虞飛博 ，周潔，王栩鳴，楊勇，余初浪，程曄，嚴(yán)成其，陳劍平

1.浙江師范大學(xué) 生化學(xué)院，浙江 金華 321000；2.浙江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院 省部共建國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室培育基地，農(nóng)業(yè)部植物保護(hù)與生物技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，浙江省植物病毒重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，浙江 杭州 310021

水稻（Oryza sativa）是世界上最重要的農(nóng)作物之一，為全球半數(shù)以上人口特別是發(fā)展中國(guó)家提供糧食和蛋白質(zhì)的來(lái)源。然而，由于農(nóng)作物單一的種植方式使它的生長(zhǎng)過(guò)程更容易受到外界病原菌的影響，而干旱和鹽漬是影響世界水稻產(chǎn)量的兩個(gè)主要的非生物因素。

水稻在受病原菌感染、物理傷害和防衛(wèi)相關(guān)信號(hào)等刺激后，會(huì)誘導(dǎo)自身的抗病防衛(wèi)體系，從而激活表達(dá)下游相應(yīng)的病程相關(guān)（pathogenesis-related，PR）基因。PR基因的誘導(dǎo)表達(dá)可以增強(qiáng)植株的抗病性，在水稻病害防御相關(guān)的研究中常被作為特征分子標(biāo)記而廣泛使用[1]。同時(shí)，PR基因在衰老、逆境及生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程中也發(fā)揮著重要作用。由于PR 蛋白是在植物受到脅迫后誘導(dǎo)合成的一類(lèi)蛋白，它的表達(dá)關(guān)鍵在于轉(zhuǎn)錄水平[2]。在擬南芥和煙草中，關(guān)于PR基因的誘導(dǎo)表達(dá)調(diào)控機(jī)制已有較多報(bào)道[2-5]，對(duì)于它們啟動(dòng)子的活性及其順式作用元件和轉(zhuǎn)錄因子的作用也分析得較為詳盡。而水稻作為單子葉植物研究的模式生物，了解PR基因的表達(dá)調(diào)控及功能，對(duì)研究植物的抗病性具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。

PR1基因是PR基因家族的重要組成部分，它的表達(dá)經(jīng)常被作為系統(tǒng)獲得性抗性（systemic acquired resistance，SAR）建立的標(biāo)志。最早發(fā)現(xiàn)的水稻PR1家族成員OsPR1a和OsPR1b被報(bào)道受稻瘟病菌及環(huán)境脅迫和一些化學(xué)物質(zhì)的廣泛誘導(dǎo)[6]，但有關(guān)它們?cè)谒靖鱾€(gè)組織中的具體表達(dá)模式和誘導(dǎo)特性的信息仍然非常有限。啟動(dòng)子的起始往往間接反映基因的表達(dá)情況，因此，我們通過(guò)構(gòu)建OsPR1bp::GUS表達(dá)載體和Real-time PCR，分析了OsPR1b的活性和表達(dá)特征，旨在進(jìn)一步探索水稻SAR 誘導(dǎo)過(guò)程和OsPR1b基因表達(dá)的內(nèi)在關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 材料

水稻品種日本晴（O.sativaL.ssp.japonicacv.Nipponbare）和石狩白毛（O.sativaL.ssp.japonicacv.Ishikari-shiroge，I-S）由本實(shí)驗(yàn)室提供；大腸桿菌DH5α、根瘤農(nóng)桿菌EHA105和水稻白葉枯菌（Xanthomonas oryzaepv.oryzae，Xoo）菲律賓生理小種P10（PXO124）均為本實(shí)驗(yàn)室保存；雙元載體Pnos-HPT-T35S-GUS-Tnos 由本實(shí)驗(yàn)室在pCAMBIA0380載體基礎(chǔ)上改造獲得；pMD19-T載體、Pyrobest DNA聚合酶購(gòu)自TaKaRa 公司；總DNA 提取試劑盒DNeasy Plant Mini Kit 購(gòu) 自Qiagen 公 司；TRIzol 試劑購(gòu)自Invitrogen 公司；iScript 逆轉(zhuǎn)錄試劑盒和Sso-Fast EvaGreen Supermix 試劑盒均購(gòu)自Bio-Rad 公司；DNA 片段及質(zhì)?；厥赵噭┖匈?gòu)自Promega 公司；BamHⅠ和KpnⅠ內(nèi)切酶購(gòu)自NEB 公司；T4DNA 快速連接酶購(gòu)自Fermentas 公司；X-gluc（5-溴-4-氯-3-吲哚基-β-D-葡萄糖醛酸）購(gòu)自PhytoTechnology Laboratories 公司；甲基茉莉酸（methyl jasmonate，JA）購(gòu)自TCI公司；乙酰水楊酸（salicylic acid，SA）購(gòu)自BBI公司；激動(dòng)素（kinetin，KT）購(gòu)自Sigma公司；3-吲哚乙酸（3-indole-acetic acid，IAA）、赤霉素（gibberellic acid，GA）、脫落酸（abscisic acid，ABA）和乙烯利（ethephon，ETH）均購(gòu)自生工公司。

