陽 佳，劉壽行，劉 展

(湖南師范大學(xué)第一附屬醫(yī)院，湖南省人民醫(yī)院消化內(nèi)科，湖南 長沙 410005)

胃癌是我國最常見的惡性腫瘤之一，在我國其發(fā)病率居各類腫瘤的首位［1］。胃癌可發(fā)生于任何年齡、胃的任何部位，其發(fā)病有明顯的地域性差別，在我國的西北與東部沿海地區(qū)胃癌發(fā)病率比南方地區(qū)明顯為高，因此了解胃癌的病因，加強(qiáng)胃癌的預(yù)防對胃癌的早期診斷、治療及其預(yù)后至關(guān)重要［1，2］。Ack1 是主要分布于胞漿的非受體酪氨酸激酶，具有催化底物蛋白酪氨酸殘基磷酸化、激活底物酶活性的功能［8］。近年來，國內(nèi)外研究顯示，Ack1 表達(dá)的激活與腫瘤的發(fā)生、侵襲、轉(zhuǎn)移等過程相關(guān)，已在其他臟器中有所體現(xiàn)，但在胃癌中暫無相關(guān)報道。本實(shí)驗(yàn)將通過免疫組化的方法對Ack1 蛋白在胃癌中的表達(dá)及其臨床意義進(jìn)行研究。

1 材料與方法

1.1 材料

收集2013年1月～2013年11月湖南省人民醫(yī)院胃腺癌手術(shù)后病理科保存胃癌石蠟標(biāo)本60 例作為胃癌組，其中男性38 例，女性22 例。年齡35 ～78 歲，平均年齡56.37 歲。收集癌旁組織(距腫瘤邊緣2 ～5cm)15 例作為癌旁組織，同期術(shù)后正式為良性疾病的為組織15 例作為正常組。Ack1 多克隆抗體購自abcam 公司;即用型非生物素免疫組化EliVi-sionTMsuper 檢測試劑盒、DAB 顯色劑、檸檬酸抗原修復(fù)液及PBS 緩沖液粉劑等購自福州邁新生物技術(shù)公司。

1.2 方法

1.2.1 制片及分類

全部石蠟標(biāo)本連續(xù)切片，用免疫組織化學(xué)SP法檢測胃癌組織、癌旁組織及正常為組織Ack1 的表達(dá)。嚴(yán)格按照試劑盒說明書只是步驟操作，取Ack1 一抗稀釋濃度為1:50，用PBS 緩沖液作為陰性對照。試驗(yàn)組所有病例均依據(jù)國際抗癌聯(lián)盟第7版胃癌TNM 分期系統(tǒng)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行分期，按性別、年齡、腫瘤大小、TNM 分期，有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移進(jìn)行分類。

1.2.2 判定標(biāo)準(zhǔn)

結(jié)果進(jìn)行半定量分析，按陽性著色范圍和陽性著色強(qiáng)度分別記為:0 ～10%為0 分，11% ～30% 為1 分，31% ～50% 為2 分，51% ～70% 為3 分，＞70%為4 分。顯色弱為0 分，中等為1 分，強(qiáng)為2分，極強(qiáng)為3 分。兩者相加，積分0 ～1 分為陰性“－”，2 分為弱陽性“+”，3 分為陽性“++”，4 分級以上為強(qiáng)陽性“+++”。

1.2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

用SPSS13.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，定性資料率的比較用卡方檢驗(yàn);非參數(shù)檢驗(yàn)用Wilcoxon 秩和檢驗(yàn)、Kruskal-Wallis H 檢驗(yàn)，檢驗(yàn)儀α=0.05，P ＜0.05為差異，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 Ack1 蛋白在胃癌組織、癌旁組織及正常為組織中的表達(dá)特點(diǎn)

