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        金銀花組織培養(yǎng)與快速繁殖研究

        2014-11-24 03:59:38劉敏杰
        安徽農(nóng)學通報 2014年21期
        關鍵詞:快速繁殖組織培養(yǎng)金銀花

        劉敏杰

        摘 要:為了研究金銀花的離體快繁技術,采用不同培養(yǎng)基配方對金銀花的芽尖進行誘導、增殖并生根處理。結(jié)果表明:叢生芽誘導以MS+6-BA2.0mg·L-1+NAA0.1mg·L-1培養(yǎng)基為宜;增殖培養(yǎng)以MS+6-BA2.0mg·L-1+NAA0.2mg·L-1培養(yǎng)基為宜,可獲得理想的效果,增殖倍數(shù)可達3.7倍;在1/2MS+IBA3.0mg·L-1+0.15%活性炭培養(yǎng)基上,可形成較發(fā)達的根系;試管苗移栽對基質(zhì)要求不嚴,移栽到疏松透氣的蛭石+珍珠+園土(1∶1∶1)混合基質(zhì)中,成活率高達92%。

        關鍵詞:金銀花;組織培養(yǎng);快速繁殖;培養(yǎng)基配方

        中圖分類號 R282.2 文獻標識碼 A 文章編號 1007-7731(2014)21-21-02

        金銀花(Lonicera japonica Thunb.)是忍冬科忍冬屬的多年生半常綠藤本植物,是一種珍貴的觀賞植物,也是我國特有的名貴中藥材,具有清熱、解毒、抗菌、增強免疫力等功效[1]。扦插繁殖和播種繁殖是金銀花的常用繁殖方式,然而這2種繁殖方式都易造成金銀花植株攜帶病毒、細菌等,使植株生長不良,生產(chǎn)性能下降,植株及產(chǎn)品品質(zhì)下降。通過組織培養(yǎng)的方式繁育金銀花種苗,可使金銀花植株脫毒,且繁殖速度快、繁殖系數(shù)高,從而提高金銀花的產(chǎn)量和質(zhì)量[2]。

        1 材料與方法

        1.1 實驗材料 信陽當?shù)匾吧疸y花,采自河南信陽前進鄉(xiāng)三橋村。

        1.2 實驗方法

        1.2.1 外植體滅菌 取頂芽作為外植體,沖洗2~3遍,在低濃度的洗衣粉溶液中浸泡30min,再用軟刷刷洗,流水沖洗干凈。將外植體置于超凈工作臺中,用75%酒精浸泡30s,無菌水沖洗2~3次,再用0.1%升汞溶液消毒5min,無菌水沖洗4~5次,然后用消毒濾紙吸干表面水分,備用[3]。

        1.2.2 誘導培養(yǎng) 金銀花誘導培養(yǎng)選用MS作為基礎培養(yǎng)基,并加入不同種類和配比的植物生長物質(zhì)。將經(jīng)過消毒滅菌處理的外植體,分別接種于不同培養(yǎng)基中,每種處理接30瓶,每瓶接種1個外植體,重復3次,篩選出芽萌動率高的培養(yǎng)基。

        1.2.3 增殖培養(yǎng) 增殖培養(yǎng)以MS培養(yǎng)基加不同種類的細胞分裂素,將叢生芽分別接種于繼代培養(yǎng)基中進行金銀花的增殖培養(yǎng)。每種處理接種30瓶,每瓶接種1個外植體,重復3次,觀察不定芽的分化情況,選出分化率較高的激素配比。

        1.2.4 生根培養(yǎng) 待叢生芽長至2cm高時,轉(zhuǎn)接到1/2MS及1/2MS加不同濃度IBA的生根培養(yǎng)基上,并各加0.15%的活性炭。每種處理接種30個幼苗,重復3次,觀察不定根的形成過程,選出最佳生根培養(yǎng)基。

        1.2.5 培養(yǎng)條件 MS培養(yǎng)基中蔗糖濃度為30g·L-1,1/2MS培養(yǎng)基中的蔗糖濃度為20g·L-1,瓊脂濃度均為7g·L-1,pH值為6.0。接種材料置于培養(yǎng)箱中,設定溫度為24~26℃,光照強度為1 500~2 000lx,光照時間為12~14h/d。

