王春柳，龍凱花，楊潔，唐濤，臧巧真，李彤暉，辛永潔，李曄

(1.陜西省中醫(yī)藥研究院中藥研究所，西安 710003；2.陜西中醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院，咸陽 712046)

鴉膽子油自微乳化顆粒對(duì)大鼠長期毒性實(shí)驗(yàn)*

王春柳1，龍凱花2，楊潔1，唐濤2，臧巧真2，李彤暉1，辛永潔1，李曄1

(1.陜西省中醫(yī)藥研究院中藥研究所，西安 710003；2.陜西中醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院，咸陽 712046)

目的考察鴉膽子油自微乳化顆粒對(duì)大鼠的長期毒性。方法將120只斯?jié)娎鄹瘛ざ嗬?SD)大鼠隨機(jī)分為空白對(duì)照組、鴉膽子油自微乳化顆粒大劑量組、中劑量組、小劑量組，每組30只。鴉膽子油自微乳化顆粒大、中、小劑量組分別按照144，72，36倍人體服用劑量給藥，并同時(shí)進(jìn)行空白對(duì)照。于給藥前、給藥3，6個(gè)月及停藥后4周進(jìn)行大鼠體質(zhì)量、血液學(xué)、血液生化學(xué)、臟器指數(shù)、病理組織學(xué)檢查。結(jié)果一般觀察指標(biāo)及體質(zhì)量均未見顯著變化：血液學(xué)指標(biāo)：3個(gè)月時(shí)與空白對(duì)照組比較，大劑量組淋巴細(xì)胞比率(LY)降低、單核細(xì)胞比率(MO)升高，中劑量組MO、嗜堿性細(xì)胞比率(BA)均顯著升高(P<0.05)，給藥6個(gè)月后與空白對(duì)照組比較，大劑量組紅細(xì)胞容積(HCT)比率降低、中劑量組中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)(NE)升高(P<0.01)；停藥4周后，以上項(xiàng)目均恢復(fù)，與空白對(duì)照組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。血液生化學(xué)指標(biāo)：3個(gè)月時(shí)與空白對(duì)照組比較，大劑量組總蛋白(TP)、球蛋白(G)、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)，中劑量組TP均顯著升高(P<0.05)，大劑量組天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)極顯著升高(P<0.01)；給藥6個(gè)月后大劑量組AST升高、三酰甘油(TG)降低(P<0.05)，中劑量組肌酸激酶(CK)降低(P<0.05)、TG極顯著降低(P<0.01)，小劑量組葡萄糖(Glu)極顯著降低(P<0.01)；停藥4周后，以上指標(biāo)均可恢復(fù)。尸解及臟器指數(shù)：停藥后大鼠出現(xiàn)肝臟、睪丸遲發(fā)型腫大，整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程未出現(xiàn)動(dòng)物死亡；病理組織檢查未見顯著變化。結(jié)論鴉膽子油自微乳化顆粒長期服用毒性較低，可進(jìn)一步進(jìn)行深入研究。

鴉膽子油自微乳化顆粒；毒性，長期

鴉膽子油是從苦木科植物鴉膽子[Bruceajavanica(L.)Merr.]干燥成熟果實(shí)中提取的脂肪油，現(xiàn)代藥理學(xué)研究證明其具有明確抗腫瘤作用[1]。臨床常用鴉膽子油乳注射液、鴉膽子油口服乳劑等劑型治療肺癌、胃癌等多種惡性腫瘤[2-3]。但上述劑型存在穩(wěn)定性差、生物利用度低、依從性差等問題，且近年出現(xiàn)不少有關(guān)含鴉膽子油的注射液劑不良反應(yīng)的報(bào)道，有研究表明大劑量、長期應(yīng)用鴉膽子油乳注射劑會(huì)使大鼠出現(xiàn)肝臟和腎臟功能損傷及急性肺水腫、溶血性貧血等[4]。本課題組前期進(jìn)行了鴉膽子油固體自微乳制劑開發(fā)研究，研制出鴉膽子油自微乳化顆粒并進(jìn)行了相關(guān)藥學(xué)研究[5-9]。筆者在本實(shí)驗(yàn)中對(duì)其進(jìn)行了長期毒性考察，為其安全性評(píng)價(jià)及臨床用藥開發(fā)提供基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物 斯波累格·多雷(Sprague Dawley,SD)大鼠，體質(zhì)量100～140 g，6～8周齡，由第四軍醫(yī)大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，合格證號(hào)：0022211，生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK(軍)2007-007。實(shí)驗(yàn)開始時(shí)體質(zhì)量差異不超過或低于該實(shí)驗(yàn)動(dòng)物平均體質(zhì)量的20%。動(dòng)物凈化室溫度保持在20～25 ℃，相對(duì)濕度保持在45%～70%，保持門窗密閉，使用空氣凈化系統(tǒng)，送新風(fēng)全口開啟，送風(fēng)機(jī)隔日換機(jī)一次，飼料和墊料由鈷60照射處理。實(shí)驗(yàn)前大鼠正常飼養(yǎng)1周，觀察記錄大鼠行為活動(dòng)，飲食、體質(zhì)量、精神狀況，選擇健康，正常，若雌性應(yīng)以無孕大鼠作為受試動(dòng)物。