1.2 啟動(dòng)子的克隆與載體構(gòu)建

根 據(jù) NCBI 中的水 稻OsPR1b（LOC_Os01g28450.1）基因組序列，利用Oligo 軟件設(shè)計(jì)引物，用于擴(kuò)增基因啟始密碼子ATG 前約2.5 kb 的啟動(dòng)子序列，并在上、下游引物中分別引入BamHⅠ和KpnⅠ酶切位點(diǎn)，便于和GUS報(bào)告基因表達(dá)載體連接。引物由上海生工生物工程公司合成，序列見(jiàn)表1。按照DNeasy Plant Mini 試劑盒說(shuō)明書(shū)提取水稻日本晴總DNA，并以此DNA 為模板、OsPR1bp-F/R為引物進(jìn)行PCR 擴(kuò)增，體系參照Pyrobest DNA 聚合酶說(shuō)明書(shū)。擴(kuò)增條件為94℃ 5 min，然后以94℃30 s、58℃30 s、72℃2.5 min 行33 個(gè)循環(huán)。擴(kuò)增結(jié)束后，加入rTaq DNA 聚合酶，繼續(xù)在72℃反應(yīng)10 min 加“A”，獲得的啟動(dòng)子片段大小為2593 bp。用T4DNA 連接酶于25℃連接30 min，將回收純化的啟動(dòng)子片段連入pMD19-T 載體中。PCR 鑒定正確后送鉑尚生物技術(shù)（上海）有限公司測(cè)序，測(cè)序結(jié)果與GenBank 中的日本晴序列一致。將連有啟動(dòng)子片段的pMD19-T 載體用BamHⅠ和KpnⅠ酶切，回收片段后，連入經(jīng)同樣酶切的GUS表達(dá)載體中。

1.3 農(nóng)桿菌介導(dǎo)的水稻轉(zhuǎn)化

將構(gòu)建得到的OsPR1bp::GUS表達(dá)載體通過(guò)電擊轉(zhuǎn)入農(nóng)桿菌EHA105 中，參考Hiei 等[7]的轉(zhuǎn)基因方法，再將農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)入石狩白毛成熟胚誘導(dǎo)的愈傷組織中，獲得相應(yīng)的OsPR1bp::GUS轉(zhuǎn)基因植株。

1.4 GUS組織化學(xué)染色

GUS 組織化學(xué)染色法參照J(rèn)efferson 等[8]報(bào)道的方法進(jìn)行。轉(zhuǎn)入OsPR1bp::GUS的愈傷組織經(jīng)首輪篩選21 d 后，隨機(jī)挑選抗性愈傷進(jìn)行染色，其他植物組織取自T2代轉(zhuǎn)基因植株。用Nikon SMZ1000立體顯微鏡拍攝，拍攝前將含有葉綠素的樣品置于100%酒精中進(jìn)行脫色處理。染色液成分包括1 mmol/L X-gluc［溶于0.1 mol/L 磷酸緩沖液（pH7.0）中］、10 mmol/L Na2EDTA、1 mmol/L 鐵氰化鉀、1 mmol/L 亞鐵氰化鉀、20%甲醇和0.5% Triton X-100。

表1 引物及序列

1.5 試驗(yàn)水稻的處理

水稻石狩白毛種植于浙江省農(nóng)科院病毒學(xué)與生物技術(shù)研究所溫室內(nèi)，采用國(guó)際水稻所（IRRI）水稻營(yíng)養(yǎng)液配方進(jìn)行培養(yǎng)。水稻胚性愈傷用含2 mg/L 2，4-D 的NB 培養(yǎng)基誘導(dǎo)獲得。取2 周齡根、莖、葉（第四葉），抽穗期帶花幼穗和劍葉，1 月齡胚性愈傷組織進(jìn)行RNA 提取和定量PCR，分析OsPR1b基因的組織表達(dá)特性。

