施 雅 張小剛 王 霞 何亞斌 鄭小平

（上海德諾產(chǎn)品檢測有限公司，上海 200436）

螺蟲乙酯是拜耳公司開發(fā)的新穎殺蟲殺螨劑，屬季酮酸類化合物［1－3］，它與該公司的殺蟲殺螨劑螺螨酯和螺甲螨酯屬同類物質(zhì)。螺蟲乙酯的作用機(jī)理與其他的殺蟲劑不同，它是通過干擾昆蟲的脂肪生物合成導(dǎo)致幼蟲死亡，降低成蟲的繁殖能力。螺蟲乙酯為低毒性殺蟲劑，在土壤中易降解，可有效防治木虱、粉虱、介殼蟲、棉盲蝽等害蟲［4，5］，其結(jié)構(gòu)式見圖1。

圖1 螺蟲乙酯結(jié)構(gòu)式Figure 1 Chemical structure of spirotetramat

雖然螺蟲乙酯屬于低毒性殺蟲劑，但是從環(huán)境安全性評價來說，螺蟲乙酯難揮發(fā)、難光解，在土壤中可以被降解，但是其降解產(chǎn)物在土壤中有一定的移動性，很容易交叉污染。目前，國外對于防止螺蟲乙酯危害也制定了限量，美國環(huán)保署發(fā)布對農(nóng)藥螺蟲乙酯限量為0.20～9.00mg/kg，加拿大衛(wèi)生部發(fā)布對農(nóng)藥螺蟲乙酯限量為0.08～9.00mg/kg，歐盟的限量為0.20～15.00mg/kg。目前，中國對于螺蟲乙酯還沒有提出限量要求，國內(nèi)外測定螺蟲乙酯的方法也沒有形成統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)，液相色譜—串聯(lián)質(zhì)譜法因其具有高速、高效、高靈敏度等優(yōu)點(diǎn)，而被廣泛應(yīng)用于食品安全檢測中［6－11］。本試驗采用QuECHERS前處理方法，利用超高效液相色譜—串聯(lián)質(zhì)譜法測定4種果蔬中螺蟲乙酯殘留量。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

1.1.1 材料與試劑

乙腈：色譜純，德國Merck公司；

甲酸、MgSO4：分析純，美國Sigma公司；

C18粉、Cleanert PestiCarb：天津博納艾杰爾科技有限公司；

螺蟲乙酯標(biāo)準(zhǔn)品：純度＞98.5%，德國Dr.Ehrenstorfer公司；

試驗用水：均為去離子水；

標(biāo)準(zhǔn)貯備液配制：準(zhǔn)確稱取螺蟲乙酯標(biāo)準(zhǔn)品10.00mg，加入乙腈溶解并定容至25mL，配制成螺蟲乙酯標(biāo)準(zhǔn)貯備液（－20℃保存）；

標(biāo)準(zhǔn)中間溶配制：準(zhǔn)確移取適量標(biāo)準(zhǔn)貯備液，用乙腈稀釋成1.0μg/mL標(biāo)準(zhǔn)中間液（－4℃保存）；

標(biāo)準(zhǔn)工作液配制：吸取適量中間液，用空白樣品提取液稀釋到所需的標(biāo)準(zhǔn)工作液。

1.1.2 儀器設(shè)備

超高效液相色譜—串聯(lián)質(zhì)譜儀：Waters XEVO TQ型，ESI源，美國沃特世公司；

高速均質(zhì)機(jī)：T18basic型，德國IKA公司；

高速冷凍離心機(jī)：HeraeusMultifuge X1R型，美國熱電公司；

渦旋振蕩器：Talboys型，上海安譜科學(xué)儀器有限公司；

氮吹儀：DSY-VI型，北京東方精華苑科技有限公司。

1.2 試驗方法

1.2.1 樣品前處理 稱?。?0±0.05）g樣品，置于50mL離心管中，加入2%甲酸乙腈溶液20mL，均質(zhì)30s，加入5 mL飽和NaCl溶液，渦旋震蕩混勻1min，8 000r/min離心5 min。

取上述上清液2mL于15mL離心管中，加入100mg石墨化碳，100mg C18，200mg MgSO4粉末，渦旋混勻1 min，2 000r/min離心3min，取上清液過0.22μm有機(jī)相濾膜至進(jìn)樣瓶中，試液供UPLC—MS/MS測定。

1.2.2 超高效液相色譜條件 色譜柱：ACQUITY UPLCBEH C18（2.1mm×50mm，1.7μm 粒徑）；流動相：0.1%甲酸水溶液（V/V）＋ 乙腈（梯度洗脫見表 1）；流速：3 00μL/min；柱溫：30℃；進(jìn)樣量：5.0μL。

1.2.3 質(zhì)譜條件 離子源：電噴霧離子源；掃描方式：正離子模式；檢測方式：多反應(yīng)檢測；離子源溫度：150℃；毛細(xì)管電壓：2.0kV；霧化溫度：400℃；霧化氣流速：800L/h；定性、定量離子對及對應(yīng)的錐孔電壓和碰撞能量見表2。