研究結(jié)果顯示Ack1 蛋白在胃癌組織中表達(dá)升高，在癌旁組織中的有部分表達(dá)，在正常組織中表達(dá)降低或無表達(dá)。顯微鏡下可見細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞膜中棕褐色顆粒著色即為陽性表達(dá)。Ack1 蛋白在胃癌組中未見陰性表達(dá)，弱陽性表達(dá)8 例，陽性表達(dá)22 例，強(qiáng)陽性表達(dá)30 例;癌旁組織中陰性表達(dá)1 例，弱陽性表達(dá)7 例，陽性表達(dá)4 例，強(qiáng)陽性表達(dá)3 例;正常為組織中陰性表達(dá)9 例，弱陽性表達(dá)6 例，未見陽性及強(qiáng)陽性表達(dá)(圖1)。三者比較非參數(shù)檢驗(yàn)Kruskal-Wallis H 檢驗(yàn)得P ＜0.05，可認(rèn)為胃癌組織、癌旁組織及正常衛(wèi)組織中Ack1 蛋白的表達(dá)有差異。三者兩兩比較以秩和檢驗(yàn)Wilcoxon 檢驗(yàn)得到Ack1 蛋白在胃癌組織與正常組織、胃癌組織與癌旁組織中的表達(dá)有差異，P ＜0.05，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。在正常組織與癌旁組織中的表達(dá)(P ＞0.05)，無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.2 Ack1 蛋白的表達(dá)與胃癌患者臨床病例特征的關(guān)系

Ack1 蛋白的表達(dá)與胃癌患者的分化程度及TNM 分期有關(guān)，分化程度越低、TNM 分期越高，Ack1 蛋白表達(dá)的陽性率就越高(P ＜0.05)。Ack1蛋白的表達(dá)與患者性別、年齡、腫瘤部位及是否發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無關(guān)(P ＞0.05)，見表1。

圖1 顯微鏡下所示Ack1 蛋白在胃腺癌、癌旁及正常組織中的表達(dá)

表1 Ack1 蛋白表達(dá)陽性率與臨床病例參數(shù)的關(guān)系比較

3 討論

Ack1 蛋白是1993年，Manser 等人在尋找小G蛋白Cdc42 的作用蛋白時發(fā)現(xiàn)的。是一種主要結(jié)合GTP-Cdc42(活化形式的Cdc42)蛋白，是一種非受體型酪氨酸激酶［3］。Ack1 基因定位于人染色體3q29，其編碼蛋白大小約120KD，主要定位于細(xì)胞胞漿，其分子結(jié)構(gòu)包括一個激酶區(qū)、一個SH3 區(qū)、一個Cdc42/Rac 結(jié)合區(qū)和一個富含脯氨酸的羥基端［9］。Ack1 蛋白屬于酪氨酸激酶家族，最早作為Cdc42 下游的作用蛋白被發(fā)現(xiàn)。已有研究表明，Ack1 作為Cdc42 下游的效應(yīng)器參與了多條信號通路，在細(xì)胞增殖、運(yùn)動和侵襲中發(fā)揮重要作用［3，4-6］。之后，Van der Horst 等人通過比較基因組雜交的技術(shù)分析發(fā)現(xiàn)，Ack1 在人的乳腺癌、食道癌、胰腺癌、卵巢癌和前列腺癌等多種腫瘤組織中存在著不同程度的表達(dá)上調(diào)［7-9］。但Ack1 在腫瘤組織中表達(dá)上調(diào)的機(jī)制目前尚不十分明了。在最近的一項(xiàng)研究中現(xiàn)實(shí)Ack1 在腫瘤中的表達(dá)上調(diào)可能亦與其低甲基化有關(guān)［10］。

本研究通過免疫組化的方法首次初步研究了Ack1 蛋白在人胃癌組織、癌旁組織、正常組織中表達(dá)的差異，結(jié)果以半定量方法經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)比較后發(fā)現(xiàn)Ack1 蛋白在胃癌組織、癌旁組織及正常衛(wèi)組織中的表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。Ack1 蛋白在胃癌組織與正常組織、胃癌組織與癌旁組織中的表達(dá)差異也有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。而在正常組織與癌旁組織中的表達(dá)無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。Ack1 蛋白的表達(dá)與胃癌患者的分化程度及TNM 分期有關(guān)，分化程度越低、TNM分期越高，Ack1 蛋白表達(dá)的陽性率就越高。Ack1蛋白的表達(dá)與患者性別、年齡、腫瘤部位及是否發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無關(guān)。

本文結(jié)果顯示Ack1 作為一個具有強(qiáng)大功能的酪氨酸激酶在胃癌的發(fā)生、生長過程中發(fā)揮了十分重要的作用。與組織細(xì)胞形態(tài)學(xué)相結(jié)合，有助于臨床胃癌診斷，為惡性腫瘤的防治提供一個新的診斷、預(yù)后標(biāo)志物和一個潛在的治療靶點(diǎn)。

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