胡 琪，郭詩文，呂 瑩，施小迪，郭順堂*

油脂體組成、結(jié)構(gòu)及油脂體蛋白研究進(jìn)展

胡 琪，郭詩文，呂 瑩，施小迪，郭順堂*

（中國農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科學(xué)與營養(yǎng)工程學(xué)院，北京 100083）

油脂體是由中性脂質(zhì)、環(huán)繞中性脂質(zhì)的磷脂和嵌插在磷脂層中的蛋白組成的小球體，是植物油脂儲存的重要器官。油脂體中的蛋白對油脂體的獨(dú)立性、完整性起重要作用，并且在種子萌發(fā)過程中，能激活油脂體表面的相關(guān)酶類，從而促進(jìn)代謝，為機(jī)體提供能量，促進(jìn)植物的生長。本文綜述油脂體的組成、結(jié)構(gòu)以及油脂體蛋白的結(jié)構(gòu)、功能性質(zhì)，為油脂體的利用和開發(fā)提供參考。

油脂體；油脂體蛋白；油脂體鈣蛋白；甾醇蛋白

油脂體是由一層磷脂膜包圍基質(zhì)三?；视停╰riacylglycerol，TAG），蛋白鑲嵌在膜上形成的完整、穩(wěn)定、獨(dú)立存在于細(xì)胞質(zhì)中的膜結(jié)構(gòu)小球體。油脂體主要存在于被子植物中，如蕓苔、花生、芝麻、玉米[1-2]等中；同時(shí)也存在于裸子植物如銀杏、蘇鐵屬[3]等中。Huang[4]發(fā)現(xiàn)，在原始植物菌類和藻類中也存在油脂體，且含有油脂體的組織能夠抵抗干旱等不良環(huán)境，具有長期儲存油脂的能力。但是，有些植物如橄欖、鱷梨等的中果皮，則不能抵抗干旱等不良環(huán)境帶來的影響，因?yàn)檫@些組織中的“油脂體”雖然具有與油脂體相同的外形輪廓，但其表面不存在類似油脂體的完整蛋白組成[5]。因此可以說油脂體的表面蛋白對提升油脂體抵抗不良環(huán)境的能力具有重要作用。

近年來，關(guān)于油脂體的研究不斷增加，這主要是基于油脂體潛在的利用價(jià)值。油脂體能作為乳狀液應(yīng)用于食品、護(hù)膚品、洗護(hù)用品等中，如冰淇淋、果汁等[6-7]，添加了油脂體的果汁口感更濃厚，且能夠阻止固形物的沉淀；而冰淇淋中添加油脂體則可以去除乳化過程，同時(shí)減少非脂乳固體的添加，這可以有效降低冰淇淋的制作成本。目前油脂體蛋白主要用于生物技術(shù)研究中，如采用油體蛋白作為融合蛋白，在B. carinata中表達(dá)成具有消除Cd2+作用的蛋白[8]。

油脂體因其獨(dú)特的易提取、穩(wěn)定的性能，較適用于食品、醫(yī)藥、護(hù)膚品等行業(yè)，并對行業(yè)的發(fā)展具有重要意義。

1 油脂體的組成

通過電子顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)，成熟種子中的油脂體通常呈球形，當(dāng)油脂體被分離出后，仍然以球體形式存在[9]，不同種子中的油脂體直徑從0.2～2.5μm不等，這可能是植物生長過程中不同的營養(yǎng)條件和環(huán)境因素影響的結(jié)果。而在同種種子中，油脂體在不同組織中的大小也不盡相同。例如，在玉米胚芽中，種子子葉中的油脂體比胚軸中的大[4]。油脂體的大小和形狀主要由油與蛋白的比例決定，在玉米種子中，高油和低油品種的玉米其油脂體的形狀、大小不同。種子中油/蛋白比例越高，油脂體越大，呈球形；油/蛋白比例越低，油脂體越小，呈不規(guī)則狀。