表1 流動相梯度洗脫條件Table 1 Gradient elution table of the mobile phase

表2 螺蟲乙酯的質(zhì)譜參數(shù)Table 2 The MS parameters of spirotetramat

2 結(jié)果討論

2.1 儀器分析條件的選擇

本試驗采用乙腈—水溶液（0.1% 甲酸）作為流動相，流動相中加入0.1%甲酸，增加了目標(biāo)化合物在噴霧前的離子化程度，提高了檢測的靈敏度，離子流圖見圖2。本試驗采用C18色譜柱，利用其對極性化合物強(qiáng)保留的特點(diǎn)，在本試驗采用的流動相、色譜柱和洗脫比例條件下，螺蟲乙酯能夠與基質(zhì)中的雜質(zhì)分離，實現(xiàn)了對螺蟲乙酯的定性和定量的測定，液相梯度洗脫條件見表1。

將螺蟲乙酯標(biāo)準(zhǔn)品溶液采用流動注射直接進(jìn)樣，通過全掃描確定化合物母離子，再對母離子進(jìn)行二級質(zhì)譜掃描，得到碎片離子，通過優(yōu)化條件，得到二級質(zhì)譜圖。通過多反應(yīng)離子監(jiān)測（MRM）選擇相對豐度較高的離子對，確定為定性定量離子對，并優(yōu)化毛細(xì)管電壓、錐孔電壓、碰撞電壓等參數(shù)，優(yōu)化后的質(zhì)譜條件見表2。

2.2 線性范圍和檢出限

選取花菜、大白菜、萵苣、橙子4種樣品，按照前處理方法處理，采用所得到的基質(zhì)溶液配制標(biāo)準(zhǔn)曲線，標(biāo)準(zhǔn)曲線濃度分別為0，0.25，0.5，2.0，5.0，20.0ng/mL，經(jīng)測定后以標(biāo)準(zhǔn)溶液中被測組分峰面積為縱坐標(biāo)，以濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，在4種基質(zhì)中螺蟲乙酯相應(yīng)的回歸方程及相關(guān)系數(shù)見表3。

由表3可知，在0.25～20.00ng/mL范圍內(nèi)螺蟲乙酯濃度與其色譜峰面積響應(yīng)值呈良好的線性關(guān)系。螺蟲乙酯標(biāo)準(zhǔn)溶液的多級反應(yīng)監(jiān)測（MRM）色譜圖見圖2。由圖2可知，0.5ng/mL的螺蟲乙酯響應(yīng)值良好。

表3 螺蟲乙酯在4種果蔬基質(zhì)加標(biāo)的回歸方程和相關(guān)系數(shù)Table 3 Linear equations and correlation coefficients for spirotetramat in four matrices

圖2 螺蟲乙酯標(biāo)準(zhǔn)品的MRM色譜圖Figure 2 MRM chromatogram ofspirotetramat standards

2.3 準(zhǔn)確度和精密度

在本方法確定的條件，選擇花菜、大白菜、萵苣、橙子4種果蔬作為基質(zhì)樣品，進(jìn)行0.5，1.0，10.0μg/kg 3個水平的添加回收試驗，各水平進(jìn)行6次平行測定，回收率和精密度見表4。

由表4可知，在這4種果蔬中添加不同含量的螺蟲乙酯，其平均回收率達(dá)到91.7%～114.3%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差小于10%，表明該方法對不同樣品和不同含量的螺蟲乙酯的測定均具有很好的準(zhǔn)確度和精密度。

不同基質(zhì)添加0.5μg/kg螺蟲乙酯的 MRM色譜圖見圖3～6。由圖3～6可知，在花菜、大白菜、萵苣、橙子4種果蔬中添加濃度為0.5μg/kg時，用各標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)響應(yīng)值良好，基質(zhì)效應(yīng)干擾小，信噪比滿足檢測要求，證明該方法靈敏度高，能滿足檢測條件。

表4 螺蟲乙酯在不同果蔬中加標(biāo)回收率及精密度測定結(jié)果Table 4 Recoveries and relative standard deviations of spirotetramat in four matrices

圖3 萵苣中螺蟲乙酯加標(biāo)的MRM色譜圖Figure 3 MRM chromatogram of spirotetramat in lettuce

圖4 花菜中螺蟲乙酯加標(biāo)的MRM色譜圖Figure 4 MRM chromatogram of spirotetramat in broccoli

圖5 白菜中螺蟲乙酯加標(biāo)的MRM色譜圖Figure 5 MRM chromatogram of spirotetramat in cabbage

圖6 橙子中螺蟲乙酯加標(biāo)的MRM色譜圖Figure 6 MRM chromatogram of spirotetramat in orange

3 結(jié)論

本試驗建立了超高效液相色譜—串聯(lián)質(zhì)譜法測定4種果蔬中螺蟲乙酯的檢測方法。采用酸化乙腈提取，經(jīng)過C18、石墨化碳和 MgSO4粉末吸附，消除了色素、脂類物質(zhì)的干擾，再應(yīng)用ACQUITY UPLE?BEH C18色譜柱分離，采用多反應(yīng)監(jiān)測模式，電噴霧串聯(lián)四級桿質(zhì)譜進(jìn)行檢測，實現(xiàn)了對螺蟲乙酯定性、定量測定。該檢測方法線性好、回收率高、快速、靈敏、可靠。

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