繆榮明 房中華 張穎軼

(無錫市第八人民醫(yī)院，214011)

矽肺是長(zhǎng)期吸入游離二氧化硅(SiO2)粉塵引起的危害最廣和最嚴(yán)重的塵肺病，其主要病理表現(xiàn)是巨噬細(xì)胞性肺泡炎、矽結(jié)節(jié)和塵性纖維化。目前對(duì)巨噬細(xì)胞的作用已有一些研究，但目前其發(fā)病機(jī)制尚不清楚，長(zhǎng)期接觸矽塵造成機(jī)體氧化與抗氧化能力失衡是矽肺的發(fā)病機(jī)制之一[1]。臨床診斷主要依靠胸片的異常，但在明確診斷時(shí)病變已不可逆，造成矽肺的早期診斷困難，給國家和個(gè)人造成嚴(yán)重的負(fù)擔(dān)[2-3]。本研究擬通過觀察矽肺患者外周血中氧化應(yīng)激指標(biāo)變化，探討矽肺的發(fā)病機(jī)制，為探尋新的矽肺治療手段提供依據(jù)。在矽肺肺損傷的發(fā)病機(jī)制中，眾多生物學(xué)因素的作用越來越受到人們的重視。一氧化氮(NO)是一種多功能的生物介質(zhì)，丙二醛(malondiadehycle，MDA)是細(xì)胞膜脂質(zhì)過氧化的終產(chǎn)物之一，關(guān)于它們?cè)谖畏螕p傷中的作用，本文擬進(jìn)行更深一步的探索。

1 資料與方法

1.1 對(duì)象 選擇某餐飲行業(yè)服務(wù)人員50名為對(duì)照組，年齡39.5～61.7歲，平均(49.52±8.21)歲。選擇某鑄造廠接塵工人工齡大于1年者50例(清砂工22例、型砂工24例、其他工種4例)為接塵組，年齡35.6～63.1歲，平均(51.66±8.61)歲。選擇2011-07—09在我院住院及門診隨訪的矽肺患者52例為矽肺組，其中Ⅰ期矽肺24例、Ⅱ期矽肺20例、Ⅲ期矽肺8例(清砂工29例、型砂工23例)；年齡39.2～66.7歲，平均(50.24±11.22)歲。32例觀察對(duì)象組(清砂工19例、型砂工13例)，年齡38.4～60.8歲，平均(52.97±9.19)歲。各組對(duì)象均為男性。剔除高血壓病、糖尿病、心臟病、血液病、風(fēng)濕免疫系統(tǒng)疾病、腫瘤、腎臟病、肝臟病等患者。全部受檢對(duì)象均未從事過各類輻射和有毒作業(yè)，也無長(zhǎng)期接觸過各類農(nóng)藥和毒物，營養(yǎng)和消化吸收功能良好，在受檢前1個(gè)月內(nèi)均未服用維生素C、銀杏葉制劑和茶多酚等抗氧化藥物。各組之間年齡差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

1.2 調(diào)查方法 采用問卷調(diào)查方法，了解研究對(duì)象的粉塵接觸史、吸煙史、既往史、家族史。

1.3 矽肺的診斷 對(duì)研究對(duì)象進(jìn)行矽肺診斷，以確切的矽塵接觸史為前提，技術(shù)質(zhì)量合格的高仟伏X射線后前位胸片為依據(jù)，根據(jù)國家塵肺X線診斷標(biāo)準(zhǔn)，參考受檢者的系列胸片和該單位矽肺發(fā)病情況，由塵肺診斷小組依據(jù)《塵肺病診斷標(biāo)準(zhǔn)》(GBZ 70-2009)進(jìn)行診斷、分期[4]。

