李擁軍等

不規(guī)則抗體是指不符合ABO血型系Landsteiner法則的血型抗體，包括ABO亞型抗體和非ABO血型系統(tǒng)的抗體，多數(shù)為免疫性抗體（IgG性質(zhì)）。相關(guān)研究[1]顯示，不規(guī)則抗體在正常人群的檢出率為0.3%～2%，而正常情況下，不規(guī)則抗體不存在人的血液中，但輸血、妊娠等因素可使同種異體紅細(xì)胞受抗原刺激而在患者體內(nèi)產(chǎn)生相應(yīng)的不規(guī)則抗體[2]。對(duì)于存在不規(guī)則抗體的患者，臨床輸血過程中輸入相應(yīng)的抗原紅細(xì)胞后，則很可能產(chǎn)生溶血反應(yīng)。因此，輸血前應(yīng)積極進(jìn)行不規(guī)則抗體的篩查，以避免發(fā)生溶血性輸血反應(yīng)，保證輸血安全。根據(jù)介質(zhì)的不同，臨床主要有酶法、聚凝胺法、抗人球蛋白法及微柱凝膠抗人球蛋白法四種常用方法[3]，該研究分別采用這四種方法對(duì)該院2011年5月—2013年5月間5260例有過輸血史或妊娠史的標(biāo)本分別采用進(jìn)行不規(guī)則抗體檢測(cè)，統(tǒng)計(jì)并評(píng)價(jià)不同方法的檢出率等優(yōu)缺點(diǎn)，以供臨床選用提供參考，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取在該院住院的5 260例有輸血史、妊娠史的患者血液標(biāo)本，其中有輸血史者2 926例，妊娠史者1 931例，有妊娠史反復(fù)輸血者403例；5 260例患者中，男3 258例，女2 002例；年齡11～71歲，平均年齡36.5歲；該實(shí)驗(yàn)方案經(jīng)該院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)后實(shí)施，所有患者入選前均簽署知情同意書。標(biāo)本為乙二胺四乙酸 （ EDTA ） 抗凝全血。

1.2 儀器與試劑

抗體特異性鑒定譜細(xì)胞（批號(hào)：20115702）、抗人球蛋白試劑（批號(hào)：20110105）、聚凝胺試劑盒（批號(hào)：20071018）、1%木瓜酶（批號(hào)：20080202）為上海血液生物醫(yī)藥有限公司生產(chǎn)，微柱凝膠試劑卡（批號(hào)：20100812）為長(zhǎng)春博迅生物技術(shù)有限責(zé)任公司產(chǎn)品，F(xiàn)YQ型免疫微柱孵育器、TD-3B血型血清血多用離心機(jī)均為長(zhǎng)春博研科學(xué)儀器有限責(zé)任公司產(chǎn)品。PN126可調(diào)式加樣器（5～50 μL）為上?？婆d生物科技有限公司產(chǎn)品。

1.3 方法

4種方法同時(shí)進(jìn)行，試驗(yàn)完成后，統(tǒng)計(jì)不同方法的操作時(shí)間、干擾因素，計(jì)算陽(yáng)性檢出率，分析不規(guī)則抗體篩查結(jié)果。

1.3.1 標(biāo)本處理 用離心機(jī)以3 000轉(zhuǎn)/min的速度將5 260份血液標(biāo)本離心1 min，分離血漿和紅細(xì)胞。

1.3.2 微柱凝膠法 微柱凝膠試劑卡的孔中加入50 μL篩選紅細(xì)胞及50 μL受血者血漿，用離心機(jī)已900 r/min轉(zhuǎn)速離心2 min，然后再以1 500 r/min離心3 min，觀察結(jié)果。

1.3.3 凝聚胺法 在 3支試管中分別加入50 μL篩選紅細(xì)胞、100 μL受血者血漿，加入0.7 mL低離子介質(zhì)，混勻，室溫靜置1 min，加入2滴凝聚胺溶液，混勻，室溫靜置15 s，用離心機(jī)3 000 r/min離心18 s，倒掉上清液，使管底剩余0.1 mL液體。輕搖試管，觀察到試管出現(xiàn)明顯凝集后，滴入2滴重懸液，輕搖試管，觀察結(jié)果。