        1.3 馴化移栽 把生根好的試管苗拿到室溫下,不打開瓶蓋煉苗1~2d后,再打開瓶蓋煉苗3~5d。然后取出試管苗,洗凈根部粘附的培養(yǎng)基,栽植于配比為蛭石∶珍珠巖∶園土為1∶1∶1的基質(zhì)中,澆透水,蓋上塑料薄膜,并注意保溫、保濕。當金銀花試管苗長出新葉時,煉苗移栽就真正成功了,觀察并統(tǒng)計成活率。

        2 結(jié)果與分析

        2.3 不同培養(yǎng)基對試管苗生根的影響 從表3可以看出,芽苗在5種不同的生根培養(yǎng)基上均能生根,根的數(shù)量和長度隨IBA濃度的提高而增加;當IBA濃度為3.0mg·L-1時,植株生長健壯,葉色濃綠。因此,適宜金銀花生根的最佳培養(yǎng)基為1/2MS+IBA3.0mg·L-1+0.15%活性炭。

        2.4 生根苗馴化移栽結(jié)果 試驗結(jié)果表明,金銀花試管苗在栽培基質(zhì)上,移栽成活率高,幼苗生長健壯,葉色嫩綠,成活率高達92%。

        3 結(jié)論與討論

        植物生長物質(zhì)的種類,以及細胞分裂素與生長素的比例,對植物組織分化出苗或快速增殖影響十分顯著。6-BA主要作用于芽的分化、促進側(cè)芽萌發(fā)生長[4]。NAA具有較低濃度下促進細胞生長,高濃度下促進細胞成熟衰老的作用。IBA是試管苗生根中最常用的生根劑之一[5],其濃度過低,不能很好地促進組培苗生根,濃度過高,則會誘導出大量的愈傷組織,從而降低生根率[6]。本次實驗結(jié)果表明,6-BA濃度過高也會抑制腋芽的形成,一定濃度的NAA有利于促進腋芽生長,只有生長素和細胞分裂素同時存在時才能很好地誘導叢生芽。IBA為3.0mg·L-1時,植株生長健壯,葉色濃綠。

        參考文獻

        [1]石任兵,陸蘊如.我國藥用金銀花資源、化學成分及藥理研究進展[J].中國藥學雜志,1999,34(11):724-727.

        [2]梁小梅,龔福寶.金銀花快繁的研究現(xiàn)狀[J].河北林業(yè)科技,2009,4.

        [3]趙賢慧,劉慶華,張德鋒.紅金銀花組織培養(yǎng)外植體滅菌的研究[J].江蘇林業(yè)科技,2007,34(1).

        [4]李明軍.懷山藥組織培養(yǎng)及應用[M].北京:科學出版社,2004,20.

        [5]李明軍,陳明霞,洪森榮,等.NAA、IBA和PP333對懷山藥試管苗生長發(fā)育的影響 [J].廣西植物,2004,24(4):376-379.

        [6]陳明霞,張曉麗,龔玉佳,等.“金峰一號”金銀花組織培養(yǎng)技術研究[J].北方園藝,2010(23):126-129. (責編:張宏民)endprint

        摘 要:為了研究金銀花的離體快繁技術,采用不同培養(yǎng)基配方對金銀花的芽尖進行誘導、增殖并生根處理。結(jié)果表明:叢生芽誘導以MS+6-BA2.0mg·L-1+NAA0.1mg·L-1培養(yǎng)基為宜;增殖培養(yǎng)以MS+6-BA2.0mg·L-1+NAA0.2mg·L-1培養(yǎng)基為宜,可獲得理想的效果,增殖倍數(shù)可達3.7倍;在1/2MS+IBA3.0mg·L-1+0.15%活性炭培養(yǎng)基上,可形成較發(fā)達的根系;試管苗移栽對基質(zhì)要求不嚴,移栽到疏松透氣的蛭石+珍珠+園土(1∶1∶1)混合基質(zhì)中,成活率高達92%。

