譚力學(xué)，張東常，邱小麗，陽愛芳，丁淑敏，羅文靜(東莞市常平人民醫(yī)院消化科，廣東 東莞 523573)

IL-2基因啟動子區(qū)域T-384G基因多態(tài)性與中國漢族人腸易激綜合征的關(guān)系

譚力學(xué)，張東常，邱小麗，陽愛芳，丁淑敏，羅文靜(東莞市常平人民醫(yī)院消化科，廣東 東莞 523573)

目的 探討IL-2基因啟動子區(qū)域T-384G基因多態(tài)性與腸易激綜合征(irritable bowel syndrome，IBS)及其血清IL-2水平的關(guān)系。方法 采用病例-對照研究方法納入IBS患者(IBS組，n=213)及年齡、性別相匹配的健康人群(對照組，n=213)。以聚合酶鏈反應(yīng)-限制性內(nèi)切酶片段長度(PCR-RFLP)方法分析2組IL-2基因啟動子區(qū)域T-384G基因多態(tài)性。以酶聯(lián)免疫吸附方法(ELISA)測定2組血清IL-2水平。結(jié)果 IBS組及對照組TT、TG及GG基因型分布頻數(shù)分別為77、100、36及115、86、12。IBS組GG基因分布顯著高于對照組(P<0.05)。GG基因型人群血清IL-2水平顯著高于TT+TG(P<0.05)。結(jié)論 GG基因型是IBS易患基因，可能與其具有較高的IL-2表達水平有關(guān)。

腸易激綜合征； IL-2; 基因多態(tài)性; GG基因型

腸易激綜合征(irritable bowel syndrome，IBS)是以腹痛、腹脹、排便習(xí)慣和(或)糞便改變的持續(xù)或間歇發(fā)作的一組臨床綜合征。臨床癥狀出現(xiàn)而缺乏胃腸道結(jié)構(gòu)和生化異常的腸道功能紊亂性疾病。根據(jù)主要癥狀可分為腹瀉型、便秘型及腹瀉便秘交替型。IBS發(fā)病機制雖未被闡明，但在IBS患者中，無論外周血或腸黏膜均存在Th1/Th2漂移現(xiàn)象，即Th1細胞因子增多而Th2細胞因子減少[1]。因此，Th1細胞因子的改變可能與IBS發(fā)病機制有關(guān)。

白細胞介素-2(IL-2)主要由Th1細胞激活后分泌，因此是主要的Th1細胞因子之一。有研究[2]表明，感染后的IBS患者結(jié)腸黏膜IL-2水平升高而非感染后IBS患者IL-2水平無變化；活動期IBS患者結(jié)腸黏膜IL-2表達增強。由此推斷，IL-2水平可能是IBS發(fā)病的重要因素之一。IL-2基因啟動子區(qū)域存在單核苷酸基因多態(tài)性，而這些多態(tài)性改變可能直接提高IL-2的表達強度。這些基因多態(tài)性與IBS相關(guān)性目前少見報道，本研究旨在通過病例-對照研究觀察IL-2基因多態(tài)性在IBS與對照人群中的差異，探討IL-2基因多態(tài)性是否與IBS發(fā)病有關(guān)，旨在為IBS的診斷提供更多的思路。

1 對象與方法

1.1 對象

選取2010年1月至2014年11月經(jīng)東莞市常平人民醫(yī)院及中山大學(xué)孫逸仙紀念醫(yī)院診斷為成人IBS患者213例(IBS組)。均符合羅馬Ⅲ診斷標(biāo)準(zhǔn)。排除標(biāo)準(zhǔn)：1)明確感染，包括全身各系統(tǒng)細菌、病毒或真菌感染，如呼吸道、消化道及泌尿系統(tǒng)感染等；2)自身免疫系統(tǒng)疾?。?)擴張型心肌?。?)哮喘；5)惡性腫瘤及其他系統(tǒng)疾病。對照組(n=213)為年齡、性別相匹配的同期健康體檢者。入選對象均為出生并生長于中國的漢族人。

1.2 方法

1.2.1 基因組DNA的提取

留取受試者靜脈血2 mL，以酚-氯仿法抽提基因組DNA并置于-80 ℃待用。

1.2.2 基因分型

采用文獻[3]方法使用限制性內(nèi)切酶片段長度(RFLP)方法分析IL-2基因啟動子區(qū)域T-384G多態(tài)性。使用文獻引物以聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)擴增包含IL-2基因啟動子區(qū)域T-384G多態(tài)位點在內(nèi)的核苷酸片斷，后以相應(yīng)內(nèi)切酶進行酶切，最后以聚丙烯酰胺凝膠電泳區(qū)分不同長度擴增產(chǎn)物以判斷基因分型。PCR所使用引物如下：正向引物：5′-ATTCACATGGTTCAGTGTAGTTCT-3′；反向引物：5′-GTGATAGCTCTAATTCATGC-3′。