1.3.4 抗人球蛋白法 在試管中分別加入受血者血漿100 μL，篩選紅細(xì)胞50 μL，混勻，室溫孵育1 min，以3 100 r/min離心15 s，混勻，置入37 ℃孵育箱中孵育30 min，以NS洗滌紅細(xì)胞3次，然后滴入100 μL抗球蛋白試劑，3 400 r/min離心15 s，觀察結(jié)果。 1.3.5 酶法 在 3支試管中分別加入受血者血漿100 μL，篩選紅細(xì)胞50 μL，混勻，室溫靜置1 min，加1%木瓜蛋白酶溶液100 μL，混合，37 ℃孵育30 min，3 400 r/min離心15 s，觀察結(jié)果。

1.4 判斷標(biāo)準(zhǔn)

肉眼觀察紅細(xì)胞出現(xiàn)凝集即判斷為陽(yáng)性，若紅細(xì)胞凝集消失，懸浮在溶液中即可判斷為陰性。對(duì)陽(yáng)性結(jié)果進(jìn)行不規(guī)則抗體鑒定，鑒定結(jié)果比對(duì)譜細(xì)胞的抗原格局圖。

1.5 統(tǒng)計(jì)方法

該實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS17.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析處理，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 4種方法不規(guī)則抗體檢出率對(duì)比

該組研究中，微柱凝膠法與抗人球蛋白法不規(guī)則抗體檢出率最高為0.68%；凝聚胺法檢出率率為0.63%，酶法檢出率最低為0.29%，見表1。微柱凝膠法檢測(cè)結(jié)果中，2926例有反復(fù)輸血史者陽(yáng)性18例，檢出率為0.62%，1931例妊娠史者中陽(yáng)性14例，檢出率為0.73%，403例有妊娠史反復(fù)輸血者陽(yáng)性4例，檢出率為1.00%，3組陽(yáng)性率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。

3 討論

臨床上將ABO血型系統(tǒng)以外的抗體稱之為不規(guī)則抗體，其中大部分不具有研究意義，但其中有一小部分不規(guī)則抗體會(huì)引起溶血性輸血反應(yīng)、新生兒溶血病等輸血不良反應(yīng)，嚴(yán)重時(shí)可危機(jī)患者生命。因此，臨床輸血前進(jìn)行不規(guī)則抗體篩查具有重要意義。

目前，臨床常用檢測(cè)技術(shù)有酶法、抗人球蛋白法、凝聚胺法及微柱凝膠抗人球蛋白法，四種方法各有優(yōu)勢(shì)和缺點(diǎn)。酶法適合于檢測(cè)有重大臨床意義的Rh系統(tǒng)抗體，但不能檢出抗-M、N、S、s、Fya、Fyb等抗體，這是由于酶可以破壞紅細(xì)胞膜上的MNSs、Duffy系統(tǒng)抗原，會(huì)造成這類抗體漏檢。如該研究中，其他三種方法檢測(cè)到抗體M、N，而酶法檢測(cè)不到。另外，酶試劑本身活性易失效，難以保存，因此酶法不適于常規(guī)不規(guī)則抗體的篩查?？谷饲虻鞍自囼?yàn)是最可靠、最經(jīng)典的血型不規(guī)則抗體檢測(cè)方法，但試驗(yàn)過程復(fù)雜，操作繁瑣，需要較長(zhǎng)的等待時(shí)間，不適合于臨床緊急輸血或大量標(biāo)本檢測(cè)，因此很少應(yīng)用于臨床工作，而只作為對(duì)少數(shù)標(biāo)本的確定檢驗(yàn)。凝聚胺法是一種操作簡(jiǎn)單、靈敏度高的不規(guī)則抗體檢測(cè)方法，其成本低廉，操作快捷，對(duì)血型抗體敏感性（除抗-K外）均超過抗人球蛋白法、酶法，是多數(shù)基層醫(yī)院常用方法，但此法需手工操作，易受到人為因素干擾，影響試驗(yàn)結(jié)果的判讀。尤其在溫度低時(shí)，其靈敏度也會(huì)收到影響，如該組試驗(yàn)中凝聚胺法造成2例抗抗-JKa不規(guī)則抗體漏檢，結(jié)果提示，此法可能對(duì)對(duì)抗-JKa敏感性低，這與馬曙軒[5]等的報(bào)道相符。另外，肝素抗凝樣本對(duì)試驗(yàn)結(jié)果造成干擾，這是由于肝素所攜帶的高價(jià)負(fù)離子與凝聚胺所攜帶的正電荷中和，減弱了紅細(xì)胞之間的特異性反應(yīng)。凝聚胺不能檢出抗-K抗體，這是因?yàn)槟郯泛蚄ell系統(tǒng)抗原都帶正電荷[6]。該研究中，凝聚胺法漏檢的3例為抗-E、抗-JKa，考慮可能是人為操作因素影響和結(jié)果判斷誤差，建議在凝聚胺試驗(yàn)中使用顯微鏡判讀結(jié)果，以避免弱陽(yáng)性標(biāo)本。微柱凝膠抗人球蛋白法是近年來新興的一種免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)，結(jié)合了凝膠過濾技術(shù)和抗原抗體反應(yīng)技術(shù)，利用凝膠顆粒的分子篩作用，實(shí)現(xiàn)對(duì)抗原抗體反應(yīng)后的紅細(xì)胞的篩查，無IgG結(jié)合的紅細(xì)胞穿過凝膠到達(dá)底部，與IgG結(jié)合的紅細(xì)胞則會(huì)被凝膠中的抗IgG拉住，紅細(xì)胞被阻止在凝膠柱上層或中間[7]。微柱凝膠法的試劑成本較高，但與酶法、抗人球蛋白法及凝聚胺法相比，具有靈敏度更高，且操作簡(jiǎn)便易行，人為干擾因素少，試驗(yàn)結(jié)果易判度、易保存等優(yōu)點(diǎn)，已成為臨床首選方法。