        關鍵詞:金銀花;組織培養(yǎng);快速繁殖;培養(yǎng)基配方

        中圖分類號 R282.2 文獻標識碼 A 文章編號 1007-7731(2014)21-21-02

        金銀花(Lonicera japonica Thunb.)是忍冬科忍冬屬的多年生半常綠藤本植物,是一種珍貴的觀賞植物,也是我國特有的名貴中藥材,具有清熱、解毒、抗菌、增強免疫力等功效[1]。扦插繁殖和播種繁殖是金銀花的常用繁殖方式,然而這2種繁殖方式都易造成金銀花植株攜帶病毒、細菌等,使植株生長不良,生產(chǎn)性能下降,植株及產(chǎn)品品質(zhì)下降。通過組織培養(yǎng)的方式繁育金銀花種苗,可使金銀花植株脫毒,且繁殖速度快、繁殖系數(shù)高,從而提高金銀花的產(chǎn)量和質(zhì)量[2]。

        1 材料與方法

        1.1 實驗材料 信陽當?shù)匾吧疸y花,采自河南信陽前進鄉(xiāng)三橋村。

        1.2 實驗方法

        1.2.1 外植體滅菌 取頂芽作為外植體,沖洗2~3遍,在低濃度的洗衣粉溶液中浸泡30min,再用軟刷刷洗,流水沖洗干凈。將外植體置于超凈工作臺中,用75%酒精浸泡30s,無菌水沖洗2~3次,再用0.1%升汞溶液消毒5min,無菌水沖洗4~5次,然后用消毒濾紙吸干表面水分,備用[3]。

        1.2.2 誘導培養(yǎng) 金銀花誘導培養(yǎng)選用MS作為基礎培養(yǎng)基,并加入不同種類和配比的植物生長物質(zhì)。將經(jīng)過消毒滅菌處理的外植體,分別接種于不同培養(yǎng)基中,每種處理接30瓶,每瓶接種1個外植體,重復3次,篩選出芽萌動率高的培養(yǎng)基。

        1.2.3 增殖培養(yǎng) 增殖培養(yǎng)以MS培養(yǎng)基加不同種類的細胞分裂素,將叢生芽分別接種于繼代培養(yǎng)基中進行金銀花的增殖培養(yǎng)。每種處理接種30瓶,每瓶接種1個外植體,重復3次,觀察不定芽的分化情況,選出分化率較高的激素配比。

        1.2.4 生根培養(yǎng) 待叢生芽長至2cm高時,轉(zhuǎn)接到1/2MS及1/2MS加不同濃度IBA的生根培養(yǎng)基上,并各加0.15%的活性炭。每種處理接種30個幼苗,重復3次,觀察不定根的形成過程,選出最佳生根培養(yǎng)基。

        1.2.5 培養(yǎng)條件 MS培養(yǎng)基中蔗糖濃度為30g·L-1,1/2MS培養(yǎng)基中的蔗糖濃度為20g·L-1,瓊脂濃度均為7g·L-1,pH值為6.0。接種材料置于培養(yǎng)箱中,設定溫度為24~26℃,光照強度為1 500~2 000lx,光照時間為12~14h/d。

        1.3 馴化移栽 把生根好的試管苗拿到室溫下,不打開瓶蓋煉苗1~2d后,再打開瓶蓋煉苗3~5d。然后取出試管苗,洗凈根部粘附的培養(yǎng)基,栽植于配比為蛭石∶珍珠巖∶園土為1∶1∶1的基質(zhì)中,澆透水,蓋上塑料薄膜,并注意保溫、保濕。當金銀花試管苗長出新葉時,煉苗移栽就真正成功了,觀察并統(tǒng)計成活率。

        2 結(jié)果與分析

        2.3 不同培養(yǎng)基對試管苗生根的影響 從表3可以看出,芽苗在5種不同的生根培養(yǎng)基上均能生根,根的數(shù)量和長度隨IBA濃度的提高而增加;當IBA濃度為3.0mg·L-1時,植株生長健壯,葉色濃綠。因此,適宜金銀花生根的最佳培養(yǎng)基為1/2MS+IBA3.0mg·L-1+0.15%活性炭。

        2.4 生根苗馴化移栽結(jié)果 試驗結(jié)果表明,金銀花試管苗在栽培基質(zhì)上,移栽成活率高,幼苗生長健壯,葉色嫩綠,成活率高達92%。

        3 結(jié)論與討論

        植物生長物質(zhì)的種類,以及細胞分裂素與生長素的比例,對植物組織分化出苗或快速增殖影響十分顯著。6-BA主要作用于芽的分化、促進側(cè)芽萌發(fā)生長[4]。NAA具有較低濃度下促進細胞生長,高濃度下促進細胞成熟衰老的作用。IBA是試管苗生根中最常用的生根劑之一[5],其濃度過低,不能很好地促進組培苗生根,濃度過高,則會誘導出大量的愈傷組織,從而降低生根率[6]。本次實驗結(jié)果表明,6-BA濃度過高也會抑制腋芽的形成,一定濃度的NAA有利于促進腋芽生長,只有生長素和細胞分裂素同時存在時才能很好地誘導叢生芽。IBA為3.0mg·L-1時,植株生長健壯,葉色濃綠。