Tzen[9]和Slack[10]等通過多次離心分離獲得比較純的油脂體，測定其含有92%～98%的中性脂質(zhì)，1%～4%的磷脂，1%～4%的蛋白。其中，中性脂質(zhì)大部分是TAG，還有少量的甘油二酯和游離脂肪酸。但油脂體中游離脂肪酸的量可能會改變。Huang[4]研究發(fā)現(xiàn)，長時(shí)間儲存的種子，其游離脂肪酸含量會增加，這主要是由磷脂和三?；视退舛傻摹Ａ字饕锹蚜字?，還有少量的磷脂酰絲氨酸、磷脂酰乙醇胺和磷脂酰肌醇；蛋白質(zhì)大多是油體蛋白，還有少量油體鈣蛋白和甾醇蛋白。此外，還發(fā)現(xiàn)了細(xì)胞色素c還原酶、脂肪酶[11]、乙醛酸循環(huán)磷脂酶[12]等，這些酶在種子萌發(fā)時(shí)分解油脂體中的脂質(zhì)，為種子提供能量，以完成種子的萌發(fā)過程或幫助種子度過不良環(huán)境。

2 油脂體的結(jié)構(gòu)

通過早期的研究知道，油脂體主要是由三?；视?、磷脂和蛋白組成；此外，油脂體不論是在體內(nèi)或體外都保持著穩(wěn)定性，即在外界環(huán)境及油脂體自身結(jié)構(gòu)不發(fā)生變化的前提下不發(fā)生聚集、融合等現(xiàn)象，能較好地溶解于水中。1992年，Tzen等[9]通過酶解實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，經(jīng)胰蛋白酶酶解的油脂體穩(wěn)定性被破壞，發(fā)生了聚集等不良反應(yīng)，Tzen等[13]采用胰蛋白酶酶解油脂體得到了同樣的結(jié)果。而用磷脂酶A2或C處理的油脂體仍然保持較好的穩(wěn)定性；若先用胰蛋白酶處理油脂體再加入磷脂酶則發(fā)現(xiàn)磷脂被水解，油脂體發(fā)生了融合。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，油脂體是以三?；视蜑榛|(zhì)，一層磷脂層包圍三?；视停鞍阻偳对谟椭w表面的小球體。Tzen等[9]首先得出了油脂體的結(jié)構(gòu)圖，Hsieh等[14]對油脂體結(jié)構(gòu)圖進(jìn)行了完善，見圖1。Huang[4]分析油脂體認(rèn)為，一個(gè)油脂體單位是由13個(gè)磷脂分子和1個(gè)油體蛋白分子組成，油脂體的結(jié)構(gòu)單位如圖2所示。

圖1 油脂體結(jié)構(gòu)圖[[1144]]Fig.1 Structural model of oil body[14]

圖2 油脂體結(jié)構(gòu)單位圖[[44]]Fig.2 Surface view of a structural unit[4]

植物細(xì)胞中的油脂體具有極佳的穩(wěn)定性，即使從植物組織中提取出來仍然保持良好的穩(wěn)定性。Huang[4]認(rèn)為維持油脂體穩(wěn)定性的原因主要有兩點(diǎn)：負(fù)電性和空間阻力，油脂體表面的蛋白、磷脂等相互作用，形成了緊密、穩(wěn)定的帶電層，阻止油脂體之間相互作用發(fā)生聚集；油脂體表面的蛋白，其空間結(jié)構(gòu)也在一定程度上阻止了油脂體的相互作用，從而維持油脂體的穩(wěn)定性。由此可見，油脂體中的蛋白對維持油脂體的穩(wěn)定性起決定性作用。

3 油脂體蛋白

3.1 油脂體蛋白的種類及基本性質(zhì)

