劉 戈，馮 昆，趙 靜

(澳門大學中華醫(yī)藥研究院，澳門大學中藥質量研究國家重點實驗室，中國 澳門 999078)

靈芝是一種擁有數(shù)千年藥用歷史的中國傳統(tǒng)珍稀藥用真菌，具有很高的藥用價值，屬于擔子菌綱 (Basidiomycetes)、多孔菌目 (Polyporales)、靈芝科 (Ganodermataceae)、靈芝屬 (Ganoderma)，靈芝屬包括大約80種，我國有44種。熱帶靈芝Ganoderma tropicum(Jungh.)Bres.，在分類學上屬于靈芝科、靈芝屬真菌。近年來，隨著對靈芝屬研究的逐漸深入，對熱帶靈芝的研究也逐漸增多。熱帶靈芝主要分布在中國、印度尼西亞、馬來西亞和新加坡4個國家[1－4]，在中國主要分布在云南[5]、海南[6]和臺灣[7]等地。熱帶靈芝在民間多自采自用，具有滋補、強壯、抗腫瘤的功能，福建民間也有報道稱用它可以治療冠心病[2，3]。本文將從熱帶靈芝的培養(yǎng)方式、化學成分及分析方法、藥理功能等方面對熱帶靈芝的研究現(xiàn)狀進行綜述。

1 培養(yǎng)方式

目前研究的熱帶靈芝菌種一般經(jīng)過野外采集后組織分離得到。熱帶靈芝的鑒定一般采取形態(tài)學鑒定和PCR表征鑒定。張東柱[8]等曾對熱帶靈芝子實體和菌絲體形態(tài)進行了觀察研究，發(fā)現(xiàn)其成熟孢子不同于赤芝 (Ganoderma lucidum)的卵形孢子，而呈紡錘形 (圖1，劉戈制作)，子實體偶呈扇面形。Utomo等[9]通過使用特異性引物和 PCR－PFLP，對rDNA進行鑒定，從而分辨出熱帶靈芝。

熱帶靈芝的培養(yǎng)研究主要集中在固體培養(yǎng)和液體培養(yǎng)2個方面。

1.1 固體培養(yǎng)

在培養(yǎng)基的選擇方面，鄧軍等[10]報道，熱帶靈芝在木屑、蔗渣、廢棉等主料的培養(yǎng)基上都能正常生長，見表1。

表1 不同固體栽培培養(yǎng)基比較

從表1可以看出，蔗渣74%、麥麩25%、過磷酸鈣1%、桑枝屑73%、麥麩25%、白糖1%、過磷酸鈣1%的栽培配方產(chǎn)量較高，分別達到 219.76 g·kg－1和 191.26 g·kg－1，完全使用廢棉種栽培熱帶靈芝產(chǎn)量較低，但是其中加入適量麥麩可以提高產(chǎn)量。劉國民等[11]通過米飯培養(yǎng)基、大腸桿菌顯色培養(yǎng)基 (CA)和馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基 (PDA)組織分離熱帶靈芝，均得到純化的菌絲體;米飯培養(yǎng)基上的菌絲體生長速度最快，其次為PDA培養(yǎng)基，CA培養(yǎng)基上菌絲體生長最慢;在繼代培養(yǎng)中，PDA培養(yǎng)基的菌絲生長表現(xiàn)仍優(yōu)于CA培養(yǎng)基，原因在于CA培養(yǎng)基適合細菌的生長，不適合熱帶靈芝 (大型真菌)菌絲體的生長。

在培養(yǎng)條件的選擇方面，劉國民等[11]采用統(tǒng)計學方法進行因變量分析，結果發(fā)現(xiàn)接種方法、接種菌種量和菌種質量均對其培養(yǎng)有很大影響。在固體平板培養(yǎng)中，菌絲生長最適pH為5.9，菌絲生長的最適溫度為28.8℃。季節(jié)因素考察方面，反季節(jié)栽培容易產(chǎn)生畸形芝，而氣溫回升之后子實體生長發(fā)育便正常，能長成掌狀菌蓋。由此可見，熱帶靈芝的菌絲體生長發(fā)育、出芝過程以及出芝后子實體的生長均需要一個較高的溫度。子實體的形成和生長需要100 lx～200 lx的光照，無光照則不能形成菌蓋，但菌絲生長階段不需要光照，如果光照超過100 lx對菌絲體生長有極顯著的抑制作用[10]。