        參考文獻

        [1]石任兵,陸蘊如.我國藥用金銀花資源、化學成分及藥理研究進展[J].中國藥學雜志,1999,34(11):724-727.

        [2]梁小梅,龔福寶.金銀花快繁的研究現(xiàn)狀[J].河北林業(yè)科技,2009,4.

        [3]趙賢慧,劉慶華,張德鋒.紅金銀花組織培養(yǎng)外植體滅菌的研究[J].江蘇林業(yè)科技,2007,34(1).

        [4]李明軍.懷山藥組織培養(yǎng)及應用[M].北京:科學出版社,2004,20.

        [5]李明軍,陳明霞,洪森榮,等.NAA、IBA和PP333對懷山藥試管苗生長發(fā)育的影響 [J].廣西植物,2004,24(4):376-379.

        [6]陳明霞,張曉麗,龔玉佳,等.“金峰一號”金銀花組織培養(yǎng)技術研究[J].北方園藝,2010(23):126-129. (責編:張宏民)endprint

        摘 要:為了研究金銀花的離體快繁技術,采用不同培養(yǎng)基配方對金銀花的芽尖進行誘導、增殖并生根處理。結(jié)果表明:叢生芽誘導以MS+6-BA2.0mg·L-1+NAA0.1mg·L-1培養(yǎng)基為宜;增殖培養(yǎng)以MS+6-BA2.0mg·L-1+NAA0.2mg·L-1培養(yǎng)基為宜,可獲得理想的效果,增殖倍數(shù)可達3.7倍;在1/2MS+IBA3.0mg·L-1+0.15%活性炭培養(yǎng)基上,可形成較發(fā)達的根系;試管苗移栽對基質(zhì)要求不嚴,移栽到疏松透氣的蛭石+珍珠+園土(1∶1∶1)混合基質(zhì)中,成活率高達92%。

        關鍵詞:金銀花;組織培養(yǎng);快速繁殖;培養(yǎng)基配方

        中圖分類號 R282.2 文獻標識碼 A 文章編號 1007-7731(2014)21-21-02

        金銀花(Lonicera japonica Thunb.)是忍冬科忍冬屬的多年生半常綠藤本植物,是一種珍貴的觀賞植物,也是我國特有的名貴中藥材,具有清熱、解毒、抗菌、增強免疫力等功效[1]。扦插繁殖和播種繁殖是金銀花的常用繁殖方式,然而這2種繁殖方式都易造成金銀花植株攜帶病毒、細菌等,使植株生長不良,生產(chǎn)性能下降,植株及產(chǎn)品品質(zhì)下降。通過組織培養(yǎng)的方式繁育金銀花種苗,可使金銀花植株脫毒,且繁殖速度快、繁殖系數(shù)高,從而提高金銀花的產(chǎn)量和質(zhì)量[2]。

        1 材料與方法

        1.1 實驗材料 信陽當?shù)匾吧疸y花,采自河南信陽前進鄉(xiāng)三橋村。

        1.2 實驗方法

        1.2.1 外植體滅菌 取頂芽作為外植體,沖洗2~3遍,在低濃度的洗衣粉溶液中浸泡30min,再用軟刷刷洗,流水沖洗干凈。將外植體置于超凈工作臺中,用75%酒精浸泡30s,無菌水沖洗2~3次,再用0.1%升汞溶液消毒5min,無菌水沖洗4~5次,然后用消毒濾紙吸干表面水分,備用[3]。

        1.2.2 誘導培養(yǎng) 金銀花誘導培養(yǎng)選用MS作為基礎培養(yǎng)基,并加入不同種類和配比的植物生長物質(zhì)。將經(jīng)過消毒滅菌處理的外植體,分別接種于不同培養(yǎng)基中,每種處理接30瓶,每瓶接種1個外植體,重復3次,篩選出芽萌動率高的培養(yǎng)基。