1.2.3 血清IL-2水平的檢測

留取受試者血清1 mL后置于-80 ℃待測。使用酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)方法檢測血清IL-2水平。檢測過程按照試劑盒(R&D公司，美國)說明進行。

1.2.4 統(tǒng)計學(xué)方法

通過凝膠電泳結(jié)果直接判斷入選對象基因型后，以頻數(shù)表示2組基因型分布并計算等位基因頻率。以Hardy-Weinberg平衡檢驗確認對照組人群代表性。計量資料采用(均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差)表示，2組間比較采用成組t檢驗，3組間比較采用方差分析；計數(shù)資料采用頻數(shù)表示，以卡方檢驗判斷組間差異。P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 納入人群一般資料

IBS組213例，男103例，女110例；年齡(36.32±13.66)歲；除IBS疾病本身外，不合并其他系統(tǒng)疾病。對照組213例，男108例，女105例，年齡(35.76±12.99)歲，年齡、性別與IBS組匹配。入選對象均為長期居住在廣東省內(nèi)的中國漢族人。

2.2 IL-2基因T-384G多態(tài)性分析

T-384G基因多態(tài)性基因分型結(jié)果見圖1。TT及GG純合子條帶分別分布在131 bp及109 bp位置，而雜合子具有109及131兩條帶。

圖1 PCR-RFLP分析IL-2基因啟動子區(qū)域T-384G基因多態(tài)性位點

IL-2基因T-384G多態(tài)性在2組的分布詳見表1。對照組基因型分布符合Hardy-Weinberg平衡(P=0.43)，提示對照組人群的選取具有代表性。由表1可知，采用顯性遺傳模型[4](TT+TG 比GG)統(tǒng)計后發(fā)現(xiàn)IBS組患者GG基因型分布顯著高于對照組(P<0.01)。

表1 2組基因型分布 例

*P<0.01與對照組比較。#:顯性遺傳模型。

2.3 不同基因型血清IL-2水平

不同基因型血清IL-2水平詳見表2。由表2可知，無論是健康對照人群還是IBS患者，GG基因型人群IL-2水平均明顯高于TT+TG基因型人群(P<0.05);同時，IBS患者血清IL-2水平明顯高于對照組(P<0.05)。

表2 不同基因型血清IL-2水平 ρ/(ng·L-1)

數(shù)據(jù)以中位數(shù)及四分位數(shù)表示。#:顯性遺傳模型。*P<0.05與IBS組比較；△P<0.05與同組GG基因型比較。

3 討論

IBS發(fā)病機制未明，IL-2水平異常與IBS的關(guān)系已受到一定關(guān)注。本研究采用病例-對照研究方法，檢測IBS患者與健康人群IL-2基因啟動子區(qū)域基因型差別，結(jié)果發(fā)現(xiàn)IL-2基因啟動子區(qū)域G-384T基因多態(tài)性可能影響IBS發(fā)病，而GG基因型則可能是IBS的易患基因。同時，GG基因型具有更高的IL-2水平。鑒于IL-2高水平與IBS的關(guān)系，推測IL-2基因啟動子區(qū)域基因多態(tài)性有可能通過增強IL-2表達從而促進IBS發(fā)生。

基因多態(tài)性與IBS發(fā)病關(guān)系近期受到廣泛關(guān)注，且輔助性T細胞異常與IBS發(fā)生已得到眾多學(xué)者重視[5]。多量研究[6-7]顯示Th1細胞、Th2細胞及調(diào)節(jié)性T細胞異常均可能參與IBS發(fā)病。而多個與細胞免疫相關(guān)的細胞因子或炎癥因子的基因多態(tài)性與IBS發(fā)病關(guān)系密切。Barkhordari 等[8]以病例-對照研究方法，納入210例伊朗人(IBS組70例，對照組140例)，證實了Th2細胞因子IL-4與Trge細胞因子IL-10基因多態(tài)性位點與IBS發(fā)病有關(guān)；爾后Shiotani 等[9]研究結(jié)果亦顯示IL-10基因多態(tài)性與IBS發(fā)病相關(guān)，而作為Th1細胞因子的IL-2基因中G-330T及G166T多態(tài)現(xiàn)象均未顯示出與IBS的關(guān)系。本研究結(jié)果顯示，同位于IL-2基因啟動子區(qū)域的G-384T與IBS發(fā)病有關(guān)，且與高IL-2水平有關(guān)。筆者認為，除了納入對象及遺傳背景差異外，啟動子區(qū)域的不同位點的多態(tài)改變對IL-2水平的影響可能也是導(dǎo)致研究間結(jié)論差異的重要原因。

位于啟動子區(qū)域內(nèi)的基因改變可能改變基因轉(zhuǎn)錄活性已得到公認，眾多細胞因子位于啟動子區(qū)域內(nèi)的基因多態(tài)現(xiàn)象可改變其蛋白水平。但就IL-2基因多態(tài)性而言，Peng等[10]研究發(fā)現(xiàn)，啟動子區(qū)域內(nèi)T-384G基因多態(tài)性并不改變血清IL-2水平，這與本研究結(jié)論相悖。造成這種差異最可能Peng等[10]納入的為中國壯族人群，而本研究納入的為中國漢族人群。因此，壯族與漢族人群之間的遺傳背景差異是否影響最后的結(jié)論，還需進一步研究。