轉(zhuǎn)基因水稻石狩白毛種子溶液培養(yǎng)于溫室內(nèi)（生長(zhǎng)條件：白天30℃，夜晚25℃，相對(duì)濕度60%～80%，光周期12 h/d），待長(zhǎng)至四葉一心期時(shí)，分別移至含0.1 mmol/L 激素、100 mmol/L NaCl 及10% 聚乙二醇（PEG）的溶液中，以無(wú)菌去離子水為對(duì)照，處理根部24 h 后分別采集葉片，制備樣品，用于分析OsPR1b基因啟動(dòng)子的非生物學(xué)應(yīng)答反應(yīng)。

培養(yǎng)條件同上，取3 周齡水稻幼苗。將培養(yǎng)好的水稻白葉枯菌致病菌株P(guān)10（PXO124）調(diào)至D600nm值為0.6～1.0，利用剪切接種法接種水稻幼苗，以無(wú)菌去離子水剪切為對(duì)照，接種24 h 后分別采集葉片，進(jìn)行樣品制備，用于分析OsPR1b基因啟動(dòng)子的生物學(xué)應(yīng)答反應(yīng)。以上所取的每個(gè)材料均有3 個(gè)不同的生物學(xué)重復(fù)。

1.6 RNA的提取及逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)

樣品用液氮速凍充分研磨后，加入1～2 mL TRIzol，按照TRIzol 試劑盒說(shuō)明書(shū)提取RNA，待沉淀適度干燥后，用20～40μL 無(wú)RNase 的水溶解RNA。隨后采用iScript cDNA Synthesis 試劑盒進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，合成第一鏈cDNA。

1.7 熒光定量PCR檢測(cè)

Real-time PCR 反應(yīng)體系按SsoFast EvaGreen Supermix 試劑盒說(shuō)明書(shū)配制。擴(kuò)增條件為95℃ 5 min，以95℃10 s、58℃10 s、72℃20 s 行45 個(gè)循環(huán)，最后72℃ 10 min。在40℃～95℃溫度范圍內(nèi)，95℃10 min，40℃10 min，再緩慢提高至95℃，反應(yīng)結(jié)束冷卻至40℃繪制熔解曲線(xiàn)。Real-time PCR所用儀器為L(zhǎng)ightCycler 480 real-time PCR 儀（Roche公司）。采用比較Ct值的方法進(jìn)行相對(duì)定量，以管家基因OsActin作為內(nèi)標(biāo)校正模板量，計(jì)算公式為2-ΔΔCt。Real-time PCR 引物見(jiàn)表1。

2 結(jié)果

2.1 啟動(dòng)子的序列分析

以已知的OsPR1b基因（LOC_Os01g28450.1）5'端上游3 kb的區(qū)域作為啟動(dòng)子搜索對(duì)象，在PLACE網(wǎng)站（http://www.dna.affrc.go.jp/PLACE/signalscan.html）進(jìn)行搜索和掃描，對(duì)其中潛在的一些順式作用元件進(jìn)行分析（圖1）。結(jié)果表明，OsPR1b啟動(dòng)子序列除了包含核心啟動(dòng)元件及CAAT 盒之外[9]，還包含W box、TGA element、A box、-624 box、AuxRE 等一些被報(bào)道的順式調(diào)控元件（表2）。表明OsPR1b基因可能受多重信號(hào)分子的調(diào)控。

2.2 啟動(dòng)子表達(dá)載體的構(gòu)建

用BamH Ⅰ和KpnⅠ分別雙酶切Pnos-HPTT35S-GUS-Tnos 載體和重組質(zhì)粒pMD19-T-Os-PR1bp（圖2B），再經(jīng)連接、轉(zhuǎn)化和PCR驗(yàn)證后獲得相應(yīng)的啟動(dòng)子表達(dá)分析載體OsPR1bp::GUS（圖2A）。