        1.2.3 增殖培養(yǎng) 增殖培養(yǎng)以MS培養(yǎng)基加不同種類的細胞分裂素,將叢生芽分別接種于繼代培養(yǎng)基中進行金銀花的增殖培養(yǎng)。每種處理接種30瓶,每瓶接種1個外植體,重復3次,觀察不定芽的分化情況,選出分化率較高的激素配比。

        1.2.4 生根培養(yǎng) 待叢生芽長至2cm高時,轉(zhuǎn)接到1/2MS及1/2MS加不同濃度IBA的生根培養(yǎng)基上,并各加0.15%的活性炭。每種處理接種30個幼苗,重復3次,觀察不定根的形成過程,選出最佳生根培養(yǎng)基。

        1.2.5 培養(yǎng)條件 MS培養(yǎng)基中蔗糖濃度為30g·L-1,1/2MS培養(yǎng)基中的蔗糖濃度為20g·L-1,瓊脂濃度均為7g·L-1,pH值為6.0。接種材料置于培養(yǎng)箱中,設定溫度為24~26℃,光照強度為1 500~2 000lx,光照時間為12~14h/d。

        1.3 馴化移栽 把生根好的試管苗拿到室溫下,不打開瓶蓋煉苗1~2d后,再打開瓶蓋煉苗3~5d。然后取出試管苗,洗凈根部粘附的培養(yǎng)基,栽植于配比為蛭石∶珍珠巖∶園土為1∶1∶1的基質(zhì)中,澆透水,蓋上塑料薄膜,并注意保溫、保濕。當金銀花試管苗長出新葉時,煉苗移栽就真正成功了,觀察并統(tǒng)計成活率。

        2 結(jié)果與分析

        2.3 不同培養(yǎng)基對試管苗生根的影響 從表3可以看出,芽苗在5種不同的生根培養(yǎng)基上均能生根,根的數(shù)量和長度隨IBA濃度的提高而增加;當IBA濃度為3.0mg·L-1時,植株生長健壯,葉色濃綠。因此,適宜金銀花生根的最佳培養(yǎng)基為1/2MS+IBA3.0mg·L-1+0.15%活性炭。

        2.4 生根苗馴化移栽結(jié)果 試驗結(jié)果表明,金銀花試管苗在栽培基質(zhì)上,移栽成活率高,幼苗生長健壯,葉色嫩綠,成活率高達92%。

        3 結(jié)論與討論

        植物生長物質(zhì)的種類,以及細胞分裂素與生長素的比例,對植物組織分化出苗或快速增殖影響十分顯著。6-BA主要作用于芽的分化、促進側(cè)芽萌發(fā)生長[4]。NAA具有較低濃度下促進細胞生長,高濃度下促進細胞成熟衰老的作用。IBA是試管苗生根中最常用的生根劑之一[5],其濃度過低,不能很好地促進組培苗生根,濃度過高,則會誘導出大量的愈傷組織,從而降低生根率[6]。本次實驗結(jié)果表明,6-BA濃度過高也會抑制腋芽的形成,一定濃度的NAA有利于促進腋芽生長,只有生長素和細胞分裂素同時存在時才能很好地誘導叢生芽。IBA為3.0mg·L-1時,植株生長健壯,葉色濃綠。

        參考文獻

        [1]石任兵,陸蘊如.我國藥用金銀花資源、化學成分及藥理研究進展[J].中國藥學雜志,1999,34(11):724-727.

        [2]梁小梅,龔福寶.金銀花快繁的研究現(xiàn)狀[J].河北林業(yè)科技,2009,4.

        [3]趙賢慧,劉慶華,張德鋒.紅金銀花組織培養(yǎng)外植體滅菌的研究[J].江蘇林業(yè)科技,2007,34(1).

        [4]李明軍.懷山藥組織培養(yǎng)及應用[M].北京:科學出版社,2004,20.

        [5]李明軍,陳明霞,洪森榮,等.NAA、IBA和PP333對懷山藥試管苗生長發(fā)育的影響 [J].廣西植物,2004,24(4):376-379.

        [6]陳明霞,張曉麗,龔玉佳,等.“金峰一號”金銀花組織培養(yǎng)技術研究[J].北方園藝,2010(23):126-129. (責編:張宏民)endprint

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