1.4 NO活力和MDA采集與檢測(cè)

1.4.1 痰液誘導(dǎo)[5]采用超聲霧化吸入法：受試者靜坐5 min，誘導(dǎo)前10 min吸入沙丁胺醇200μg，霧化前清水漱口5次；將3%的鹽溶液裝入超聲霧化器，取消毒后的噴霧嘴安裝于噴霧管口；打開霧化器，調(diào)節(jié)噴霧量及時(shí)間。讓受試者用口含住噴霧嘴，努力用口深吸氣使噴霧盡可能被吸入肺深部；吸入5 min后關(guān)閉霧化器，讓受試者用力咳痰，用培養(yǎng)皿收集肺深部痰液；重復(fù)的操作，每5 min深咳一次，時(shí)間為20～30 min，要求收集痰液體積至少2 mL；若患者無痰或痰量不足則換用4%高滲鹽水繼續(xù)霧化；若患者無痰或痰量不足則換用5%高滲鹽水繼續(xù)霧化，7 min后終止誘導(dǎo)程序；痰液誘導(dǎo)完畢后填寫記錄表。

1.4.2 痰液處理 取1 mL或0.5 mL無唾液成分的痰液放入軟管中，加入0.1%二硫蘇糖醇(DTT)，濾液用2 000 r/min，4℃離心10 min，取上清液置于－20℃下保存待測(cè)。

1.4.3 試劑與儀器 一氧化氮(NO)酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒(美國Biosource公司)。脂質(zhì)過氧化物丙二醛(MDA)檢測(cè)試劑盒(南京建成生物工程研究所)，全自動(dòng)生化分析儀(美國Beckman公司)，酶標(biāo)儀(美國BIORAD)，紫外可見分光光度計(jì)(北京普析通用)。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，應(yīng)用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。各組指標(biāo)的比較采用單因素方差分析，并對(duì)各檢測(cè)指標(biāo)與矽肺分期進(jìn)行相關(guān)分析。

2 結(jié)果

2.1 各組對(duì)象誘導(dǎo)痰中NO、MDA含量水平的比較(表1)與對(duì)照組比較，接塵組和矽肺組NO含量明顯升高，差異均有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，與對(duì)照組及接塵組比較，矽肺組MDA含量明顯升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。

2.2 觀察對(duì)象組與各期矽肺組NO、MDA水平比較(表2)與各期矽肺組比較，NO和MDA含量改變不明顯，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，說明形成肺纖維化后NO、MDA改變不明顯。

表1 各組對(duì)象NO、MDA含量水平的比較(±s，μmol/L)

表1 各組對(duì)象NO、MDA含量水平的比較(±s，μmol/L)

注：與對(duì)照組比較，*P＜0.01；與對(duì)照組及接塵組比較，△P＜0.05

組別 n NO MDA接塵組 50 71.16±26.42* 4.46±1.21矽肺組 52 82.33±31.56*△ 5.63±1.18△對(duì)照組 50 49.17±21.61 4.13±0.77

表2 觀察對(duì)象組及不同期別矽肺患者誘導(dǎo)痰中NO、MDA含量水平的比較(±s，μmol/L)

表2 觀察對(duì)象組及不同期別矽肺患者誘導(dǎo)痰中NO、MDA含量水平的比較(±s，μmol/L)

組別 n NO MDA觀察對(duì)象 32 73.19±28.43 4.71±1.20矽肺Ⅰ期 24 79.33±31.41 5.13±1.68矽肺Ⅱ期 20 80.43±29.15 5.03±1.24矽肺Ⅲ期 8 84.46±33.16 5.23±1.37

