁磊.液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法測定茶葉中氨基甲酸酯類物質(zhì)研究[J].現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技，2012，15：286-287.

[2]郭春景，王建忠，郝曉莉.利用QuEChERS法測定甘藍(lán)、草莓中7種農(nóng)藥殘留的實(shí)驗(yàn)條件優(yōu)化探索[J].質(zhì)譜學(xué)報(bào)，2013，2（34）：121-127.

[3]王連珠，周星，黃小燕，等.基于QuEChERS提取方法優(yōu)化的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定蔬菜中51種氨基

甲酸酯類農(nóng)藥殘留[J].色譜，2013，12（31）：1167-1175.

（責(zé)編：張宏民）endprint

Y=ax+b＼&相關(guān)

系數(shù)

R2＼&滅多威＼&71＼&3.17＼&5＼&0.001～0.2＼&Y=20571x+17949＼&0.9982＼&克百威＼&75＼&4.23＼&5＼&0.001～0.2＼&Y=136208x+248344＼&0.9931＼&涕滅威＼&70＼&4.37＼&5＼&0.001～0.2＼&Y=5687x-1063＼&0.9890＼&甲萘威＼&71＼&2.78＼&5＼&0.001～0.2＼&Y=24836x+46562＼&0.9870＼&氯唑磷＼&72＼&2.45＼&5＼&0.001～0.2＼&Y=541614x+1739345＼&0.9714＼&吡蟲啉＼&74＼&4.56＼&5＼&0.001～0.2＼&Y=34687x+46800＼&0.9965＼&抗蚜威＼&80＼&5.12＼&5＼&0.001～0.2＼&Y=196819x-36663＼&0.9999＼&啶蟲脒＼&85＼&3.58＼&5＼&0.001～0.2＼&Y=147407x+118856＼&0.9973＼&殘殺威＼&76＼&4.63＼&5＼&0.001～0.2＼&Y=62725x+125106＼&0.9912＼&多菌靈＼&83＼&5.26＼&5＼&0.001～0.2＼&Y=559413x-250567＼&0.9999＼&]

3 結(jié)論

本文建立了一種液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜（HPLC-ESI-MS/MS）法快速、準(zhǔn)確測定了茶葉中10種農(nóng)藥殘留。該方法與傳統(tǒng)方法相比較起來，具有快速、靈敏、準(zhǔn)確和操作簡單的特點(diǎn)，能夠很好的應(yīng)用于各種茶葉中的農(nóng)藥殘留分析檢測，從而為茶葉中農(nóng)藥殘留的有效監(jiān)控提供了技術(shù)支持。

參考文獻(xiàn)

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[2]郭春景，王建忠，郝曉莉.利用QuEChERS法測定甘藍(lán)、草莓中7種農(nóng)藥殘留的實(shí)驗(yàn)條件優(yōu)化探索[J].質(zhì)譜學(xué)報(bào)，2013，2（34）：121-127.

[3]王連珠，周星，黃小燕，等.基于QuEChERS提取方法優(yōu)化的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定蔬菜中51種氨基

甲酸酯類農(nóng)藥殘留[J].色譜，2013，12（31）：1167-1175.

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Y=ax+b＼&相關(guān)

系數(shù)

R2＼&滅多威＼&71＼&3.17＼&5＼&0.001～0.2＼&Y=20571x+17949＼&0.9982＼&克百威＼&75＼&4.23＼&5＼&0.001～0.2＼&Y=136208x+248344＼&0.9931＼&涕滅威＼&70＼&4.37＼&5＼&0.001～0.2＼&Y=5687x-1063＼&0.9890＼&甲萘威＼&71＼&2.78＼&5＼&0.001～0.2＼&Y=24836x+46562＼&0.9870＼&氯唑磷＼&72＼&2.45＼&5＼&0.001～0.2＼&Y=541614x+1739345＼&0.9714＼&吡蟲啉＼&74＼&4.56＼&5＼&0.001～0.2＼&Y=34687x+46800＼&0.9965＼&抗蚜威＼&80＼&5.12＼&5＼&0.001～0.2＼&Y=196819x-36663＼&0.9999＼&啶蟲脒＼&85＼&3.58＼&5＼&0.001～0.2＼&Y=147407x+118856＼&0.9973＼&殘殺威＼&76＼&4.63＼&5＼&0.001～0.2＼&Y=62725x+125106＼&0.9912＼&多菌靈＼&83＼&5.26＼&5＼&0.001～0.2＼&Y=559413x-250567＼&0.9999＼&]

3 結(jié)論

本文建立了一種液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜（HPLC-ESI-MS/MS）法快速、準(zhǔn)確測定了茶葉中10種農(nóng)藥殘留。該方法與傳統(tǒng)方法相比較起來，具有快速、靈敏、準(zhǔn)確和操作簡單的特點(diǎn)，能夠很好的應(yīng)用于各種茶葉中的農(nóng)藥殘留分析檢測，從而為茶葉中農(nóng)藥殘留的有效監(jiān)控提供了技術(shù)支持。

參考文獻(xiàn)

[1]顧亮，丁磊.液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法測定茶葉中氨基甲酸酯類物質(zhì)研究[J].現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技，2012，15：286-287.

[2]郭春景，王建忠，郝曉莉.利用QuEChERS法測定甘藍(lán)、草莓中7種農(nóng)藥殘留的實(shí)驗(yàn)條件優(yōu)化探索[J].質(zhì)譜學(xué)報(bào)，2013，2（34）：121-127.

[3]王連珠，周星，黃小燕，等.基于QuEChERS提取方法優(yōu)化的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定蔬菜中51種氨基

甲酸酯類農(nóng)藥殘留[J].色譜，2013，12（31）：1167-1175.

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