1.2 試藥 鴉膽子油自微乳顆粒劑為實(shí)驗(yàn)室自制，批號(hào)：20120218，每袋30 g，每袋含鴉膽子油0.5 g。

1.3 儀器 BS-300型全自動(dòng)生化分析儀(深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司)；Sysmex XS-800i型血液分析儀(深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司)；XD-685型電解質(zhì)分析儀(上海訊達(dá)醫(yī)療儀器有限公司)；BS210S型電子天平(北京賽多利斯天平廠，量：0.1 mg)。

1.4 動(dòng)物分組與給藥 選取120只健康SD大鼠，隨機(jī)平均分為4組，雌雄各半。分別為鴉膽子油自微乳化顆粒大、中、小劑量組及空白對(duì)照組。給藥組分別按144，72，36倍人體服用劑量灌胃給予鴉膽子油自微乳顆粒劑(以鴉膽子油計(jì)劑量分別為鴉膽子油3.6，1.8，0.9 g·kg-1)，空白對(duì)照組灌胃給予賦形劑。

1.5 一般觀察 給藥期間每周稱體質(zhì)量、食量各一次，觀察有無死亡或?yàn)l死大鼠及大鼠毛色、行為活動(dòng)、腺體分泌、呼吸、糞便性狀等。

1.6 血液學(xué)指標(biāo)檢測 在給藥3，6個(gè)月及停藥4周后，各組大鼠分別取10只，采用10%烏拉坦1 mL·(100 g)-1腹腔注射麻醉，分離頸總靜脈，取血，采用Sysmex XS-800i血液分析全自動(dòng)血液細(xì)胞分析儀測定白細(xì)胞總數(shù)(total white blood cells，WBC)、中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)(neut，NE)、淋巴細(xì)胞比率(lymphocyte rate，LY)、單核細(xì)胞比率(monor rate，MO)、嗜酸性細(xì)胞比率(eosinophils rate，EO)、嗜堿性細(xì)胞比率(basic cells rate，BA)、紅細(xì)胞計(jì)數(shù)(red blood cell count，RBC)、血紅蛋白(hemoglobin，HGB)、紅細(xì)胞壓積(hematocrit，HCT)、平均紅細(xì)胞體積(mean corpuscular volume，MCV)、平均血紅蛋白含量(mean cell hemoglobin，MCH)、平均血紅蛋白濃度(mean corpuscular hemoglobin concentration，MCHC)、血小板計(jì)數(shù)(platelet count，PLT)、網(wǎng)織紅細(xì)胞(reticulocyte，RET)、凝血時(shí)間(coagulation time，Coag-T)，共計(jì)15項(xiàng)。

1.7 血液生化學(xué)指標(biāo)檢測 采用上述同樣方法取血，采用BS-300全自動(dòng)生化分析儀檢測：總膽紅素(total bilirubin，T-BiL)、總蛋白(total protein，TP)、清蛋白(albumin，ALB)、球蛋白(albumin，G)、ALB /G、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(glutamic-pyruvic transaminase，ALT)、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(glutamic-oxalacetic transaminase，AST)、 AST/ALT、堿性磷酸酶(alkaline phosphatase，ALP)、葡萄糖(glucose，Glu)、總膽固醇(total cholesterol，TC)、三酰甘油(glycerin trilaurate，TG)、尿素氮(blood urea nitrogen，BUN)、肌酐(creatinine，Crea)、肌酸激酶(creatine kinase，CK)，共計(jì)15項(xiàng)。