油脂體表面含有多種不同的蛋白，為維持油脂體的個(gè)體完整和穩(wěn)定起到了重要作用。油脂體蛋白中較早被關(guān)注的是油體蛋白。采用十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳（sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gelelectrophoresis，SDS-PAGE）[15]和免疫細(xì)胞化學(xué)實(shí)驗(yàn)得知，油脂體蛋白是一種低分子質(zhì)量的堿性蛋白[16]，且僅存在于油脂體中。油脂體蛋白是被子植物油脂體中含量最豐富的蛋白，并對油脂體的穩(wěn)定、抗氧化等起到重要作用，因此，對油脂體蛋白的研究及發(fā)現(xiàn)都較早、較成熟。除油體蛋白外，Chen等[17]從大米油脂體中還發(fā)現(xiàn)了3種新的蛋白Sop1～3，因Sop1的DNA序列與大米中的一種與鈣結(jié)合蛋白相同[18]，Sop2與甾醇結(jié)合，故將其分別命名為油體鈣蛋白（caleosin）[19]和甾醇蛋白[20]。Lin等[20]分析Sop3的結(jié)構(gòu)發(fā)現(xiàn)，其可能是一種能與甾醇結(jié)合的類似Sop2的蛋白，通過聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（ploymerase chain reaction，PCR）技術(shù)獲得了Sop3的cDNA克隆基因，并在大腸桿菌中進(jìn)行免疫識別抗體實(shí)驗(yàn)得到證實(shí)。因此將Sop2和Sop3分別命名為甾醇蛋白A和甾醇蛋白B。

總結(jié)目前對油脂體蛋白的研究，將油脂體蛋白分為3個(gè)種類：油體蛋白（15 kD，稱為H-油體蛋白，17 kD，稱為L-油體蛋白）[21]、油體鈣蛋白（27 kD）和甾醇蛋白（39、41 kD，即甾醇蛋白A、B）。H-油體蛋白和L-油體蛋白都存在于被子植物中，但僅L-油體蛋白存在于裸子植物中；油體鈣蛋白不僅存在于高等植物中，原始物種藻類和菌類中也有發(fā)現(xiàn)[22]。早期的研究認(rèn)為油體蛋白是油脂體中最主要的蛋白，維持油脂體的穩(wěn)定性。而油體鈣蛋白則是一種少數(shù)蛋白，與油體蛋白共同存在于花粉、種子的油脂體中，對維持油脂體的功能特性起輔助作用。但新的研究發(fā)現(xiàn)在許多原始物種如藻類、菌類、蘇鐵等植物中油體鈣蛋白是主要蛋白，且不存在油體蛋白。也就是說，油體蛋白和油體鈣蛋白均可以作為主要結(jié)構(gòu)蛋白維持油脂體的穩(wěn)定性，但二者存在的植物種類不同。Jiang等[3]通過文獻(xiàn)檢索發(fā)現(xiàn)能編碼油體鈣蛋白而不能編碼油體蛋白的基因大多存在于原始物種中，且二者都能作為主要結(jié)構(gòu)蛋白存在維持油脂體的完整性、穩(wěn)定性，由此Jiang等認(rèn)為油體蛋白可能是油體鈣蛋白長期進(jìn)化而來，此外，Lin等[23]認(rèn)為油體鈣蛋白是油脂體蛋白中最原始的蛋白，但二者之間的聯(lián)系與區(qū)別還有待實(shí)驗(yàn)論證。

3.2 油脂體蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)及異同點(diǎn)

目前發(fā)現(xiàn)的油脂體中的蛋白包括油體蛋白、油體鈣蛋白和甾醇蛋白，前兩者包含3個(gè)結(jié)構(gòu)區(qū)域，即N端、C端和中部區(qū)，甾醇蛋白僅含有N端和C端。

