楊遠(yuǎn)東，蔡 惠，張靈敏，袁 慧，袁 偉，劉 琳(西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院麻醉科，西安 710061;通訊作者，E-mail:yyd519@163.com)

磷脂酶A2(PLA2)是一種脂質(zhì)代謝酶，參與多種前炎癥因子的合成代謝，其主要由激活的炎性細(xì)胞分泌釋放，在炎癥反應(yīng)中活性明顯增高，并參與到多種疾病的發(fā)生、發(fā)展，如惡性腫瘤等。目前的研究顯示，多種麻醉藥物能影響到機(jī)體的免疫、炎癥反應(yīng)，調(diào)節(jié)不同炎癥因子的活化或釋放，其中，異丙酚及依托咪酯由于是臨床最常用的靜脈麻醉藥物，往往受到更多的關(guān)注。這兩種麻藥均具有起效快、作用時(shí)間短、恢復(fù)迅速而平穩(wěn)，對(duì)呼吸循環(huán)影響輕微的特點(diǎn)［1］。但研究發(fā)現(xiàn)，這兩種靜脈麻醉藥物在用于臨床麻醉誘導(dǎo)及維持時(shí)表現(xiàn)出不同的免疫、炎癥調(diào)節(jié)作用［2］。當(dāng)機(jī)體發(fā)生損傷或炎癥時(shí)，異丙酚能通過抑制中性粒等細(xì)胞的功能顯著降低IL-1、IL-6、IL-8、IFN-γ、TNF-α 等炎癥因子的釋放，而大多研究認(rèn)為依托咪酯抑制炎癥反應(yīng)的能力較異丙酚低，但該結(jié)論仍存在一定的爭(zhēng)議［3］。而對(duì)于其能否影響PLA2的活性尚無相關(guān)研究，同時(shí)，關(guān)于這兩種麻醉藥物對(duì)正常機(jī)體中炎癥因子的作用也無類似報(bào)道。

為此，本研究擬通過檢測(cè)異丙酚及依托咪酯作用于實(shí)驗(yàn)兔后血清中的PLA2活性及其他炎癥因子濃度的變化，研究各炎癥因子之間的相關(guān)性，以期發(fā)現(xiàn)這兩種麻醉藥物對(duì)正常動(dòng)物體內(nèi)PLA2等炎癥因子的不同影響，為研究其影響機(jī)制提供前期基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與分組

新西蘭大白兔24只，雌雄不拘，體重大于2 kg，由西安交通大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，常規(guī)混合飼料喂養(yǎng)。隨機(jī)分為3組，每組8只:對(duì)照組(C組)、異丙酚組(P組)和依托咪酯組(E組)。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

固定動(dòng)物后，由耳緣靜脈分別注入誘導(dǎo)劑量的異丙酚(2 mg/kg，P 組)或依托咪酯(0.3 mg/kg，E組)后，異丙酚4 mg/(kg·h)或依托咪酯 0.6 mg/(kg·h)維持泵入2 h。對(duì)照組動(dòng)物由等量生理鹽水替代藥物。所有實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分別于藥物干預(yù)前(T0)、麻藥誘導(dǎo)后10 min(T1)、維持劑量后60 min(T2)、120 min(T3)及停止用藥后60 min(T4)、120 min(T5)時(shí)采集靜脈血，2 000 r/min離心10 min后，取上清液，液氮保存。

1.3 指標(biāo)檢測(cè)

血清磷脂酶A2活性定量測(cè)定參照Cai等［4］描述的熒光底物激發(fā)方法，血清白介素6(IL-6)、腫瘤壞死因子α(TNF-α)及C反應(yīng)蛋白(CRP)濃度采用ELISA法測(cè)定(ELISA試劑盒均購于美國R＆D公司)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 一般資料的比較

選用的24只新西蘭大白兔，雄性為14只，雌性10只，平均年齡(10 ±1.4)月，體重為(4.2 ±0.7)kg，三組動(dòng)物性別、年齡、體重比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P ＞0.05)。

2.2 血清PLA2活性的比較

麻醉藥物干預(yù)前(T0)，實(shí)驗(yàn)兔血清PLA2平均活性值分別為 C組(476±99.2)intensity/(min·μl)、P 組(408 ± 95.4)intensity/(min·μl)、E 組(435±92.5)intensity/(min·μl)，三組 PLA2活性差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.425)，基線水平一致。當(dāng)給予實(shí)驗(yàn)干預(yù)后，三組動(dòng)物血清PLA2活性在T1時(shí)均表現(xiàn)出不同程度的輕微升高，但與T0時(shí)刻相比，該活性變化無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，且組間相比也無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.320)。隨著給藥的持續(xù)，PLA2活性在三組動(dòng)物中呈現(xiàn)出不同的變化趨勢(shì)(圖1):在C組中，T2、T3的血清PLA2活性未發(fā)生顯著性變化，停藥后兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)測(cè)得的活性值也與基線值相似(P＞0.05);在P組中，隨著藥物的持續(xù)泵入，PLA2的活性呈下降趨勢(shì)，且T3時(shí)的活性明顯低于基線值(299 ±67.0 vs 408 ±95.4，P=0.025);與之相反的是，E組中PLA2活性在給藥后表現(xiàn)為持續(xù)的升高，并在 T2、T3時(shí)分別達(dá)到(596 ±63.7)intensity/(min·μl)及(699 ±77.5)intensity/(min·μl)，與T0相比具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P值分別為 0.047、0.022)。此外，停藥60 min(T4)及120 min(T5)后，這兩組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物血清PLA2的活性迅速向基線值靠近，與T0值相比均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。