1.8 系統(tǒng)尸解及臟器指數(shù) 對(duì)大鼠進(jìn)行系統(tǒng)尸解，全面細(xì)致地觀察臟器，并詳細(xì)記錄病變臟器的外觀特征。計(jì)算心、肝、脾、肺、腎、腎上腺、胸腺、睪丸、附睪、子宮、卵巢、腦12個(gè)臟器的臟器系數(shù)，并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

1.9 病理組織學(xué)檢查 光學(xué)顯微鏡檢查，內(nèi)容包括：心、主動(dòng)脈、肺、氣管、食管、胃、肝、胰腺、小腸、大腸、頜下腺、腎、膀胱、子宮、卵巢、陰道、睪丸、附睪、前列腺、腎上腺、甲狀腺、垂體、腦(大腦、腦干、小腦)、脊髓、坐骨神經(jīng)、脾、胸腺、腸系膜淋巴結(jié)、骨髓、皮膚共32個(gè)臟器和組織。

2 結(jié)果

2.1 一般觀察結(jié)果 給藥期間無死亡或?yàn)l死動(dòng)物，大鼠毛色光潔，行為活動(dòng)、腺體分泌、呼吸、糞便性狀均正常。3個(gè)劑量組大鼠體質(zhì)量及攝食情況均正常，與空白對(duì)照組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見圖1。

圖1 4組大鼠體質(zhì)量變化的比較(n=30)

Fig.1 Comparison of the changes of body weight among four groups of rats(n=30)

2.2 血液學(xué)指標(biāo)檢測結(jié)果 3個(gè)月時(shí)與空白對(duì)照組比較，大劑量組LY降低、MO升高，中劑量組MO、BA均顯著升高(P<0.05)，6個(gè)月時(shí)與空白對(duì)照組比較，大劑量組HCT比率降低、中劑量組NE升高(P<0.01)，但在停藥4周后，以上項(xiàng)目均可恢復(fù)，與空白對(duì)照組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。結(jié)果表明鴉膽子油自微乳化顆粒長期用藥可能會(huì)引起血液學(xué)指標(biāo)的可逆性變化。見表1。

2.3 血液生化學(xué)指標(biāo)檢測結(jié)果 3個(gè)月時(shí)與空白對(duì)照組比較，大劑量組TP、G、ALT，中劑量組TP均顯著升高(P<0.05)，大劑量組AST極顯著升高(P<0.01)。6個(gè)月時(shí)大劑量組AST升高、TG降低(P<0.05)，中劑量

組CK降低(P<0.05)、TG顯著降低(P<0.01)，小劑量組GLU顯著降低(P<0.01)。但是在停藥4周后，以上指標(biāo)均可恢復(fù)，其他指標(biāo)在實(shí)驗(yàn)期間，與空白對(duì)照組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。表明鴉膽子油自微乳化顆粒長期用藥可能會(huì)引起可恢復(fù)性肝臟損傷。見表2。

2.4 系統(tǒng)尸解及臟器指數(shù)結(jié)果 鴉膽子油自微乳化顆粒長期服用期間對(duì)大鼠臟器指數(shù)無明顯影響，停藥后大劑量組肝指數(shù)、睪丸指數(shù)明顯升高。提示鴉膽子油自微乳化顆粒大劑量可能引起遲發(fā)性質(zhì)肝臟、睪丸腫大。見表3。

2.5 病理組織學(xué)檢查結(jié)果 實(shí)驗(yàn)期間無動(dòng)物異常死亡，所有動(dòng)物均存活至實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)間，按計(jì)劃解剖腹主動(dòng)脈放血處死。