2.3 轉(zhuǎn)基因植株的獲得

通過(guò)根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化、轉(zhuǎn)化子篩選和轉(zhuǎn)基因植株的再生，共獲得了68 個(gè)T0代株系，經(jīng)PCR 分子鑒定及GUS 組織染色分析，得到58 個(gè)轉(zhuǎn)基因陽(yáng)性株系，其中24 個(gè)株系GUS 組織染色呈陽(yáng)性；隨機(jī)挑選部分具有GUS 活性的株系進(jìn)行繁種，得到T2代株系后進(jìn)行系統(tǒng)的GUS組織化學(xué)分析。

2.4 OsPR1b 基因啟動(dòng)子在器官或組織中的特異性表達(dá)

圖1 OsPR1b啟動(dòng)子中所預(yù)測(cè)的部分脅迫響應(yīng)元件位置

表2 OsPR1b啟動(dòng)子中的順式作用元件詳情

特定的啟動(dòng)子起始過(guò)程常常決定了某個(gè)基因是否應(yīng)當(dāng)表達(dá)或表達(dá)量的多少。通過(guò)分析OsPR1b啟動(dòng)子在各個(gè)器官或組織中驅(qū)動(dòng)GUS基因的表達(dá)情況，可以在一定程度上反映它所控制的OsPR1b基因的時(shí)空表達(dá)特性。為此，我們對(duì)轉(zhuǎn)OsPR1bp::GUS抗性愈傷組織、T1代轉(zhuǎn)基因植株的種子及T2代植株的不同部位進(jìn)行了GUS 組織化學(xué)分析，同時(shí)，利用Real-time PCR 對(duì)野生型愈傷組織和水稻不同時(shí)期各組織（14 d 根、莖、葉；開(kāi)花期劍葉、小花）中OsPR1b基因的表達(dá)量進(jìn)行了分析（圖3）。結(jié)果表明，GUS基因在各組織中的表達(dá)差異很大，大部分組織均呈現(xiàn)低水平的GUS 活性，葉片中的GUS 染色較為明顯，在5 日齡的幼苗中主要集中在葉尖處，葉緣及節(jié)間上也有部分活性（圖3，a～e），在2 周齡的植株葉片及開(kāi)花期的劍葉中則可以觀(guān)察到較為明顯GUS 染色，這些葉片上的染色模式基本上表現(xiàn)為不規(guī)則斑點(diǎn)狀分布（圖3，f～i）。另外，在抗性愈傷及萌發(fā)的種胚中也存在GUS基因表達(dá)的跡象（圖3，l、m）。而在其他部位，如莖、根、花中均未觀(guān)察到明顯的GUS活性（圖3，a、j、k）。Real-time PCR 的結(jié)果也顯示，OsPR1b在葉片中的表達(dá)量遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于其他組織（圖3n）。這些結(jié)果證明，OsPR1b基因主要在葉片部位表達(dá)，從而發(fā)揮其抗病的生物學(xué)功能。

圖2 OsPR1bp::GUS表達(dá)載體的構(gòu)建（A）及質(zhì)粒酶切電泳圖（B）

2.5 OsPR1bp的誘導(dǎo)表達(dá)特性

為了了解所分離的啟動(dòng)子片段對(duì)不同信號(hào)分子的響應(yīng)變化，我們對(duì)2 周齡水稻苗的根部進(jìn)行了各種處理，并利用Real-time PCR 技術(shù)對(duì)水稻第四葉和根部OsPR1b基因的表達(dá)變化進(jìn)行分析（圖4）。結(jié)果顯示，在直接接觸激素的根部，MeJA和KT 可誘導(dǎo)OsPR1b表達(dá)增強(qiáng)，誘導(dǎo)倍數(shù)分別為17.91±2.27和4.13±2.14；鹽脅迫處理也可顯著提高基因的表達(dá)水平，達(dá)到了33.09±2.01 倍；其他信號(hào)分子，除了H2O2的處理沒(méi)有明顯差異外，基因的表達(dá)量均出現(xiàn)了不同程度的下調(diào)。在水稻的第四葉，KT和ABA可以強(qiáng)烈誘導(dǎo)OsPR1b的表達(dá)改變，基因的表達(dá)量分別提高了196.8±5.19和62.85±9.12 倍；鹽脅迫和H2O2處理時(shí)則分別提高了4.81±1.68和3.00±0.47 倍；其他處理情況下，除了GA 處理抑制外，均出現(xiàn)了不同程度的上調(diào)趨勢(shì)，其中，抗病信號(hào)分子SA和MeJA 的上調(diào)變化并不顯著。不論是在根中還是葉片，經(jīng)過(guò)不同激素和非生物脅迫的處理，OsPR1b基因的表達(dá)差異變化不大，只有少數(shù)幾種激素和鹽脅迫的處理較為顯著，這暗示著OsPR1b基因的表達(dá)主要受少數(shù)信號(hào)途徑的調(diào)控。