在熱帶靈芝的培養(yǎng)過程中，碳元素含量減少而氮元素含量升高。培養(yǎng)前期，木質素的分解速度快于半纖維素和纖維素，后期則相反，最終碳元素以二氧化碳的形式散失，這一現(xiàn)象與胞外酶的產(chǎn)生和積累息息相關。纖維素酶的高峰出現(xiàn)在子實體形成過程中期，且淀粉酶的活性在培養(yǎng)前期較高，20 d時達高峰。纖維素酶的活性變化規(guī)律與纖維素的降解規(guī)律趨于一致，多酚氧化酶變化規(guī)律不明顯，所以尚不能肯定多酚氧化酶活性與木質素降解的關系。在可溶性糖的方面，木糠麥麩培養(yǎng)基中可溶性糖的含量，在接種后10 d內由2.26%降為1.69%。而子實體形成過程中，基質中的可溶性糖含量逐漸增加，最終達到2.84%。其原因可能前期菌絲體積累過程需要消耗大量的碳源，而后期出芝過程中菌絲體分泌出分解酶類，使淀粉、木質纖維素分解成為可溶性糖類，還有可能是菌絲體自身分泌出可溶性糖和菌絲體本身的溶解。另外，相同條件下熱帶靈芝子實體中鍺元素含量高于赤芝，這表明熱帶靈芝對鍺元素的富集能力更強[11]。

1.2 液體培養(yǎng)

劉國民等[11]采用MS(輕唾瓊脂培養(yǎng)基)，加入肌醇100 mg·L－1、煙酸0.5 mg·L－1、鹽酸硫胺素2.0 mg·L－1、鹽酸吡哆素1.0 mg·L－1、甘氨酸 2.0 mg·L－1、6－BA 1.0 mg·L－1、IBA 1.0 mg·L－1、蔗糖30 g·L－1，pH 5.8 條件下能夠培養(yǎng)熱帶靈芝。Law[12]通過對5種培養(yǎng)基進行對比，得出在25℃的大豆提取物中培養(yǎng)15 d熱帶靈芝菌絲體，能夠獲得最高水平的菌絲體量和多糖產(chǎn)量。同時Tong等[13]還證實，在馬鈴薯葡萄糖肉湯培養(yǎng)基中加入不同濃度的Ge元素，隨著添加Ge元素含量的增加，菌絲對Ge的利用也增加，菌絲中Ge元素的含量也隨之增加。

2 化學成分及分析方法

已有文獻報道，熱帶靈芝中主要含有多糖、三萜、蛋白質以及微量元素等4種物質，具體情況見表2。

表2 熱帶靈芝化學成分與藥理活性

續(xù)表

2.1 多糖

在熱帶靈芝的總糖含量研究中，鄧軍等[10]采用蒽酮法，在共同栽培對比試驗中，熱帶靈芝子實體的水溶性多糖含量約為赤芝子實體的1/4，多糖含量為0.408%。Buon[12]對熱帶靈芝中糖的分子量進行測定，結果為27 000 Da。Aryantha等[16]采用TLC法對酸水解后的熱帶靈芝與赤芝的單糖進行了對比，兩者均含有不同濃度的葡萄糖、半乳糖、木糖和鼠李糖。之后，Xin等[18]采用HPTLC法，對酸水解后的熱帶靈芝進行分析，熱帶靈芝子實體含有葡萄糖、半乳糖、甘露糖、木糖、巖藻糖和葡糖醛酸。

2.2 三萜類

Aryantha等[16]于2001年報道，用三氯化銻和利伯曼－布夏德試劑分別作顯色劑，顯色后在366 nm紫外下對相同條件培養(yǎng)得到的赤芝和熱帶靈芝子實體進行TLC對比分析，熱帶靈芝與赤芝的三萜類成分類似，并且與赤芝相比，熱帶靈芝含有更多種類的三萜類物質。同年，Su等[21]通過HPLC法，使用Lichrosphere 100 C－18 column(300 mm ×4.6 mm，5 μm)色譜柱對6種不同產(chǎn)地的熱帶靈芝中的靈芝酸B、C2含量進行測定，含量分別為 0.0940 mg·g－1～ 0.143 3 mg·g－1和0.0312 mg·g－1～ 0.1052 mg·g－1。2006 年，Wang 等[20]采用HPLC法也對福州產(chǎn)地的熱帶靈芝中6種靈芝酸含量進行測定，這是目前為止對熱帶靈芝中三萜類成分最完全的定性及定量報道。2013年，Hu等[24]首次對熱帶靈芝子實體中的醇提物進行分離，得到3種羊毛甾醇型三萜類物質，分別為3β，7β，15β－三羥基－11，23－二氧代羊毛脂 －8，16－二烯－26酸、3β，7β，15β－三羥基－11，23－二氧代羊毛脂－8，16－二烯－26－酸甲基酯、3β，15β－二羥基－7，11，23－三氧代羊毛脂－8，16－二烯－26酸甲基酯 (圖2)。