綜上所述，IL-2基因啟動子區(qū)域內(nèi)T-384G與IBS發(fā)病有關(guān)，這種關(guān)聯(lián)可能與其改變了IL-2表達水平有關(guān)。但本研究至少具有以下局限性：1)納入例數(shù)偏少，可能導(dǎo)致人群選擇偏倚而對結(jié)論造成影響；2)并未綜合IL-2基因其他已知的多態(tài)性位點與IBS關(guān)系進行單倍型分析，可能損失其他多態(tài)性位點對IBS發(fā)病貢獻的信息。期待今后更多的單倍型研究以全面揭示IL-2基因多態(tài)性與IBS的關(guān)聯(lián)。

[1] Chen J,Zhang Y,Deng Z.Imbalanced shift of cytokine expression between T helper 1 and T helper 2(Th1/Th2) in intestinal mucosa of patients with post-infectious irritable bowel syndrome[J].BMC Gastroenterol,2012,12:91.

[2] 魏良洲，鞠輝，戴素美，等.感染后腸易激綜合征患者結(jié)腸黏膜P物質(zhì)與白細胞介素、干擾素表達的相關(guān)性研究[J].中華消化雜志，2006，26(9)：586-589.

[3] Chen Z,Bouamar R,Van Schaik R H,et al.Genetic polymorphisms in IL-2,IL-10,TGF-beta1,and IL-2RB and acute rejection in renal transplant patients[J].Clin Transplant,2014,28(6):649-655.

[4] Klug S J,Ressing M,Koenig J,et al.TP53 codon 72 polymorphism and cervical cancer:a pooled analysis of individual data from 49 studies[J].Lancet Oncol,2009,10(8):772-784.[5] Ek W E,Reznichenko A,Ripke S,et al.Exploring the genetics of irritable bowel syndrome:a GWA study in the general population and replication in multinational case-control cohorts[J].Gut,2014.[Epub ahead of print].

[6] 徐超，宋海峰，王光陸.炎性腸病腸道免疫學(xué)的研究進展[J].中國普外基礎(chǔ)與臨床雜志，2011，18(10)：1122-1126.

[7] 陳吉，張陽德.腸易激綜合征患者Th細胞表型改變研究[J].中國內(nèi)鏡雜志，2011，17(3)：235-239.

[8] Barkhordari E,Rezaei N,Mahmoudi M,et al.T-helper 1,T-helper 2,and T-regulatory cytokines gene polymorphisms in irritable bowel syndrome[J].Inflammation,2010,33(5):281-286.[9] Shiotani A,Kusunoki H,Kimura Y,et al.S100A expression and interleukin-10 polymorphisms are associated with ulcerative colitis and diarrhea predominant irritable bowel syndrome[J].Dig Dis Sci,2013,58(8):2314-2323.

[10] Peng Qiliu,Li Haiwei,Lao Xianjun,et al.Association of IL-2 polymorphisms and IL-2 serum levels with susceptibility to HBV-related hepatocellular carcinoma in a Chinese Zhuang population[J].Infect Genet Evol,2014,27:375-381.

(責(zé)任編輯：羅芳)

Association between IL-2 T-384G Polymorphisms and Irritable Bowel Syndrome in Chinese Han Population

TAN Li-xue,ZHANG Dong-chang,QIU Xiao-li,YANG Ai-fang,DING Shu-min,LUO Wen-jing(DepartmentofGastroenterology,ChangpingPeople’sHospitalofDongguan,Dongguan523573,China)

Objective To explore the relationships of promoter region T-384G polymorphisms of interleukin-2(IL-2) gene to irritable bowel syndrome(IBS) and serum IL-2 levels.Methods A case-control study was carried out,and 213 IBS patients and 213 age- and sex-matched healthy controls were recruited in this study.IL-2 T-384G polymorphisms and serum IL-2 levels were determined by PCR-RFLP and ELISA,respectively.Results The frequencies of TT,TG and GG genotypes were,respectively,77,100 and 36 in IBS group,and 115,86 and 12 in control group.Compared with control group,the frequency of GG genotype significantly increased in IBS group(P<0.05).Compared with TT+TG carriers,serum IL-2 levels significantly increased in GG carriers(P<0.05).Conclusion GG genotype,a susceptible gene of IBS,is associated with higher levels of serum IL-2.

irritable bowel syndrome; interleukin-2; polymorphisms; GG genotype

2015-01-04

國家自然科學(xué)基金(81300071)；東莞市醫(yī)療衛(wèi)生科技計劃項目(201410515000336)

譚力學(xué)(1969—)，男，碩士，副主任醫(yī)師，主要從事功能性胃腸病的診治研究。

R574

A

1009-8194(2015)09-0001-03

10.13764/j.cnki.lcsy.2015.09.001