圖3 OsPR1bp::GUS轉(zhuǎn)基因水稻的GUS染色和OsPR1b基因在健康組織中的表達(dá)情況

圖4 激素和非生物脅迫處理24 h后OsPR1b的誘導(dǎo)表達(dá)特征

為了闡明水稻致病菌與OsPR1b基因的互作關(guān)系，以及抗病信號(hào)分子SA和MeJA 在此過(guò)程中的作用，我們利用水稻白葉枯菌毒性菌株P(guān)10（PXO124）對(duì)2 周齡水稻苗第四葉和第五葉進(jìn)行接種，同時(shí)用SA和MeJA 溶液處理其根部。共同處理24 h 后，分別取第四葉和第五葉進(jìn)行相對(duì)表達(dá)量的分析（圖5），結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與接水對(duì)照相比，單獨(dú)接種Xoo后Os-PR1b基因的表達(dá)量變化并不顯著；而SA 共同處理組則表現(xiàn)為微弱的上調(diào)趨勢(shì)，其中第四葉的變化較為明顯；有意思的是，當(dāng)同時(shí)進(jìn)行接種Xoo和MeJA處理后，OsPR1b基因的表達(dá)量受到了明顯的誘導(dǎo)，與對(duì)照相比，第四葉和第五葉中分別提高了約17 倍和8倍。這表明MeJA很可能在植物對(duì)抗Xoo侵染的過(guò)程中起著某種重要的作用。

圖5 水稻白葉枯菌PXO124菌株和SA、MeJA共同處理24 h后OsPR1b基因表達(dá)水平的變化

3 討論

作為一種分子標(biāo)記基因，OsPR1b的表達(dá)在健康植物的葉片中幾乎是沉默的[6]，在OsPR1bp轉(zhuǎn)基因水稻中，我們也僅在葉片中觀(guān)察到了明顯的GUS活性，而在其他所有組織中的表達(dá)十分微弱，甚至不能被檢測(cè)到。Real-time PCR 結(jié)果也顯示，在同一組織如根中，OsPR1b基因的Ct值和管家基因Actin相比較，有10個(gè)循環(huán)以上的差異。OsPR1bp在幼葉中的表達(dá)主要分布在葉尖和葉緣等一些細(xì)胞分裂較為旺盛的部位，這表明OsPR1bp很可能參與了水稻幼苗的生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程。同樣，在萌動(dòng)的種胚內(nèi)也出現(xiàn)了GUS活性，事實(shí)上，通過(guò)進(jìn)一步的掃描啟動(dòng)子序列，我們發(fā)現(xiàn)在基因的上游存在數(shù)個(gè)與種子萌發(fā)相關(guān)的POLASIG1 元件（核心序列為AATAAA）[15]。到了水稻秧苗期和開(kāi)花期，葉片上的GUS 染色呈現(xiàn)斑點(diǎn)狀的隨機(jī)分布，我們推測(cè)這種表達(dá)模式可能和OsPR1b的抗病性有關(guān)。

茉莉酸（JA）和茉莉酸甲酯是脂源性激素分子，調(diào)節(jié)生長(zhǎng)發(fā)育的許多方面，調(diào)控對(duì)非生物及生物脅迫的應(yīng)答反應(yīng)。用JA 處理水稻后會(huì)誘導(dǎo)許多PR基因如OsPR1b 基因的表達(dá)[16]。然而，PR 的誘導(dǎo)表達(dá)屬于較晚期的事件[17]，我們的實(shí)驗(yàn)表明接種Xoo或JA 單獨(dú)處理根部24 h 后，葉片中OsPR1b的表達(dá)水平?jīng)]有出現(xiàn)明顯的上調(diào)變化，但在水稻受到Xoo侵染時(shí)，外源施加JA 可以顯著增強(qiáng)OsPR1b基因的表達(dá)量，從而增強(qiáng)植株的抗病性，這與已報(bào)道的外源施加JA 確實(shí)能提高水稻植株抗白葉枯病能力的實(shí)驗(yàn)結(jié)果相符[18]。