以油體蛋白為例：1）N端，是由40～60個(gè)氨基酸組成的兩親區(qū)域，其二級結(jié)構(gòu)目前還不清楚。根據(jù)其疏水和親水殘基的分布，Huang[4]認(rèn)為N端大部分的區(qū)域與油脂體的表面性質(zhì)有關(guān)。2）中部，是由68～74個(gè)氨基酸組成的疏水區(qū)，這可能是所有有機(jī)體中發(fā)現(xiàn)的最長的疏水序列。該區(qū)域的二級結(jié)構(gòu)目前存在2種觀點(diǎn)，反相平行的α-螺旋[24]和β-折疊[25]。兩個(gè)實(shí)驗(yàn)室分別采用圓二色譜和傅里葉變換紅外光譜，模擬油脂體自然環(huán)境的條件，測定油脂體蛋白的中部疏水區(qū)的二級結(jié)構(gòu)。測定結(jié)果，一個(gè)顯示是α-螺旋結(jié)構(gòu)[26]，另一個(gè)是β-折疊結(jié)構(gòu)[20]。近來也有研究表明，用同步輻射圓二色性（synchrotron radiation circular dichroism，SRCD）測定蛋白二級結(jié)構(gòu)時(shí)，若以SDS為處理液，則油體鈣蛋白主要以α-螺旋結(jié)構(gòu)存在，若以Amphipols為處理液，則主要以β-折疊結(jié)構(gòu)存在，這主要是由于α-螺旋和β-折疊之間可相互轉(zhuǎn)換[27]。因此我們認(rèn)為這可能就是中部疏水區(qū)二級結(jié)構(gòu)測定結(jié)果不一的原因。DNA測序分析發(fā)現(xiàn)不同植物組織中，油脂體蛋白在中部疏水區(qū)的氨基酸序列相似度非常高，而在這個(gè)區(qū)域中，12～14個(gè)氨基酸殘基的相似度更高，即中部疏水區(qū)的Proline Knot結(jié)構(gòu)[4]，保守區(qū)序列對蛋白的功能性質(zhì)起決定性作用。3）C端，是由33～40個(gè)氨基酸組成的兩親區(qū)，其二級結(jié)構(gòu)為α-螺旋。不同種類油脂體中的油體蛋白都含有以上3個(gè)結(jié)構(gòu)區(qū)域，分子質(zhì)量總和為15 kD，但油體蛋白的分子質(zhì)量區(qū)別很大，從15～26 kD不等[4,28-29]，其分子質(zhì)量超過15 kD的部分會延伸到N端和C端[4]。也就是說，油體蛋白的分子質(zhì)量區(qū)別主要在于N端和C端，延伸到C端的序列具有兩親性，N端的目前還不清楚。延伸區(qū)的靈活性較強(qiáng)，因此它對蛋白質(zhì)的功能影響較小，但是對蛋白質(zhì)的空間結(jié)構(gòu)起到了一定作用，增加了位阻效應(yīng)，有利于防止油脂體的聚集，對維持油脂體的穩(wěn)定起到一定的作用。

油體鈣蛋白的N端也是親水的，但不同于油體蛋白的是它含有一個(gè)單獨(dú)的與鈣結(jié)合的手型EF[30]，鈣能增強(qiáng)油體鈣蛋白的溶解性和表面特性[31]，Chen等[32]發(fā)現(xiàn)單子葉植物油脂體中的油體鈣蛋白的N端較雙子葉植物長40～70個(gè)殘基。C端也是親水的[23]，且含有4個(gè)磷酸結(jié)合位點(diǎn)（12 kD）[33-34]，其N端和C端分別是油體蛋白的3倍，但中部疏水區(qū)較小，由一個(gè)α-螺旋和短錨組成。甾醇蛋白僅含有N端疏水區(qū)和C端親水區(qū)，N端有2個(gè)α-螺旋結(jié)構(gòu)，親水區(qū)含有還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（nicotinamide adenine dinucleotide phosphate，NADPH）[34]結(jié)合子域和甾醇結(jié)合子域[35]。甾醇蛋白A、B在結(jié)構(gòu)上的區(qū)別是甾醇結(jié)合子域的大小不同，脫氫酶活性檢測發(fā)現(xiàn)，甾醇蛋白B可能擁有更大、選擇性更高的NADPH。3種蛋白的簡易結(jié)構(gòu)見圖3[36]。

圖3 3 種油脂體蛋白的二級結(jié)構(gòu)簡圖[[3366]]Fig.3 Secondary structures of oleosin, caleosin, and steroleosin[36]