對(duì)以上4種方法的優(yōu)缺點(diǎn)進(jìn)行分析可知：酶法漏檢率高、結(jié)果難以保存，抗人球蛋白法操作繁瑣、等待時(shí)間長(zhǎng)。因此，這兩種方法基本不用于不規(guī)則抗體的臨床檢測(cè)。微柱凝膠抗人球蛋白法和凝聚胺法作為臨床常用方法，在靈敏度上沒有顯著差異，都能滿足臨床應(yīng)用要求，但微柱凝膠抗人球蛋白法干擾因素少，易于標(biāo)準(zhǔn)化，結(jié)果易判斷又能較長(zhǎng)時(shí)間保存，能提高輸血安全性，宜選為常規(guī)配血方法[8]，凝聚胺法操作快速、簡(jiǎn)便，適合急診配血。因此，對(duì)于硬件條件好的醫(yī)院可優(yōu)先選用微柱凝膠抗人球蛋白法進(jìn)行不規(guī)則抗體的檢測(cè)，而對(duì)于基層醫(yī)院或急診患者時(shí)可選用快速準(zhǔn)確、成本低廉的凝聚胺法。

[參考文獻(xiàn)]

[1] 何子毅，劉赴平，李偉其，等.受血者血型鑒定準(zhǔn)確率及不規(guī)則抗體陽(yáng)性率調(diào)查研究[J].實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志，2011，27（5）：877-879.

[2] 曲翠娥，鄭洪澤.微柱凝集和聚凝胺法檢測(cè)不規(guī)則抗體的對(duì)照分析[J].中國(guó)實(shí)用醫(yī)刊，2013，40（14）：24-25.

[3] 許大巍.左江濤.輸血前不規(guī)則抗體篩查方法的比較[J].中國(guó)藥物與臨床，2013，13（5）：677-678.

[4] 中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部醫(yī)政司. 全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程[M].3版.南京：東南大學(xué)出版社，2006：59-63.

[5] 馬曙軒，白麗霞，劉景漢，等.4種檢測(cè)IgG紅細(xì)胞抗體方法的比較[J].第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào)，2005，27（7）：660-662.

[6] 張志哲.血型不規(guī)則抗體檢測(cè)方法及臨床應(yīng)用[J].內(nèi)科，2011，6（3）：266-269.

[7] 龍華泉，陳世豪，張偉堅(jiān).凝聚胺法與微柱凝聚法檢測(cè)不規(guī)則抗體的對(duì)比分析[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床，2013，10（1）：39-40.

[8] 閆有敏.凝聚胺法和微柱凝膠抗人球蛋白法在配血中的應(yīng)用比較[J].實(shí)用醫(yī)技雜志，2013，20（4）：418-418.