肉眼觀察：各組動(dòng)物皮膚完整，未見脫毛、紅腫等皮膚病變；耳、口、鼻、肛門等天然孔道無分泌物和外傷；眼睛呈粉紅色、無發(fā)紺、黃染及紅點(diǎn)；皮下組織無出血和腫物，肌肉顏色粉紅，有光澤并富于彈性；胸、腹、顱腔無液體或氣體潴留、無異味，各臟器位置和形態(tài)正常，無粘連。病理學(xué)檢查未發(fā)現(xiàn)藥物所致的特異性毒性反應(yīng)。

光學(xué)顯微鏡檢查：給藥3和6個(gè)月結(jié)束時(shí)，在大劑量組分別發(fā)現(xiàn)大鼠腎小管間質(zhì)局灶性充血和肝靜脈周圍局灶性變形、壞死各1例。其他大鼠在同時(shí)間段未發(fā)現(xiàn)異常病變。另外給藥6個(gè)月以及恢復(fù)期過程中，空白對(duì)照組及大劑量組肺臟、肝臟及腎臟均出現(xiàn)1或2例輕度炎癥，應(yīng)為成年大鼠自發(fā)性癥狀，無特異性毒性反應(yīng)[10]。綜上，鴉膽子油自微乳顆粒劑給藥6個(gè)月病理學(xué)檢查，未發(fā)現(xiàn)明顯靶器官毒性。

表1 4組大鼠血液學(xué)指標(biāo)的比較

Tab.1 Comparison of hematological indices among four groups of rats

組別與時(shí)間WBC/(×109·L-1)NELYMOEOBA%RBC/(×1012·L-1)空白對(duì)照組 3個(gè)月6．24±1．1517．05±7．1773．81±9．173．07±1．284．49±2．882．82±1．669．47±1．00 6個(gè)月9．61±5．8113．73±3．1977．61±5．484．18±1．381．51±0．593．60±2．9810．09±0．80 恢復(fù)期5．25±2．0022．42±9．3668．66±11．095．31±2．911．87±1．263．92±1．769．13±0．94鴉膽子油自微乳 大劑量組 3個(gè)月6．62±2．0420．61±6．2364．30±7．26?15．28±2．82?14．30±3．786．63±4．558．92±0．93 6個(gè)月9．28±3．3418．67±11．2973．36±10．443．97±1．421．37±0．524．16±2．719．69±0．83 恢復(fù)期5．75±1．6421．41±11．3667．53±6．514．10±1．332．82±1．756．23±4．159．12±0．90 中劑量組 3個(gè)月5．66±3．0514．51±5．2969．54±6．375．61±1．453．35±2．556．97±5．88?18．99±0．95 6個(gè)月8．21±3．7922．28±12．13?270．07±12．803．91±2．322．11±1．222．79±1．739．90±1．04 恢復(fù)期6．77±2．6023．78±10．9667．05±9．454．45±2．172．67±2．005．03±2．029．36±1．06 小劑量組 3個(gè)月7．79±3．3315．13±5．9875．25±9．203．24±1．273．02±2．324．08±3．409．08±0．73 6個(gè)月10．77±3．8218．39±7．6172．08±7．854．79±1．001．28±0．545．26±3．249．87±1．00 恢復(fù)期6．00±2．2018．87±4．5773．21±4．244．82±1．473．03±1．900．96±0．718．78±0．44