在油體蛋白中，中部疏水區(qū)是插入磷脂層中的，而在油體鈣蛋白中，中部區(qū)僅短錨結(jié)構(gòu)存在于磷脂層，而短錨結(jié)構(gòu)比油體蛋白中部疏水區(qū)小，導(dǎo)致油體鈣蛋白不及油體蛋白穩(wěn)定[18]。這可能是因?yàn)椴迦肓字瑢又械牟糠衷酱?，與磷脂層及油脂之間的作用力越大，有利于蛋白穩(wěn)定的吸附在油脂體表面。油脂體蛋白中最重要的結(jié)構(gòu)是疏水區(qū)，3種蛋白中僅甾醇蛋白的疏水區(qū)存在于N端，其他都在中部區(qū)。此外，3種蛋白的保守區(qū)也有很大差別，在油體蛋白中是Proline Knot結(jié)構(gòu)，油體鈣蛋白中是Dx[D/N]xDG-鈣結(jié)合區(qū)，甾醇蛋白中是Proline Knob結(jié)構(gòu)[35]。Abell等[37]研究發(fā)現(xiàn)失去保守區(qū)“Proline Knot”結(jié)構(gòu)的油體蛋白多肽在運(yùn)輸過程中失去了其自身的穩(wěn)定性，無法形成正常的油脂體，即保守區(qū)對蛋白的功能特性起決定性作用。甾醇蛋白的N端含有自由的蛋氨酸，而油體蛋白和油體鈣蛋白的N端都發(fā)生了乙?；纬闪朔怄i的結(jié)構(gòu)，這樣有利于提高抵抗熱的穩(wěn)定性，并且能阻止泛素化反應(yīng)[21]，泛素是一種小蛋白，它的主要功能是標(biāo)記需要分解的蛋白，使其被水解。而N端乙?；螅柚沽朔核鼗磻?yīng)，從而保護(hù)它們不被降解，提高油脂體抵抗熱的穩(wěn)定性，起到長期儲存油脂的作用。

油脂體中的3種蛋白質(zhì)在結(jié)構(gòu)上雖然存在很多不同，但歸納來看，3種蛋白質(zhì)的保守區(qū)都是決定蛋白質(zhì)功能特性的決定因素，如蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性、酶識別位點(diǎn)等，而N、C端的兩親區(qū)域則對油脂體的兩親性起到重要作用，同時(shí)為油脂體間提供空間位阻，為防止油脂體的聚集起到一定的積極作用。

3.3 油脂體蛋白的功能

油脂體蛋白對油脂體的穩(wěn)定、代謝、合成等起到十分重要的作用。穩(wěn)定的油脂體在胰蛋白酶的作用下失去了穩(wěn)定性，而在磷脂酶的作用下，仍具有穩(wěn)定性[9]，這說明蛋白的存在能夠保持油脂體的穩(wěn)定性。而蛋白能維持油脂體穩(wěn)定的原因，Huang[4]認(rèn)為是蛋白的負(fù)電性和空間位阻。

負(fù)電性：油脂體表面的油體蛋白、磷脂、少量游離脂肪酸和三?；视椭g相互作用，形成了一個(gè)緊密、穩(wěn)定的帶電層。分子內(nèi)的磷脂和油體蛋白之間的相互作用決定了油脂體的帶電性和極性分布。帶正電的油體蛋白與表面帶負(fù)電的磷脂和游離脂肪酸相互作用，維持油脂體的穩(wěn)定性。

空間位阻：油脂體在pH 7.0時(shí)帶負(fù)電，負(fù)電性的油脂體通過靜電斥力阻止了聚集和聚合。調(diào)節(jié)油脂體溶液的pH 7.0～6.5時(shí)，發(fā)生了聚集，但是并未發(fā)生聚合，這可能是蛋白質(zhì)空間位阻作用的結(jié)果，Tzen等[9]的酶解實(shí)驗(yàn)則更明確地說明油體蛋白的存在阻止了油脂體間磷脂的相互作用，即蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)（主要是N端和C端）提供了一定的空間位阻，阻止了油脂體之間發(fā)生聚集、聚合等現(xiàn)象。