圖1 三組兔血清PLA2活性變化趨勢(shì)比較Figure 1 Changes of activation of serum PLA2 in rabbits at different time after different treatments

2.3 血清其他炎癥因子濃度變化的比較

三組實(shí)驗(yàn)兔血清中炎癥因子 IL-6、TNF-α及CRP的濃度變化見表1。不同組別中，這三種炎癥因子的濃度在T0時(shí)均表現(xiàn)出很高的一致性。當(dāng)給予異丙酚后，血清中IL-6及TNF-α的濃度未出現(xiàn)明顯變化，而CRP的濃度呈下降趨勢(shì)。在依托咪酯組，三種炎癥因子的濃度在給藥后(T2、T3)均出現(xiàn)明顯升高(P＜0.05)，且在停藥后又恢復(fù)至基線濃度。

表1 三組兔血清炎癥因子濃度對(duì)比分析 (pg/ml)Table 1 Com parison of expression of inflammatory cytokines at different time between three groups (pg/ml)

2.4 血清PLA2與其他炎癥因子的相關(guān)性分析

對(duì)所有實(shí)驗(yàn)動(dòng)物四種炎癥因子進(jìn)行相關(guān)性分析顯示，PLA2的活性變化與CRP的濃度呈明顯正相關(guān)(r=0.686，P=0.014)，而與 IL-6 及 TNF-α 的表達(dá)無關(guān);同時(shí)，血清IL-6濃度與TNF-α濃度的變化具有較強(qiáng)的相關(guān)性(r=0.876，P ＜0.001)。

表2 血清炎癥因子表達(dá)變化的相關(guān)性分析Table 2 Correlation analysis of expression of seruminflammatory cytokines

3 討論

異丙酚是臨床上最常使用的靜脈全麻藥物之一，近年來大量的研究報(bào)道了其對(duì)患者免疫炎癥功能的影響。證據(jù)顯示，在機(jī)體發(fā)生炎癥反應(yīng)或器官損傷時(shí)，異丙酚能抑制中性粒細(xì)胞、單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞的功能，抑制 COX2和 PGE2合成，從而減少IL-1、IL-6、IL-8、IL-10、TNF-α 等炎癥因子的釋放，具有一定的炎癥抑制及器官功能保護(hù)作用［5-7］。如趙文暉等［8］對(duì)大鼠心肌缺血再灌注損傷的研究中發(fā)現(xiàn)，異丙酚能抑制 TNF-α的表達(dá)，保護(hù)心肌受損。此外，對(duì)于細(xì)菌感染、肺損傷及其他器官缺血再灌注損傷等引起的炎癥反應(yīng)，異丙酚也具有一定的抑制保護(hù)作用［9-13］。但在正常情況下，異丙酚對(duì)機(jī)體炎癥相關(guān)因子的影響尚無相關(guān)報(bào)道。因此，在本研究中我們利用家兔作為研究模型，檢測(cè)異丙酚對(duì)正常動(dòng)物血清中炎癥因子的影響，結(jié)果顯示，異丙酚未能引起正常動(dòng)物血清中IL-6及TNF-α濃度的變化，但卻能降低血清中PLA2的活性及C-反應(yīng)蛋白(C-reaction protein，CRP)的濃度，這表明異丙酚對(duì)各種炎癥因子的作用存在不同的調(diào)控機(jī)制，該機(jī)制有待進(jìn)一步的研究。

PLA2是一種脂質(zhì)代謝酶，參與花生四烯酸、前列腺素、血小板活化因子及溶血磷脂酸的合成代謝。研究顯示，其主要由激活的單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞及中性粒細(xì)胞分泌釋放，在炎癥反應(yīng)中活性明顯增高，是一種重要的炎癥標(biāo)志物［14，15］?？紤]到異丙酚能抑制中性粒細(xì)胞的活性，因此，異丙酚也能降低PLA2的活性。事實(shí)上，吳新軍等［16］的研究發(fā)現(xiàn)，在大鼠小腸缺血再灌注引起肺損傷時(shí)，臨床劑量異丙酚可明顯降低肺組織內(nèi)PLA2活性增高，產(chǎn)生肺保護(hù)作用。在本研究中，我們同樣觀察到異丙酚能顯著降低正常動(dòng)物血清中PLA2的活性，其機(jī)制可能與異丙酚能降低細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度［16］，抑制活性氧代謝產(chǎn)物［16］，從而抑制PLA2激活有關(guān)。此外，我們還發(fā)現(xiàn)PLA2的活性變化與CRP的濃度變化存在相關(guān)性，這與于路等在冠心病患者中的發(fā)現(xiàn)一致［17］，提示PLA2的活化與CRP的分泌可能存在相同的上游信號(hào)通路。

與異丙酚相比，依托咪酯抑制炎癥反應(yīng)的能力較低，但該結(jié)論仍存在爭(zhēng)議。如Ke等［18］認(rèn)為異丙酚和依托咪酯在誘導(dǎo)劑量范圍內(nèi)對(duì)重型創(chuàng)傷患者免疫功能的影響無明顯差異。在本實(shí)驗(yàn)中，依托咪酯促進(jìn)正常機(jī)體中炎癥因子的釋放，表明其可能具有炎癥細(xì)胞激活作用，該現(xiàn)象未見于其他研究報(bào)道，其原因可能與依托咪酯引起的暫時(shí)性腎上腺皮質(zhì)功能低下有關(guān)［19］，但具體機(jī)制有待進(jìn)一步研究。

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