3 討論

矽肺是長(zhǎng)期吸入游離SiO2粉塵引起的危害最廣和最嚴(yán)重的塵肺病，其主要病理表現(xiàn)是巨噬細(xì)胞性肺泡炎、矽結(jié)節(jié)和塵性纖維化，目前認(rèn)為，長(zhǎng)期接觸矽塵造成機(jī)體氧化與抗氧化能力失衡是矽肺的發(fā)病機(jī)制之一。在正常的生理?xiàng)l件下，NO主要通過激活鳥苷酸環(huán)化酶，使細(xì)胞內(nèi)c-GMP水平升高來發(fā)揮其擴(kuò)張血管平滑肌、抑制血小板聚集、抑制血管平滑肌增生等一系列保護(hù)作用。同時(shí)，它還可與機(jī)體內(nèi)的氧自由基直接作用，產(chǎn)生一個(gè)濃度依賴的雙向效應(yīng)，即當(dāng)NO水平較低時(shí)，它可與自由基作用使之消除；而當(dāng)NO過度增高時(shí)，則由于過多的有毒中間體(ONOO-)的產(chǎn)生，反而進(jìn)一步加重細(xì)胞的損傷[6]。說明矽塵作業(yè)工人長(zhǎng)期接觸高濃度矽塵導(dǎo)致機(jī)體氧化與抗氧化能力失衡，造成肺損傷。誘導(dǎo)痰的痰液是源于下呼吸道表面的黏液，是臨床診斷及評(píng)估治療效果的常用標(biāo)本，與肺泡灌洗液及血清相比較，應(yīng)用誘導(dǎo)痰液的標(biāo)本易濃縮、來源豐富，并且有較好的安全性[7]。

有研究表明，氧化指標(biāo)NO含量、SOD活力異常變化，說明機(jī)體氧化和抗氧化系統(tǒng)的失衡，表現(xiàn)為脂質(zhì)過氧化指標(biāo)MDA含量升高，提示矽塵易誘導(dǎo)機(jī)體氧化應(yīng)激的發(fā)生和脂質(zhì)過氧化增加，造成肺組織損傷[8]。矽肺的發(fā)生發(fā)展與機(jī)體氧化和抗氧化系統(tǒng)的失衡狀態(tài)相關(guān)，對(duì)NO、MDA指標(biāo)的監(jiān)測(cè)有利于預(yù)測(cè)矽肺發(fā)生和發(fā)展[9]。

體內(nèi)產(chǎn)生自由基的能力和自由基的清除能力失調(diào)會(huì)導(dǎo)致許多疾病，并在疾病的發(fā)展過程中起著重要作用，MDA升高與自由基的清除能力下降成正比，自由基及其代謝產(chǎn)物造成機(jī)體慢性損傷，生理性衰退。結(jié)果說明了接塵組和矽肺組均存在氧化和抗氧化系統(tǒng)的失衡，矽肺組尤為顯著，表現(xiàn)為氧化NO指標(biāo)以及脂質(zhì)過氧化MDA含量的升高，提示矽塵可誘導(dǎo)機(jī)體氧化應(yīng)激的發(fā)生及脂質(zhì)過氧化增加，進(jìn)而造成肺組織損傷，但形成肺纖維化后，NO、MDA改變不明顯，說明與嚴(yán)重程度無關(guān)。有學(xué)者認(rèn)為外周血單核細(xì)胞NF-κB升高除與矽肺的發(fā)病有關(guān)外，與矽肺的嚴(yán)重程度也有關(guān)，對(duì)預(yù)后以及矽肺進(jìn)展有意義[10]。有報(bào)道應(yīng)用抗氧化制劑來干預(yù)矽肺的發(fā)展[11]。

綜上所述，通過對(duì)矽塵接觸者和矽肺患者誘導(dǎo)痰中NO、MDA含量分析，認(rèn)為矽肺患者誘導(dǎo)痰中有明顯的自由基代謝紊亂，而且非接塵人員與矽肺患者有明顯差異，并且隨著矽肺期別程度的變化，自由基也呈現(xiàn)規(guī)律性變化。對(duì)照組與矽肺組和接觸粉塵組在NO、MDA改變明顯，它可能是肺組織損傷的直接原因。這為職業(yè)健康監(jiān)護(hù)、職業(yè)病診斷、治療提供了有力的依據(jù)。

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