（收稿日期：2014-04-23）endprint

不規(guī)則抗體是指不符合ABO血型系Landsteiner法則的血型抗體，包括ABO亞型抗體和非ABO血型系統(tǒng)的抗體，多數(shù)為免疫性抗體（IgG性質(zhì)）。相關(guān)研究[1]顯示，不規(guī)則抗體在正常人群的檢出率為0.3%～2%，而正常情況下，不規(guī)則抗體不存在人的血液中，但輸血、妊娠等因素可使同種異體紅細(xì)胞受抗原刺激而在患者體內(nèi)產(chǎn)生相應(yīng)的不規(guī)則抗體[2]。對(duì)于存在不規(guī)則抗體的患者，臨床輸血過程中輸入相應(yīng)的抗原紅細(xì)胞后，則很可能產(chǎn)生溶血反應(yīng)。因此，輸血前應(yīng)積極進(jìn)行不規(guī)則抗體的篩查，以避免發(fā)生溶血性輸血反應(yīng)，保證輸血安全。根據(jù)介質(zhì)的不同，臨床主要有酶法、聚凝胺法、抗人球蛋白法及微柱凝膠抗人球蛋白法四種常用方法[3]，該研究分別采用這四種方法對(duì)該院2011年5月—2013年5月間5260例有過輸血史或妊娠史的標(biāo)本分別采用進(jìn)行不規(guī)則抗體檢測(cè)，統(tǒng)計(jì)并評(píng)價(jià)不同方法的檢出率等優(yōu)缺點(diǎn)，以供臨床選用提供參考，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取在該院住院的5 260例有輸血史、妊娠史的患者血液標(biāo)本，其中有輸血史者2 926例，妊娠史者1 931例，有妊娠史反復(fù)輸血者403例；5 260例患者中，男3 258例，女2 002例；年齡11～71歲，平均年齡36.5歲；該實(shí)驗(yàn)方案經(jīng)該院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)后實(shí)施，所有患者入選前均簽署知情同意書。標(biāo)本為乙二胺四乙酸 （ EDTA ） 抗凝全血。

1.2 儀器與試劑

抗體特異性鑒定譜細(xì)胞（批號(hào)：20115702）、抗人球蛋白試劑（批號(hào)：20110105）、聚凝胺試劑盒（批號(hào)：20071018）、1%木瓜酶（批號(hào)：20080202）為上海血液生物醫(yī)藥有限公司生產(chǎn)，微柱凝膠試劑卡（批號(hào)：20100812）為長(zhǎng)春博迅生物技術(shù)有限責(zé)任公司產(chǎn)品，F(xiàn)YQ型免疫微柱孵育器、TD-3B血型血清血多用離心機(jī)均為長(zhǎng)春博研科學(xué)儀器有限責(zé)任公司產(chǎn)品。PN126可調(diào)式加樣器（5～50 μL）為上?？婆d生物科技有限公司產(chǎn)品。

1.3 方法

4種方法同時(shí)進(jìn)行，試驗(yàn)完成后，統(tǒng)計(jì)不同方法的操作時(shí)間、干擾因素，計(jì)算陽(yáng)性檢出率，分析不規(guī)則抗體篩查結(jié)果。

1.3.1 標(biāo)本處理 用離心機(jī)以3 000轉(zhuǎn)/min的速度將5 260份血液標(biāo)本離心1 min，分離血漿和紅細(xì)胞。

1.3.2 微柱凝膠法 微柱凝膠試劑卡的孔中加入50 μL篩選紅細(xì)胞及50 μL受血者血漿，用離心機(jī)已900 r/min轉(zhuǎn)速離心2 min，然后再以1 500 r/min離心3 min，觀察結(jié)果。

1.3.3 凝聚胺法 在 3支試管中分別加入50 μL篩選紅細(xì)胞、100 μL受血者血漿，加入0.7 mL低離子介質(zhì)，混勻，室溫靜置1 min，加入2滴凝聚胺溶液，混勻，室溫靜置15 s，用離心機(jī)3 000 r/min離心18 s，倒掉上清液，使管底剩余0.1 mL液體。輕搖試管，觀察到試管出現(xiàn)明顯凝集后，滴入2滴重懸液，輕搖試管，觀察結(jié)果。

1.3.4 抗人球蛋白法 在試管中分別加入受血者血漿100 μL，篩選紅細(xì)胞50 μL，混勻，室溫孵育1 min，以3 100 r/min離心15 s，混勻，置入37 ℃孵育箱中孵育30 min，以NS洗滌紅細(xì)胞3次，然后滴入100 μL抗球蛋白試劑，3 400 r/min離心15 s，觀察結(jié)果。 1.3.5 酶法 在 3支試管中分別加入受血者血漿100 μL，篩選紅細(xì)胞50 μL，混勻，室溫靜置1 min，加1%木瓜蛋白酶溶液100 μL，混合，37 ℃孵育30 min，3 400 r/min離心15 s，觀察結(jié)果。