組別與時(shí)間HGB/(g·L-1)HCT/%MCV/fLMCH/pgMCHC/(g·L-1)PLT/(×109·L-1)RET/%Coag?T/s空白對(duì)照組 3個(gè)月170．27±15．9847．00±3．3149．85±2．2718．02±0．42361．76±9．381042．80±67．901．97±0．3335．60±0．70 6個(gè)月181．92±12．3351．39±2．6451．04±2．1518．04±0．61353．54±6．971258．00±127．001．95±0．2559．70±12．25 恢復(fù)期167．65±11．1046．71±2．7151．47±3．0218．47±0．85358．60±4．901256．00±175．001．61±0．1847．50±8．61鴉膽子油自微乳 大劑量組 3個(gè)月161．36±17．4245．65±3．9551．28±1．6818．09±0．42362．60±9．70994．60±123．402．02±0．4134．70±3．30 6個(gè)月172．65±9．4948．43±2．21?250．22±2．8717．89±0．85356．30±4．991294．00±192．002．11±0．3147．50±13．49 恢復(fù)期161．99±8．9245．21±1．9949．91±3．8217．86±0．98357．98±8．481163．00±159．001．76±0．3144．70±8．64 中劑量組 3個(gè)月162．23±13．8745．78±3．3351．17±2．9918．11±0．73354．00±8．231023．48±122．802．00±0．2236．30±2．71 6個(gè)月178．28±13．3349．68±2．7650．51±3．0618．11±0．79358．16±8．831196．00±212．002．13±0．2548．90±14．61 恢復(fù)期167．16±11．6446．33±2．3849．91±3．7917．97±0．99360．26±8．651263．00±160．001．71±0．2346．30±11．91 小劑量組 3個(gè)月165．85±13．1546．38±3．3151．15±1．2418．28±0．35357．20±4．241008．18±125．792．12±0．7435．40±3．72 6個(gè)月178．57±16．7250．75±4．2051．54±1．6318．12±0．44350．50±5．721337．00±321．002．13±0．2850．50±10．18 恢復(fù)期158．51±6．7145．59±3．0850．87±1．7618．11±0．53355．40±3．781116．00±179．001．50±0．1943．00±8．10

與空白對(duì)照組同時(shí)間點(diǎn)比較，*1P<0.05，*2P<0.01

Compared with blank control group at the same time point，*1P<0.05，*2P<0.01

表2 4組大鼠血液生化指標(biāo)的比較

Tab.2 Comparison of hematological biochemical indices among four groups of rats

組別與時(shí)間T?BiL/(mmol·L-1)TPALBG(g·L-1)ALB/GALTASTALP(U·L-1)AST/ALT空白對(duì)照組 3個(gè)月1．40±0．4166．10±2．1336．20±1．3229．90±1．731．20±0．0838．70±8．39114．50±16．59100．20±22．123．07±0．72 6個(gè)月1．59±0．2955．00±4．7626．20±5．0728．80±3．520．93±0．2852．80±10．80121．20±14．9497．30±35．092．35±0．36 恢復(fù)期1．47±0．3361．30±4．5732．40±2．0128．90±5．571．13±0．2238．40±12．08123．10±32．4885．70±39．583．46±1．36鴉膽子油自微乳 大劑量組 3個(gè)月1．72±0．3969．20±4．05?137．00±3．0932．20±1．93?21．15±0．1258．00±23．93?1152．60±29．54?293．80±32．482．93±0．97 6個(gè)月1．45±0．4058．00±5．0126．50±5．8031．50±8．140．91±0．3068．40±40．06165．60±55．41?1106．50±34．812．75±0．85 恢復(fù)期1．61±0．2863．20±5．4133．80±3．8229．40±3．171．12±0．1646．50±17．16127．50±29．8598．00±64．712．87±0．55 中劑量組 3個(gè)月1．65±0．4668．90±3．21?136．30±3．7432．60±3．891．12±0．2042．40±8．60137．10±34．18117．20±26．383．35±1．00 6個(gè)月1．40±0．4156．10±5．8425．00±4．6931．10±2．920．82±0．1847．30±11．46121．60±42．2791．50±22．732．70±1．20 恢復(fù)期1．42±0．3563．90±5．9334．70±4．0629．20±2．441．15±0．1039．80±14．27126．00±36．9082．90±28．153．34±1．04 小劑量組 3個(gè)月1．56±0．3665．30±2．1635．10±1．8530．20±1．621．16±0．1058．20±30．69139．30±37．70109．30±31．712．77±1．06 6個(gè)月1．59±0．3056．20±3．9425．20±5．0131．00±3．710．83±0．2249．80±9．72123．60±24．77104．10±42．392．56±0．68 恢復(fù)期1．47±0．3261．70±6．9535．70±3．7426．00±4．081．30±0．2143．30±15．20119．40±28．1278．90±35．752．86±0．57組別與時(shí)間GluTCTGBUN(mmol·L-1)Crea/(μmol·L-1)CKKNACL(mmol·L-1)空白對(duì)照組 3個(gè)月7．02±1．041．80±0．210．79±0．167．34±2．1169．31±5．451182．54±428．454．82±0．22140．38±1．33103．42±1．10 6個(gè)月10．57±2．651．53±0．391．80±0．937．08±1．7385．73±6．391839．36±318．584．58±0．38138．95±0．76101．05±0．97 恢復(fù)期7．71±0．761．61±0．511．09±0．546．60±2．7292．53±11．181378．47±471．664．85±0．51139．87±1．33100．46±0．83