通常，水稻葉片中存在高水平的自由態(tài)SA[19]，內(nèi)源性SA 水平的提高對(duì)于水稻防御反應(yīng)的影響似乎并不顯著[20]，PR基因在SA 缺陷的NahG 水稻中的表達(dá)也并沒(méi)有因?yàn)镾A 的缺乏而顯著減弱[21]，而我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果也顯示，在Xoo侵染后24 h，SA 的外源施加也不能引起OsPR1b表達(dá)量的顯著增加。然而，SA信號(hào)通路的一個(gè)重要調(diào)節(jié)者NPR1，被證明在水稻抗白葉枯病的過(guò)程中起重要作用，它能夠和許多TGA家族轉(zhuǎn)錄因子相互作用，將其在水稻中超表達(dá)后能夠極大地提高水稻對(duì)Xoo的抗性，同時(shí)也激活了一系列防御相關(guān)基因[22]。在擬南芥中，TGA3 能夠誘導(dǎo)細(xì)胞分裂素（CTK）的轉(zhuǎn)錄激活因子ARR2 結(jié)合于PR1啟動(dòng)子上，從而激活CTK 響應(yīng)的防御基因的轉(zhuǎn)錄[23]。在OsPR1b基因啟動(dòng)子上我們也發(fā)現(xiàn)了數(shù)個(gè)TGA結(jié)合的順式作用元件，Real-time PCR 結(jié)果也證明KT 確實(shí)能夠顯著增強(qiáng)OsPR1b的表達(dá)水平，所以我們推測(cè)在水稻中KT 對(duì)OsPR1b基因的誘導(dǎo)變化很可能也是通過(guò)調(diào)節(jié)SA-NPR1 的信號(hào)路徑，最終影響水稻對(duì)病原菌的免疫反應(yīng)。

值得注意的是，在根中鹽脅迫的誘導(dǎo)非常明顯，2個(gè)模擬干旱的非生物因子NaCl和PEG 均能不同程度地提高葉片中OsPR1b的表達(dá)水平。ABA 調(diào)節(jié)著植物生長(zhǎng)和發(fā)育的許多生理過(guò)程，它在水稻對(duì)鹽、干旱和寒冷等非生物脅迫的耐受性方面所起的作用已得到廣泛研究[24]，近期的研究也表明，干旱條件下水稻植株會(huì)產(chǎn)生MeJA，進(jìn)而刺激產(chǎn)生ABA[25]，而我們的研究結(jié)果也證明根部施加ABA 確實(shí)能夠顯著增強(qiáng)OsPR1b在葉片的表達(dá)。因此，我們推斷干旱條件誘導(dǎo)OsPR1b基因的表達(dá)很可能是通過(guò)刺激水稻植株產(chǎn)生ABA來(lái)實(shí)現(xiàn)的。

GA 通常被認(rèn)為是水稻內(nèi)部免疫反應(yīng)的負(fù)控調(diào)節(jié)者[26]，據(jù)報(bào)道調(diào)節(jié)GA 水平的OsGA20ox3轉(zhuǎn)基因植株可改變水稻對(duì)Xoo及稻瘟病的抗性，PR1的誘導(dǎo)表達(dá)水平及SA和JA 的積累水平也確實(shí)受到了GA水平的影響[27]。這和我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果相符，即GA 有可能通過(guò)抑制如OsPR1b基因的表達(dá)而增加水稻的感病性。

總之，根據(jù)我們現(xiàn)階段的實(shí)驗(yàn)結(jié)果和前人的研究，我們推測(cè)，OsPR1b基因可通過(guò)JA、KT和ABA 等激素水平的調(diào)控整合到了水稻生物和非生物信號(hào)傳導(dǎo)的網(wǎng)絡(luò)，從而對(duì)Xoo侵染或鹽/干旱脅迫做出響應(yīng)，同時(shí)SA-NPR1 的信號(hào)通路可能在其中發(fā)揮重要作用。當(dāng)然，我們也應(yīng)該認(rèn)識(shí)到，PR基因作為一種較為敏感的基因，它的表達(dá)還受到多種因素如生理因素的影響[28]。目前，我們已構(gòu)建和積累了部分突變體材料，希望通過(guò)研究OsPR1b基因在這些突變體中的表達(dá)變化，以進(jìn)一步明確OsPR1b基因在水稻中的表達(dá)調(diào)控機(jī)制。

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