1.4 判斷標(biāo)準(zhǔn)

肉眼觀察紅細(xì)胞出現(xiàn)凝集即判斷為陽(yáng)性，若紅細(xì)胞凝集消失，懸浮在溶液中即可判斷為陰性。對(duì)陽(yáng)性結(jié)果進(jìn)行不規(guī)則抗體鑒定，鑒定結(jié)果比對(duì)譜細(xì)胞的抗原格局圖。

1.5 統(tǒng)計(jì)方法

該實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS17.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析處理，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 4種方法不規(guī)則抗體檢出率對(duì)比

該組研究中，微柱凝膠法與抗人球蛋白法不規(guī)則抗體檢出率最高為0.68%；凝聚胺法檢出率率為0.63%，酶法檢出率最低為0.29%，見表1。微柱凝膠法檢測(cè)結(jié)果中，2926例有反復(fù)輸血史者陽(yáng)性18例，檢出率為0.62%，1931例妊娠史者中陽(yáng)性14例，檢出率為0.73%，403例有妊娠史反復(fù)輸血者陽(yáng)性4例，檢出率為1.00%，3組陽(yáng)性率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。

3 討論

臨床上將ABO血型系統(tǒng)以外的抗體稱之為不規(guī)則抗體，其中大部分不具有研究意義，但其中有一小部分不規(guī)則抗體會(huì)引起溶血性輸血反應(yīng)、新生兒溶血病等輸血不良反應(yīng)，嚴(yán)重時(shí)可危機(jī)患者生命。因此，臨床輸血前進(jìn)行不規(guī)則抗體篩查具有重要意義。

目前，臨床常用檢測(cè)技術(shù)有酶法、抗人球蛋白法、凝聚胺法及微柱凝膠抗人球蛋白法，四種方法各有優(yōu)勢(shì)和缺點(diǎn)。酶法適合于檢測(cè)有重大臨床意義的Rh系統(tǒng)抗體，但不能檢出抗-M、N、S、s、Fya、Fyb等抗體，這是由于酶可以破壞紅細(xì)胞膜上的MNSs、Duffy系統(tǒng)抗原，會(huì)造成這類抗體漏檢。如該研究中，其他三種方法檢測(cè)到抗體M、N，而酶法檢測(cè)不到。另外，酶試劑本身活性易失效，難以保存，因此酶法不適于常規(guī)不規(guī)則抗體的篩查?？谷饲虻鞍自囼?yàn)是最可靠、最經(jīng)典的血型不規(guī)則抗體檢測(cè)方法，但試驗(yàn)過程復(fù)雜，操作繁瑣，需要較長(zhǎng)的等待時(shí)間，不適合于臨床緊急輸血或大量標(biāo)本檢測(cè)，因此很少應(yīng)用于臨床工作，而只作為對(duì)少數(shù)標(biāo)本的確定檢驗(yàn)。凝聚胺法是一種操作簡(jiǎn)單、靈敏度高的不規(guī)則抗體檢測(cè)方法，其成本低廉，操作快捷，對(duì)血型抗體敏感性（除抗-K外）均超過抗人球蛋白法、酶法，是多數(shù)基層醫(yī)院常用方法，但此法需手工操作，易受到人為因素干擾，影響試驗(yàn)結(jié)果的判讀。尤其在溫度低時(shí)，其靈敏度也會(huì)收到影響，如該組試驗(yàn)中凝聚胺法造成2例抗抗-JKa不規(guī)則抗體漏檢，結(jié)果提示，此法可能對(duì)對(duì)抗-JKa敏感性低，這與馬曙軒[5]等的報(bào)道相符。另外，肝素抗凝樣本對(duì)試驗(yàn)結(jié)果造成干擾，這是由于肝素所攜帶的高價(jià)負(fù)離子與凝聚胺所攜帶的正電荷中和，減弱了紅細(xì)胞之間的特異性反應(yīng)。凝聚胺不能檢出抗-K抗體，這是因?yàn)槟郯泛蚄ell系統(tǒng)抗原都帶正電荷[6]。該研究中，凝聚胺法漏檢的3例為抗-E、抗-JKa，考慮可能是人為操作因素影響和結(jié)果判斷誤差，建議在凝聚胺試驗(yàn)中使用顯微鏡判讀結(jié)果，以避免弱陽(yáng)性標(biāo)本。微柱凝膠抗人球蛋白法是近年來新興的一種免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)，結(jié)合了凝膠過濾技術(shù)和抗原抗體反應(yīng)技術(shù)，利用凝膠顆粒的分子篩作用，實(shí)現(xiàn)對(duì)抗原抗體反應(yīng)后的紅細(xì)胞的篩查，無IgG結(jié)合的紅細(xì)胞穿過凝膠到達(dá)底部，與IgG結(jié)合的紅細(xì)胞則會(huì)被凝膠中的抗IgG拉住，紅細(xì)胞被阻止在凝膠柱上層或中間[7]。微柱凝膠法的試劑成本較高，但與酶法、抗人球蛋白法及凝聚胺法相比，具有靈敏度更高，且操作簡(jiǎn)便易行，人為干擾因素少，試驗(yàn)結(jié)果易判度、易保存等優(yōu)點(diǎn)，已成為臨床首選方法。