組別與時(shí)間GluTCTGBUN(mmol·L-1)Crea/(μmol·L-1)CKKNACL(mmol·L-1)鴉膽子油自微乳 大劑量組 3個(gè)月6．70±0．501．58±0．400．70±0．166．23±1．6067．10±16．301288．89±323．974．94±0．46140．79±1．23103．70±1．07 6個(gè)月8．71±1．421．41±0．221．07±0．53?18．33±1．8583．39±5．391723．68±502．964．91±0．52138．21±1．36100．59±0．95 恢復(fù)期7．58±0．921．78±0．520．86±0．275．74±1．7787．18±8．271388．81±471．734．76±0．43139．66±1．1599．85±0．56 中劑量組 3個(gè)月6．28±1．061．61±0．420．68±0．197．32±1．9772．61±5．281347．52±560．349．36±1．28140．72±1．11102．70±1．70 6個(gè)月9．32±1．081．59±0．270．93±0．27?16．19±0．9281．34±9．861383．58±471．54?14．74±0．58138．62±1．04101．51±0．83 恢復(fù)期6．99±0．531．57±0．401．12±0．475．52±1．2691．65±12．471199．71±496．405．45±1．63140．94±1．32101．14±1．26 小劑量組 3個(gè)月7．38±0．861．81±0．340．77±0．337．53±2．0269．57±10．611468．78±450．694．96±0．26140．37±1．20103．16±0．61 6個(gè)月8．08±0．63?21．63±0．331．19±0．606．40±1．7484．50±9．011522．37±391．074．91±0．52138．73±0．85101．67±1．42 恢復(fù)期7．61±0．682．03±0．520．89±0．285．14±1．0387．66±11．061302．41±419．604．71±0．34139．16±1．52100．05±1．14

與空白對(duì)照組同時(shí)間點(diǎn)比較，*1P<0.05，*2P<0.01

Compared with blank control group at the same time point，*1P<0.05，*2P<0.01

表3 4組大鼠臟器指數(shù)的比較

Tab.3 Comparison of organic indices among four groups of rats

組別與時(shí)間心肝脾肺腎腦空白對(duì)照組 3個(gè)月0．338±0．0712．981±0．5340．153±0．0280．541±0．1080．778±0．1070．639±0．158 6個(gè)月0．271±0．0522．238±0．3330．127±0．0280．362±0．1080．525±0．1060．549±0．986 恢復(fù)期0．256±0．0292．182±0．2490．132±0．0220．357±0．1220．523±0．1180．542±0．088鴉膽子油自微乳 大劑量組 3個(gè)月0．340±0．0662．659±0．4110．132±0．0310．483±0．0690．689±0．1260．568±0．118 6個(gè)月0．267±0．1022．538±0．4930．127±0．0220．384±0．1530．523±0．1020．533±0．009 恢復(fù)期0．272±0．1032．544±0．489?10．124±0．0170．380±0．1470．528±0．0950．533±0．097 中劑量組 3個(gè)月0．324±0．0272．541±0．4720．118±0．0280．501±0．0520．694±0．0970．541±0．077 6個(gè)月0．319±0．0812．318±0．4580．158±0．0720．474±0．3580．528±0．1580．534±0．074 恢復(fù)期0．309±0．0842．249±0．2820．147±0．0470．443±0．2880．500±0．1070．519±0．081 小劑量組 3個(gè)月0．308±0．0292．603±0．5180．143±0．0340．469±0．0660．675±0．1300．553±0．095 6個(gè)月0．269±0．0382．562±0．4570．148±0．0380．387±0．0780．568±0．0840．492±0．069 恢復(fù)期0．272±0．0292．614±0．452?10．150±0．0390．396±0．0650．581±0．0730．493±0．083組別與時(shí)間腎上腺胸腺子宮(n=5)卵巢(n=5)睪丸(n=5)附睪(n=5)空白對(duì)照組 3個(gè)月0．020±0．0070．971±0．2930．223±0．0370．043±0．0060．781±0．0960．342±0．072 6個(gè)月0．011±0．0020．597±0．2420．225±0．1240．031±0．0040．512±0．2220．313±0．076 恢復(fù)期0．012±0．0020．531±0．1240．230±0．1210．030±0．0030．504±0．1660．308±0．059鴉膽子油自微乳 大劑量組 3個(gè)月0．017±0．0040．809±0．2950．221±0．0570．044±0．0030．828±0．1230．334±0．047 6個(gè)月0．012±0．0020．622±0．2710．264±0．0780．032±0．0070．737±0．1680．338±0．027 恢復(fù)期0．013±0．0020．652±0．1430．262±0．0810．032±0．0070．738±0．166?10．336±0．031