油脂體中的蛋白不僅對維持油脂體的穩(wěn)定具有重要作用，而且對種子的合成也有影響。在酵母菌中表達(dá)的擬南芥油體鈣蛋白具有氧化還原酶活性，而鈣的存在對環(huán)化酶活性具有重要影響[38]，因此，油體鈣蛋白可能與植物的生物合成有關(guān)。與油體蛋白直接結(jié)合油脂體不同，油體鈣蛋白首先在內(nèi)膜中形成小囊泡，迅速地移動到油脂體表面與之結(jié)合[22]，鈣離子在整個(gè)過程中起著調(diào)節(jié)油體鈣蛋白表面性質(zhì)和聚集性的作用[31]。

此外，油脂體蛋白上還含有脂肪酶、乙醛酸循環(huán)酶[39]等的結(jié)合位點(diǎn)，是脂肪酶的激活劑，從而為油脂體的代謝起作用，為種子萌發(fā)提供能量[40]。Purkrtova等[31]發(fā)現(xiàn)油體蛋白缺失型擬南芥種子胚芽中的油脂體呈不規(guī)則狀，且種子萌發(fā)緩慢。Poxleitner等[41]研究了油體鈣蛋白缺失型油脂體對種子萌發(fā)的影響，發(fā)現(xiàn)兩種缺失型種子，其萌發(fā)率雖未受影響，但萌發(fā)速率遠(yuǎn)低于野生型。此外，Schmidt等[42]通過RNA干擾（RNAi）技術(shù)干擾種子中油脂體的油體蛋白表達(dá)，與野生型對照，油體蛋白缺失型種子生長明顯慢于野生型（圖4）。

圖4 野生型和油體蛋白RNAi型種子7 d后的生長狀況[[4422]]Fig.4 Growth status of wild-type germinated seeds and germinated seeds with 24-kD oleosin knockdown after seven days[42]

由此推斷油體蛋白和油體鈣蛋白都對脂肪酶等脂代謝酶類起激活作用，從而保證種子在萌發(fā)過程中有能量來源，當(dāng)油體鈣蛋白或油體蛋白缺失時(shí)，僅油體蛋白或油體鈣蛋白起作用，因此降低了TAG的代謝速率，從而延緩了能量供給，導(dǎo)致種子萌發(fā)緩慢。同時(shí)也表明油脂體蛋白質(zhì)具有維持油脂體抵抗不良環(huán)境的能力，從而提高植物的生存能力。

對人工合成油脂體進(jìn)行研究發(fā)現(xiàn)，以油體鈣蛋白作為合成底物的油脂體粒徑較油體蛋白的小，熱穩(wěn)定性也更高[43]。Pei等[44]以油體鈣蛋白、磷脂和中性脂質(zhì)人工合成油脂體，得到了同樣的結(jié)果；結(jié)合二者的結(jié)構(gòu)特征推測，即油體鈣蛋白是更為原始的蛋白。兩者之間存在矛盾，即油體鈣蛋白具有更強(qiáng)的維持油脂體穩(wěn)定的能力，但是按自然選擇學(xué)說，生物體應(yīng)該是向有利的方向變異、進(jìn)化的，若油體蛋白維持油脂體完整、穩(wěn)定的能力不如油體鈣蛋白，說明這種進(jìn)化、演變并不是向有利的方向發(fā)展。導(dǎo)致這種矛盾產(chǎn)生的原因可能是，油體蛋白可能具有絕對優(yōu)于油體鈣蛋白的其他作用，從而使得油脂體最終選擇油體蛋白而非油體鈣蛋白作為其主要結(jié)構(gòu)功能蛋白質(zhì)。