對(duì)以上4種方法的優(yōu)缺點(diǎn)進(jìn)行分析可知：酶法漏檢率高、結(jié)果難以保存，抗人球蛋白法操作繁瑣、等待時(shí)間長(zhǎng)。因此，這兩種方法基本不用于不規(guī)則抗體的臨床檢測(cè)。微柱凝膠抗人球蛋白法和凝聚胺法作為臨床常用方法，在靈敏度上沒有顯著差異，都能滿足臨床應(yīng)用要求，但微柱凝膠抗人球蛋白法干擾因素少，易于標(biāo)準(zhǔn)化，結(jié)果易判斷又能較長(zhǎng)時(shí)間保存，能提高輸血安全性，宜選為常規(guī)配血方法[8]，凝聚胺法操作快速、簡(jiǎn)便，適合急診配血。因此，對(duì)于硬件條件好的醫(yī)院可優(yōu)先選用微柱凝膠抗人球蛋白法進(jìn)行不規(guī)則抗體的檢測(cè)，而對(duì)于基層醫(yī)院或急診患者時(shí)可選用快速準(zhǔn)確、成本低廉的凝聚胺法。

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（收稿日期：2014-04-23）endprint

不規(guī)則抗體是指不符合ABO血型系Landsteiner法則的血型抗體，包括ABO亞型抗體和非ABO血型系統(tǒng)的抗體，多數(shù)為免疫性抗體（IgG性質(zhì)）。相關(guān)研究[1]顯示，不規(guī)則抗體在正常人群的檢出率為0.3%～2%，而正常情況下，不規(guī)則抗體不存在人的血液中，但輸血、妊娠等因素可使同種異體紅細(xì)胞受抗原刺激而在患者體內(nèi)產(chǎn)生相應(yīng)的不規(guī)則抗體[2]。對(duì)于存在不規(guī)則抗體的患者，臨床輸血過程中輸入相應(yīng)的抗原紅細(xì)胞后，則很可能產(chǎn)生溶血反應(yīng)。因此，輸血前應(yīng)積極進(jìn)行不規(guī)則抗體的篩查，以避免發(fā)生溶血性輸血反應(yīng)，保證輸血安全。根據(jù)介質(zhì)的不同，臨床主要有酶法、聚凝胺法、抗人球蛋白法及微柱凝膠抗人球蛋白法四種常用方法[3]，該研究分別采用這四種方法對(duì)該院2011年5月—2013年5月間5260例有過輸血史或妊娠史的標(biāo)本分別采用進(jìn)行不規(guī)則抗體檢測(cè)，統(tǒng)計(jì)并評(píng)價(jià)不同方法的檢出率等優(yōu)缺點(diǎn)，以供臨床選用提供參考，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取在該院住院的5 260例有輸血史、妊娠史的患者血液標(biāo)本，其中有輸血史者2 926例，妊娠史者1 931例，有妊娠史反復(fù)輸血者403例；5 260例患者中，男3 258例，女2 002例；年齡11～71歲，平均年齡36.5歲；該實(shí)驗(yàn)方案經(jīng)該院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)后實(shí)施，所有患者入選前均簽署知情同意書。標(biāo)本為乙二胺四乙酸 （ EDTA ） 抗凝全血。