組別與時(shí)間腎上腺胸腺子宮(n=5)卵巢(n=5)睪丸(n=5)附睪(n=5) 中劑量組 3個(gè)月0．017±0．0060．828±0．2680．182±0．0190．039±0．0030．806±0．0960．308±0．027 6個(gè)月0．012±0．0020．541±0．2560．233±0．0580．049±0．0040．758±0．1630．266±0．109 恢復(fù)期0．015±0．0030．614±0．2030．234±0．0580．051±0．0050．595±0．0810．253±0．072 小劑量組 3個(gè)月0．017±0．0060．803±0．1870．231±0．0480．034±0．0070．812±0．1440．313±0．036 6個(gè)月0．012±0．0020．532±0．2220．204±0．0880．033±0．0090．697±0．0810．342±0．027 恢復(fù)期0．013±0．0040．524±0．3140．213±0．1120．033±0．0090．723±0．088?10．339±0．038

與空白對(duì)照組比較，*1P<0.05

Compared with blank control group，*1P<0.05

3 討論

有報(bào)道，鴉膽子油乳注射液大劑量(1 g·kg-1)長期給藥會(huì)引起大鼠稀便、皮毛無光澤、精神萎靡，引起大鼠肝臟、腎臟急性損傷和肺水腫，死亡率7.5%[4]。

筆者在本實(shí)驗(yàn)中，將大鼠分別給予大、中、小劑量鴉膽子油自微乳化顆粒(分別為人體服用劑量的144，72，36倍)6個(gè)月，一般觀察指標(biāo)及體質(zhì)量均未見顯著變化；大、中劑量組血液學(xué)指標(biāo)(LY、MO、BA、NE、RBC)出現(xiàn)可逆性變化；大劑量出現(xiàn)肝臟、腎臟損傷(停藥后可恢復(fù))及肝臟、睪丸遲發(fā)型腫大，整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程未出現(xiàn)動(dòng)物死亡。以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明鴉膽子油自微乳化顆粒毒性低，可進(jìn)一步進(jìn)行深入研究。

[1] 林宏英，吳建梅，張文生，等.鴉膽子油的研究進(jìn)展[J].中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2006，12(4)：65-69.

[2] 楊利輝，石文建，趙喜慶.鴉膽子油乳對(duì)SKMG-4膠質(zhì)瘤細(xì)胞抑制作用研究[J].中華神經(jīng)外科疾病研究雜志，2011，10(1)：38-40.

[3] 張曉嬌，王雪蓮，趙峰，等.鴉膽子油乳抑制肺癌NCI-H460 細(xì)胞的增殖及其機(jī)制[J].中國腫瘤生物治療雜志，2011，18(5)：519-523.

[4] 馬海萍，戴學(xué)棟，戴曉莉，等.鴉膽子油乳注射液大鼠長期毒性實(shí)驗(yàn)研究[J].中國藥物警戒，2013，10(6)：330-333.

[5] 陳剛，張曉，盧剛，等.鴉膽子油油水分配系數(shù)及其乳劑大鼠在體腸吸收特性研究[J].中華中醫(yī)藥雜志，2012，27(6)：1669-1672.

[6] 蔣楠，李曄，陳鋼，等.鴉膽子油自微乳的制備及溶出度考察[J].中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2013，19(9)：45-48.

[7] 李彤輝，李曄，陳鋼，等.鴉膽子油自微乳化顆粒質(zhì)量控制方法研究[J].中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2014，20(8)：89-92.