4 油脂體及油脂體蛋白的提取

油脂體的提取方法主要有：化學(xué)試劑提取法和水提取法，兩種方法的基本步驟類似，不同之處在于提取劑的使用。以水提取法為例：將含油脂體的植物原材料（如玉米、大豆、花生等），加入5倍水（m/V），調(diào)節(jié)pH 9.0，1 200 r/min攪拌24 h，打漿，過濾。調(diào)節(jié)濾液的pH 5.0、3 800×g離心30 min，浮層即為粗油脂體。對粗油脂體進(jìn)行水洗離心2次或多次，以得到純度較高的油脂體?；瘜W(xué)試劑提取法采用的則是不同的緩沖液，如50 mmol/L的三羥甲基氨基甲烷（tris aminomethane，Tris）-HCl加0.4 mol/L果糖以及0.5 mol/L氯化鈉緩沖液[45]，也有的采用0.1 mol/L Tris-HCl、1 mmol/L乙二胺四乙酸（ethylene diamine tetraacetic acid，EDTA）緩沖液[46]，而提純油脂體所使用的試劑也不同，有吐溫-20[30]，離液劑（主要是尿素、硫脲等）[30]和聚乙二醇辛基苯基醚（Triton X-100）[23]等。水提取法的優(yōu)點(diǎn)是安全性高，沒有添加化學(xué)試劑等，因此適合于加工生產(chǎn)，食用性強(qiáng)?；瘜W(xué)試劑提取法的優(yōu)點(diǎn)則是純度高、產(chǎn)量高，但極可能殘留化學(xué)試劑，因此一般用于實(shí)驗(yàn)研究。

油脂體蛋白的提?。阂阅蛩亍⒘螂?、SDS、二硫蘇糖醇（DL-dithiothreitol，DTT）等制備緩沖液，油脂體與緩沖液按1∶2比例配制，4℃保溫1 h。然后轉(zhuǎn)移至Tris-HCl（pH 7.4）、Triton X-100、抗壞血酸、DTT、不溶性聚乙烯吡咯烷酮（polyvingypyrrolidone，PVPP）、蛋白酶抑制劑配制的緩沖液中，于4℃條件下提取6 h，10 000×g離心30 min。取上清液，加入三氯乙酸（trichloroacetic acid，TCA）、DTT、丙酮，-20℃過夜，沉淀用丙酮洗3次，每次15 min即得油脂體蛋白[47]。

5 結(jié) 語

近年來，對油脂體的關(guān)注度不斷提高，這主要是由于油脂體潛在的利用價(jià)值。目前，油脂體中的蛋白質(zhì)已經(jīng)被大量運(yùn)用于生物技術(shù)[48-49]中；此外，油脂體還具有應(yīng)用于食品、藥品、化妝品、個(gè)人洗化用品[6,50]等中的潛在價(jià)值。但是對油脂體的應(yīng)用及油脂體自身還存在許多未解決的問題，如油脂體的工業(yè)化生產(chǎn)應(yīng)用還有待研究；油脂體蛋白的二級結(jié)構(gòu)目前還存在爭議；油體蛋白質(zhì)、油體鈣蛋白質(zhì)的區(qū)別與聯(lián)系也有待進(jìn)一步的研究，這將有利于探討油脂體獨(dú)特的生理功能。關(guān)于油體鈣蛋白的手型EF以及甾醇蛋白的功能，目前研究的也相對較少。總之，油脂體具有非常高的潛在利用價(jià)值，而對油脂體進(jìn)一步的研究將有利于推動油脂體多方面的應(yīng)用，促進(jìn)各行業(yè)的發(fā)展。

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Review of Research on Components, Structure and Proteins of Oil Body

HU Qi, GUO Shiwen, L? Ying, SHI Xiaodi, GUO Shuntang*
(College of Food Science and Nutritional Engineering, China Agricultural University, Beijing 100083, China)

Oil body is an important oil storage organ that contains a matrix of triacylglycerol surrounded by a layer of phospholipid with proteins inserted in it. Proteins in oil body have great effect on maintaining oil body as individual entities and activating related enzymes on the surface of oil body during seed germination, which can be helpful for accelerating metabolism and providing energy, thus promoting the growth of plants. This article systematically states the components, structure of oil body, and the functions and structure of oil body proteins in order to provide a theoretical reference for the industrial application of oil body.

oil body; oleosin; caleosin; steroleosin

S38

1002-6630（2015）11-0230-06

10.7506/spkx1002-6630-201511043

2014-07-11

“十二五”農(nóng)村領(lǐng)域國家科技計(jì)劃項(xiàng)目（2013AA102208）

胡琪（1990—），女，碩士，主要從事食品加工研究。E-mail：Nicole1010796405@163.com

*通信作者：郭順堂（1962—），男，教授，博士，主要從事蛋白質(zhì)加工與利用研究。E-mail：shuntang@cau.edu.cn