1.2 儀器與試劑

抗體特異性鑒定譜細(xì)胞（批號(hào)：20115702）、抗人球蛋白試劑（批號(hào)：20110105）、聚凝胺試劑盒（批號(hào)：20071018）、1%木瓜酶（批號(hào)：20080202）為上海血液生物醫(yī)藥有限公司生產(chǎn)，微柱凝膠試劑卡（批號(hào)：20100812）為長(zhǎng)春博迅生物技術(shù)有限責(zé)任公司產(chǎn)品，F(xiàn)YQ型免疫微柱孵育器、TD-3B血型血清血多用離心機(jī)均為長(zhǎng)春博研科學(xué)儀器有限責(zé)任公司產(chǎn)品。PN126可調(diào)式加樣器（5～50 μL）為上?？婆d生物科技有限公司產(chǎn)品。

1.3 方法

4種方法同時(shí)進(jìn)行，試驗(yàn)完成后，統(tǒng)計(jì)不同方法的操作時(shí)間、干擾因素，計(jì)算陽(yáng)性檢出率，分析不規(guī)則抗體篩查結(jié)果。

1.3.1 標(biāo)本處理 用離心機(jī)以3 000轉(zhuǎn)/min的速度將5 260份血液標(biāo)本離心1 min，分離血漿和紅細(xì)胞。

1.3.2 微柱凝膠法 微柱凝膠試劑卡的孔中加入50 μL篩選紅細(xì)胞及50 μL受血者血漿，用離心機(jī)已900 r/min轉(zhuǎn)速離心2 min，然后再以1 500 r/min離心3 min，觀察結(jié)果。

1.3.3 凝聚胺法 在 3支試管中分別加入50 μL篩選紅細(xì)胞、100 μL受血者血漿，加入0.7 mL低離子介質(zhì)，混勻，室溫靜置1 min，加入2滴凝聚胺溶液，混勻，室溫靜置15 s，用離心機(jī)3 000 r/min離心18 s，倒掉上清液，使管底剩余0.1 mL液體。輕搖試管，觀察到試管出現(xiàn)明顯凝集后，滴入2滴重懸液，輕搖試管，觀察結(jié)果。

1.3.4 抗人球蛋白法 在試管中分別加入受血者血漿100 μL，篩選紅細(xì)胞50 μL，混勻，室溫孵育1 min，以3 100 r/min離心15 s，混勻，置入37 ℃孵育箱中孵育30 min，以NS洗滌紅細(xì)胞3次，然后滴入100 μL抗球蛋白試劑，3 400 r/min離心15 s，觀察結(jié)果。 1.3.5 酶法 在 3支試管中分別加入受血者血漿100 μL，篩選紅細(xì)胞50 μL，混勻，室溫靜置1 min，加1%木瓜蛋白酶溶液100 μL，混合，37 ℃孵育30 min，3 400 r/min離心15 s，觀察結(jié)果。

1.4 判斷標(biāo)準(zhǔn)

肉眼觀察紅細(xì)胞出現(xiàn)凝集即判斷為陽(yáng)性，若紅細(xì)胞凝集消失，懸浮在溶液中即可判斷為陰性。對(duì)陽(yáng)性結(jié)果進(jìn)行不規(guī)則抗體鑒定，鑒定結(jié)果比對(duì)譜細(xì)胞的抗原格局圖。

1.5 統(tǒng)計(jì)方法

該實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS17.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析處理，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 4種方法不規(guī)則抗體檢出率對(duì)比

該組研究中，微柱凝膠法與抗人球蛋白法不規(guī)則抗體檢出率最高為0.68%；凝聚胺法檢出率率為0.63%，酶法檢出率最低為0.29%，見表1。微柱凝膠法檢測(cè)結(jié)果中，2926例有反復(fù)輸血史者陽(yáng)性18例，檢出率為0.62%，1931例妊娠史者中陽(yáng)性14例，檢出率為0.73%，403例有妊娠史反復(fù)輸血者陽(yáng)性4例，檢出率為1.00%，3組陽(yáng)性率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。

3 討論

臨床上將ABO血型系統(tǒng)以外的抗體稱之為不規(guī)則抗體，其中大部分不具有研究意義，但其中有一小部分不規(guī)則抗體會(huì)引起溶血性輸血反應(yīng)、新生兒溶血病等輸血不良反應(yīng)，嚴(yán)重時(shí)可危機(jī)患者生命。因此，臨床輸血前進(jìn)行不規(guī)則抗體篩查具有重要意義。