[8] 李曄，孫雯，蔣楠，等.鴉膽子油自微乳化顆粒大鼠體內(nèi)生物利用度考察[J].中成藥，2014，36(12)：2615-2617.

[9] 楊潔，趙林濤，李凡，等.鴉膽子油自微乳劑對(duì)肺癌A549細(xì)胞增殖的抑制作用[J].第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào)，2012，33(8)：928-929.

[10] 蘇曉鷗，戴益民，弓雪蓮，等.毒性試驗(yàn)中SD大鼠常見自發(fā)性病變[J].中國藥理學(xué)與毒理學(xué)雜志，2013，27(3)：518.

Long-term Toxicity of Self-microemulsifying Granules of Brucea Javanica Oil on Rat

WANG Chunliu1, LONG Kaihua2, YANG Jie1, TANG Tao2, ZANG Qiaozhen2, LI Tonghui1, XIN Yongjie1, LI Ye1

(1.InstituteofChineseMedicine,ShanxiAcademyofTraditionalChineseMedicine,Xi'an710003,China； 2.SchoolofPharmacy,ShanxiUniversityofChineseMedicine,Xianyang712046,China)

Objective To test long-term toxicity of self-microemulsifying granules ofBruceajavanicaoil on SD rats . Methods The SD rats were divided into blank control group, high-, medium- and low-dose (144, 72 and 36 folds of dosage for human, respectively) of self-microemulsifying granules ofBruceajavanicaoil groups randomly (n=30 each group).The weight, appetite, haematological indexes, blood biochemical indexes, visceral index and histopathologic changes of organs of rats were measured at time point after 3, 6 months treatment and 4 weeks after drug withdrawal, respectively. Results Compared with blank control group, the drug groups showed no significant differences in the appearance and weight of rats.With haematological indexes, the level of lymphocyte rate (LY) in high dose group was significantly lower while the levels of monor (MO) in high dose group was significantly higher, MO and basic cells rate(BA)in medium dose group were significantly higher than those in blank control group (P<0.05) after 3-month long treatment.Hematocrit (HCT) in high dose group was significantly lower, neut (NE) in medium dose group was very significantly higher than those in blank control group(P<0.01) after 6-month long treatment.Those changed indexes recovered to be blank on the 4th week after withdrawal.No significant difference was obtained compared with blank control group(P>0.05).In blood biochemical indexes, the levels of total protein (TP), albumin (G), glutamic-pyruvic transaminase (ALT) in high dose group and TP in medium dose group were significantly higher than those in blank control group (P<0.05).Glutamic-oxalacetic transaminase (AST) in high dose group was very significantly higher than that in blank control group (P<0.01) after 3 months.After 6 months treatment , compared with blank control group, the level of glutamic-oxalacetic transaminase (AST) in high dose group was higher while trilaurate glycerin (TG) was lower(P<0.05).The level of creatine kinase (CK) was lower(P<0.05) and the level of TG was very significantly lower (P<0.01).The level of glucose (Glu) was very significantly lower (P<0.01).Those changed indexes recovered to be blank on the 4th week after withdrawal.In haematological indexes,delayed enlargements of liver and testis occurred after withdrawal.No rat died in the process of experiment.No obvious histopathologic changes of organs of rats were observed . Conclusion Self-microemulsifying granules ofBruceajavanicaoil have no apparent toxicity.It is worthy of further research.

Self-microemulsifying granule of brucea javanica oil； Toxicity, long-term

2015-02-09

2015-03-31

*陜西省“13115”科技創(chuàng)新工程重大科技專項(xiàng)項(xiàng)目(2009ZDKG-82)

王春柳(1988-)，女，陜西商洛人，研究實(shí)習(xí)員，碩士，從事中藥新型給藥系統(tǒng)研究。電話：029-87251837，E-mail：chunliuyouyou56@163.com。

李曄(1970-)，女，陜西西安人，研究員，博士，從事中藥新型給藥系統(tǒng)研究。電話：029-87251837，E-mail：liyelsj@163.com。

R286；R285.5

A

1004-0781(2015)12-1563-06

10.3870/j.issn.1004-0781.2015.12.004