2.3 其它

鄧軍等[10]采用鹽酸水解法，使用氨基酸分析儀對栽培得到的熱帶靈芝子實體進行定量分析，熱帶靈芝與赤芝相同，均含有天冬氨酸、蘇氨酸、絲氨酸等17種氨基酸，其中含有賴氨酸、蛋氨酸等9種人體必需氨基酸，且含量是赤芝的2倍左右，他們還對熱帶靈芝中礦質元素進行原子吸收分析，證明熱帶靈芝中含有Ge、Cu、Fe等礦質元素。另外，Aryantha[16]曾報道猜測熱帶靈芝中含有麥角甾醇。

3 藥理功能

在熱帶靈芝的藥理活性研究中，抗腫瘤、保肝、降血糖等研究均有報道。在熱帶靈芝抗腫瘤作用研究中，Choong等[14]對赤芝、熱帶靈芝以及松杉靈芝 (Ganoderma tsugae)藥理活性對比研究發(fā)現(xiàn)，熱帶靈芝菌絲體水提物對正常細胞無毒性，但能夠誘導人體乳腺癌細胞MDAMB－435凋亡和壞死。熱帶靈芝的水提物也具有誘導小細胞肺癌細胞的凋亡作用，Sadava等[15]研究指出，其主要作用機理是其水提物能夠提升含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3的活性，而含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶能夠作用在半胱氨酸殘基，它選擇性地切割蛋白質進而造成細胞凋亡。

在熱帶靈芝保肝研究領域，臺北醫(yī)學大學楊依珍以四氯化碳誘發(fā)小白鼠急性肝障礙的模式，并以谷丙轉氨酶(GOT)、谷草轉氨酶 (GPT)及組織切片的方法來評估18種靈芝類物質中三萜類對急性肝障礙的效果。結果證明，熱帶靈芝在以相同劑量加藥3次后，排除肝障礙的效果最好[34]。

Bastami等[35]報道熱帶靈芝具有調節(jié)胰島素分泌和降血糖作用，在口服葡萄糖耐藥試驗中，1 g·kg－1體重的粗提物就顯示明顯的降低血糖作用;熱帶靈芝粗提物對大鼠胰腺β－細胞系的 IC50值為100 μg·mL－1;在30 min的急性胰島素分泌測試中，熱帶靈芝粗提物也顯示出具有提高胰島素分泌的作用，這些結果都表明，熱帶靈芝粗提物具有升高胰島素和降低血糖活性的作用。

另外，Hu等[24]分離出的化合物3β，7β，15β－三羥基－11，23－二氧代羊毛脂－8，16－二烯－26－酸甲基酯，被證明具有一定的乙酰膽堿酶活性抑制作用。而乙酰膽堿與心血管系統(tǒng)存在重要的相互作用。人的腦組織中有大量的乙酰膽堿，隨著年齡的增加，乙酰膽堿的含量會減少，繼而容易誘發(fā)帕金斯癥、阿爾茨海默病等疾病，抑制乙酰膽堿酶，可以延緩乙酰膽堿的減少，提高人腦內的乙酰膽堿含量，促進腦神經(jīng)傳導功能，改善腦功能，提高記憶力[36，37]。

4 結語

一直以來，靈芝都是中藥學領域研究的熱點，但研究多集中在赤芝和紫芝 (Ganoderma sinense)2種靈芝上。近幾年來，越來越多的研究工作者已經(jīng)開始了靈芝屬其它種類靈芝的研究，除了對熱帶靈芝的研究之外，如Huang等[38]對于松杉靈芝對肝損失保護和Yu等[39]對松杉靈芝抗肺癌的研究也都顯示出較好的藥理活性。僅從目前的研究結果來說，熱帶靈芝具有與赤芝相似的化學成分及相似的藥理活性[40]，并且在治療急性肝障礙[34]等方面較赤芝有更好藥理活性，具有很高的研究價值。但是，目前對熱帶靈芝的研究遠不如赤芝和紫芝深入，有很多方面包括藥理活性、發(fā)酵培養(yǎng)、化學成分及分析方法等都值得進一步深入研究。例如，一方面增加其藥理活性方面的研究，如熱帶靈芝是否同赤芝一樣，具有免疫調節(jié)作用[41]、抗病毒、抗衰老[42]等藥理作用;另一方面，可以在熱帶靈芝菌絲體液體發(fā)酵方面進行研究，以更快捷廉價地獲得靈芝活性成分，確定熱帶靈芝的品質控制方法并保障其質量。

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