目前，臨床常用檢測(cè)技術(shù)有酶法、抗人球蛋白法、凝聚胺法及微柱凝膠抗人球蛋白法，四種方法各有優(yōu)勢(shì)和缺點(diǎn)。酶法適合于檢測(cè)有重大臨床意義的Rh系統(tǒng)抗體，但不能檢出抗-M、N、S、s、Fya、Fyb等抗體，這是由于酶可以破壞紅細(xì)胞膜上的MNSs、Duffy系統(tǒng)抗原，會(huì)造成這類抗體漏檢。如該研究中，其他三種方法檢測(cè)到抗體M、N，而酶法檢測(cè)不到。另外，酶試劑本身活性易失效，難以保存，因此酶法不適于常規(guī)不規(guī)則抗體的篩查。抗人球蛋白試驗(yàn)是最可靠、最經(jīng)典的血型不規(guī)則抗體檢測(cè)方法，但試驗(yàn)過程復(fù)雜，操作繁瑣，需要較長(zhǎng)的等待時(shí)間，不適合于臨床緊急輸血或大量標(biāo)本檢測(cè)，因此很少應(yīng)用于臨床工作，而只作為對(duì)少數(shù)標(biāo)本的確定檢驗(yàn)。凝聚胺法是一種操作簡(jiǎn)單、靈敏度高的不規(guī)則抗體檢測(cè)方法，其成本低廉，操作快捷，對(duì)血型抗體敏感性（除抗-K外）均超過抗人球蛋白法、酶法，是多數(shù)基層醫(yī)院常用方法，但此法需手工操作，易受到人為因素干擾，影響試驗(yàn)結(jié)果的判讀。尤其在溫度低時(shí)，其靈敏度也會(huì)收到影響，如該組試驗(yàn)中凝聚胺法造成2例抗抗-JKa不規(guī)則抗體漏檢，結(jié)果提示，此法可能對(duì)對(duì)抗-JKa敏感性低，這與馬曙軒[5]等的報(bào)道相符。另外，肝素抗凝樣本對(duì)試驗(yàn)結(jié)果造成干擾，這是由于肝素所攜帶的高價(jià)負(fù)離子與凝聚胺所攜帶的正電荷中和，減弱了紅細(xì)胞之間的特異性反應(yīng)。凝聚胺不能檢出抗-K抗體，這是因?yàn)槟郯泛蚄ell系統(tǒng)抗原都帶正電荷[6]。該研究中，凝聚胺法漏檢的3例為抗-E、抗-JKa，考慮可能是人為操作因素影響和結(jié)果判斷誤差，建議在凝聚胺試驗(yàn)中使用顯微鏡判讀結(jié)果，以避免弱陽(yáng)性標(biāo)本。微柱凝膠抗人球蛋白法是近年來新興的一種免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)，結(jié)合了凝膠過濾技術(shù)和抗原抗體反應(yīng)技術(shù)，利用凝膠顆粒的分子篩作用，實(shí)現(xiàn)對(duì)抗原抗體反應(yīng)后的紅細(xì)胞的篩查，無IgG結(jié)合的紅細(xì)胞穿過凝膠到達(dá)底部，與IgG結(jié)合的紅細(xì)胞則會(huì)被凝膠中的抗IgG拉住，紅細(xì)胞被阻止在凝膠柱上層或中間[7]。微柱凝膠法的試劑成本較高，但與酶法、抗人球蛋白法及凝聚胺法相比，具有靈敏度更高，且操作簡(jiǎn)便易行，人為干擾因素少，試驗(yàn)結(jié)果易判度、易保存等優(yōu)點(diǎn)，已成為臨床首選方法。

對(duì)以上4種方法的優(yōu)缺點(diǎn)進(jìn)行分析可知：酶法漏檢率高、結(jié)果難以保存，抗人球蛋白法操作繁瑣、等待時(shí)間長(zhǎng)。因此，這兩種方法基本不用于不規(guī)則抗體的臨床檢測(cè)。微柱凝膠抗人球蛋白法和凝聚胺法作為臨床常用方法，在靈敏度上沒有顯著差異，都能滿足臨床應(yīng)用要求，但微柱凝膠抗人球蛋白法干擾因素少，易于標(biāo)準(zhǔn)化，結(jié)果易判斷又能較長(zhǎng)時(shí)間保存，能提高輸血安全性，宜選為常規(guī)配血方法[8]，凝聚胺法操作快速、簡(jiǎn)便，適合急診配血。因此，對(duì)于硬件條件好的醫(yī)院可優(yōu)先選用微柱凝膠抗人球蛋白法進(jìn)行不規(guī)則抗體的檢測(cè)，而對(duì)于基層醫(yī)院或急診患者時(shí)可選用快速準(zhǔn)確、成本低廉的凝聚胺法。

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