李 勁 ，張朝輝 ，蔡冬冬 ，劉 進 ，廖 昆 ，彭玉婷

（1.四川省甘孜州動物疫病預(yù)防控制中心，四川 康定 626000；2.四川省動物疫病預(yù)防控制中心，四川 成都 610041；3.四川省白玉縣動物疫病預(yù)防控制中心，四川 白玉 627150）

口蹄疫是由口蹄疫病毒引起的以偶蹄動物感染為主的急性、熱性、高度接觸性傳染病，被世界動物衛(wèi)生組織列為一類傳染病之首。四川省甘孜州自然條件惡劣、災(zāi)害頻繁，加之經(jīng)濟落后，致使全州的動物防疫工作滯后，特別是在技術(shù)研究領(lǐng)域基本處于空白。長期以來，全州對牦?？谔阋叩姆揽兀饕獏⒄拯S牛的免疫規(guī)程進行，免疫后的效果及保護性等方面沒有完整的依據(jù)。開展牦牛O型口蹄疫免疫程序研究，確定牦牛的最佳免疫次數(shù)及首免時間，對于藏區(qū)有效控制牦?？谔阋哂兄卮笠饬x。

1 材料與方法

1.1 試驗動物 來自甘孜州白玉縣昌臺種畜場。犢牛組：選擇健康的牦牛犢30頭；試驗組及對照組：選擇120頭健康成年牦牛，分成3個試驗組（A、B、C）及一個對照組（D）。所選試驗牦牛在上年年底進行過口蹄疫免疫。

1.2 疫苗及檢測試劑 O型亞洲I型二價滅活苗（OJMS+JSL），金宇保靈生物藥品有限公司生產(chǎn)；O型口蹄疫抗體液相阻斷ELISA（LB-ELISA）檢測試劑盒，購自蘭州獸醫(yī)研究所，試劑批號：2013121901。

1.3 免疫方法 A組在首次免疫后2周進行二免；B組在首次免疫后4周進行二免；C組在首次免疫后6周進行二免；D組為對照組，只免疫1次。免疫劑量為每次2.5mL。

1.4 樣品采集 頸靜脈采血，無菌分離血清，-20℃保存。犢牛組：在出生后第15、30、45、60d采集血清進行母源抗體檢測；試驗組及對照組:在免疫前先采樣一次，對照組在免疫后、試驗組在加強免疫后的第2、4、9個月又一次采集血清進行抗體檢測。

1.5 抗體檢測 用液相阻斷ELISA試驗檢測O型口蹄疫抗體,方法按照試劑盒說明書進行。按照試劑盒判斷標(biāo)準(zhǔn)，當(dāng)抗體效價大于或等于27（即128）時為抗體陽性，對牛有99%以上的保護。

2 結(jié)果及分析

2.1 犢牛母源抗體檢測結(jié)果 用液相阻斷ELISA方法對牦牛犢的O型口蹄疫母源抗體進行了檢測，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，15日齡時母源抗體的滴度較高,為犢牛提供了良好的保護水平；隨著日齡增長，犢?？贵w滴度逐漸下降，至60日齡時抗體滴度回落至臨界值附近，此時應(yīng)及時進行口蹄疫疫苗免疫。試驗結(jié)果說明，60日齡是牦牛較理想的口蹄疫首免日期（結(jié)果詳見表1、圖 1）。

表1 牦牛犢母源抗體平均效價變化（xˉ±sd）

2.2 各試驗組和對照組的抗體檢測結(jié)果 用液相阻斷ELISA方法對各試驗組和對照組進行抗體檢測，結(jié)果發(fā)現(xiàn)各組在加強免疫后2個月至9個月，抗體滴度呈現(xiàn)下降趨勢，但是2個月至4個月各組的抗體滴度始終維持在較高水平，尤其是A組抗體滴度遠高于其他組；加強免疫后9個月試驗B組和D組的抗體滴度接近臨界值，A組和C組的抗體滴度相近并高于臨界值。試驗結(jié)果表明，A組的平均抗體滴度最高，建議牦牛在首免后2周進行加強免疫（結(jié)果詳見表 2、圖 2）。

圖1 牦牛犢母源抗體效價變化曲線

表2 各試驗組和對照組平均抗體效價變化（±sd）

表2 各試驗組和對照組平均抗體效價變化（±sd）

組別 免疫前加強免疫后9個月A 組 227.95±183.31 1044.00±419.50 621.00±270.63 278.26±228.65 B 組 235.83±292.89 550.00±333.75 386.05±329.77 151.88±98.99 C 組 248.17±356.67 570.79±502.90 435.35±401.61 281.69±338.68 D 組 227.23±110.95 936±443.22 594±286.69 140.93±107.13加強免疫后2個月加強免疫后4個月

圖2 各試驗組和對照組的抗體效價變化曲線

3 結(jié)論

3.1 牦牛犢母源抗體消長情況 本試驗中牦牛犢的母源抗體在60日齡時已經(jīng)下降至臨界值附近，此時母源抗體對疫苗的免疫影響較小，為避免留下免疫空擋，建議牦牛犢首次的免疫時間在60日齡左右。

3.2 成年牦牛的免疫時間 生產(chǎn)實際中一般應(yīng)在抗體滴度下降到臨界值以前就進行再次免疫，以降低疫病發(fā)生風(fēng)險。從本試驗結(jié)果看，成年牦牛在首次免疫后2周進行加強免疫，其效果是最好的。

[1]劉穎，冉多良，王香祖.O型口蹄疫疫苗免疫家畜抗體水平的檢測[J].動物醫(yī)學(xué)發(fā)展，2008，29（10）:38-41.

[2]賈澤穎，劉鄧，郭又春，等.奶牛O型、亞洲型、A型口蹄疫免疫抗體變化規(guī)律觀察[J].中國奶牛，2013，（4）:36-38.