李 昂

(湖南省湘潭市藥品檢驗(yàn)所，湖南 湘潭 411100)

扶正合劑是湘潭紅十字建春醫(yī)院的中藥復(fù)方制劑，根據(jù)中醫(yī)驗(yàn)方研制而成，由補(bǔ)骨脂、黃芪、女貞子、雞血藤等藥材組方，具有扶正固本、提高人體免疫力的作用，用于久病陰虛，配合化學(xué)治療、可促進(jìn)疾病康復(fù)。為了有效地控制藥品質(zhì)量，本試驗(yàn)中采用高效液相色譜法對(duì)補(bǔ)骨脂中補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素的含量進(jìn)行測(cè)定，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

Agilent 1200型高效液相色譜儀;AUW-20型島津電子天平;UV2501型紫外可見分光光度計(jì)(日本島津)。補(bǔ)骨脂素對(duì)照品(批號(hào)為110739-200814)、異補(bǔ)骨脂素對(duì)照品(批號(hào)為110738-201012)，均購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所;扶正合劑(醫(yī)院自制，批號(hào)為110510，111226，120603);甲醇為色譜純，水為重蒸餾水，其他試劑為分析純。

2 方法與結(jié)果

2．1 色譜條件

色譜柱:Diamonsil C18柱(150 mm ×4．6 mm，5 μm);流動(dòng)相:甲醇-水(35∶65);流速:1．0 mL/min;檢測(cè)波長(zhǎng):246 nm。柱溫:35℃;進(jìn)樣量:10 μL。理論板數(shù)按補(bǔ)骨脂素峰計(jì)算不低于3 000，色譜峰分離度大于1．5。

2．2 溶液制備

分別精密稱取補(bǔ)骨脂素對(duì)照品14．78 mg和異補(bǔ)骨脂素對(duì)照品14．35 mg，置50 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，備用，作為貯備液。分別精密量取貯備液2 mL，置50 mL容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液(補(bǔ)骨脂素0．011 82 g/L，異補(bǔ)骨脂素 0．011 48 g/L)。精密量取 20 mL 樣品，用醋酸乙酯提取4次，每次20 mL，合并提取液，置水浴蒸干，殘?jiān)眉状既芙猓⑥D(zhuǎn)移到25 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，作為供試品溶液。

2．3 方法學(xué)考察

陰性干擾試驗(yàn):按樣品工藝配比制備缺補(bǔ)骨脂的陰性樣品，照供試品溶液制備方法，制備陰性樣品溶液，進(jìn)樣10 μL，測(cè)定。結(jié)果陰性樣品對(duì)測(cè)定無干擾見圖1。

線性關(guān)系考察:分精密量取對(duì)照品溶液 2，4，6，8，10 μL，注入高效液相色譜儀進(jìn)行分析，測(cè)定峰面積。以對(duì)照品進(jìn)樣量(X，μg)為橫坐標(biāo)、峰面積(Y)為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，補(bǔ)骨脂素回歸方程為 Y=7．839 5 X+6．110 0(r=0．999 9);異補(bǔ)骨脂素為 Y=7．365 9+3．685 4 X(r=0．999 8)。結(jié)果表明，補(bǔ)骨脂素進(jìn)樣量在23．65 ～118．24 ng范圍內(nèi)，異補(bǔ)骨脂素進(jìn)樣量在 22．96～114．80 ng范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

精密度試驗(yàn):精密量取同一對(duì)照品溶液(質(zhì)量濃度為32．6 μg/mL)20 μL，連續(xù)進(jìn)樣 6 次。記錄峰面積，結(jié)果的 RSD 為0．7%，表明儀器精密度良好。

重復(fù)性試驗(yàn):取同一批(批號(hào)為111226)樣品，依法制備6份供試品溶液并測(cè)定含量。結(jié)果補(bǔ)骨脂素的平均含量為0．031 g/L(RSD=1．3%)，異補(bǔ)骨脂素的平均含量為 0．045 g/L(RSD=0．9%)，表明方法重復(fù)性好。

穩(wěn)定性試驗(yàn):取同一供試品溶液10 μL，分別于溶液配制后0，2，4，6，8，10，12，14，16 h 時(shí)進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素峰面積的 RSD分別為1．2%和0．8%(n=9)，表明供試品溶液在16 h內(nèi)穩(wěn)定。

圖1 高效液相色譜圖

加樣回收試驗(yàn):稱取已測(cè)定含量樣品(批號(hào)為110501)10 mL和15 mL，各取3份，精密量取，各加入補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素對(duì)照品適量，依法制備供試品溶液，按擬訂色譜條件進(jìn)樣，計(jì)算加樣加收率。結(jié)果見表1。

表1 補(bǔ)骨脂素和補(bǔ)骨脂素加樣回收試驗(yàn)結(jié)果(n=6)

2．4 樣品含量測(cè)定

取3批樣品各2份，分別制備供試品溶液，進(jìn)行測(cè)定并計(jì)算。結(jié)果見表2。

表2 樣品含量測(cè)定結(jié)果

3 討論

取補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素對(duì)照品貯備液適量，以流動(dòng)相精密配成含對(duì)照品0．4 g/L的溶液，在200～400 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)進(jìn)行紫外掃描，結(jié)果在246 nm波長(zhǎng)處有最大吸收。參照文獻(xiàn)[1-2]，采用醋酸乙酯和正丁醇作為提取溶劑，結(jié)果顯示醋酸乙酯提取效果最佳。選用甲醇-水(35∶65)作為流動(dòng)相，補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素峰形良好，保留時(shí)間適宜，樣品中補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素能達(dá)到基線分離。該方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、重復(fù)性好，可作為扶正合劑質(zhì)量控制的有效方法。

[1]國(guó)家藥典委員會(huì)．中華人民共和國(guó)藥典(一部)[M]．北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010:174．

[2]田永華，錢 葉，俞 圓．HPLC測(cè)定腰痛片中補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素的含量[J]．中成藥，2007，29(8):12-13．