安徽省銅陵市食品藥品檢驗(yàn)所（244000）錢(qián)世兵

安徽省銅陵職業(yè)技術(shù)學(xué)院（244000）開(kāi)偉華Δ

伽藍(lán)(集團(tuán))股份有限公司（200233）金家宏 李慧 夏增華

石榴（Punica granmumLinn.）為石榴科（Punicaceae）石榴屬（Punica）落葉灌木或小喬木，別名安石榴、海榴，分布在亞熱帶及溫帶地區(qū)，我國(guó)南北各地區(qū)均有種植，其中陜西、安徽、山東、江蘇、河南、四川、云南及新疆等地分布較多。石榴皮為石榴的干燥果皮，秋季果實(shí)成熟后收集果皮，曬干；性溫，味酸、澀，歸大腸經(jīng)，具有澀腸，止血，驅(qū)蟲(chóng)等功效?？芍尉脼a，久痢，便血，脫肛，滑精，蟲(chóng)積腹痛，疥癬等。臨床用于腹瀉、潰瘍性結(jié)腸炎等的治療[1][2][3]。

研究顯示，石榴皮提取物含有高達(dá)24.9%的多酚類(lèi)化合物，其中類(lèi)黃酮物質(zhì)占6%，而黃酮類(lèi)化合物因在抗衰老等方面具有良好的作用，具有清除自由基和抗氧化的能力而備受關(guān)注[4]，且已被證實(shí)與石榴皮中抗氧化作用有關(guān)[5]。為了發(fā)掘更好的石榴皮藥用資源，本研究采用三氯化鋁絡(luò)合法測(cè)定不同產(chǎn)地的石榴皮中總黃酮含量及其DPPH自由基清除作用，對(duì)不同產(chǎn)地、品種的石榴皮的抗氧化作用進(jìn)行評(píng)價(jià)，以期為石榴資源的綜合開(kāi)發(fā)提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料 市售石榴，分別產(chǎn)自上海（鮮石榴）、陜西臨潼（酸石榴）、山東棗莊（鮮石榴）、新疆烏魯木齊（鮮石榴）、云南蒙自（干燥皮）、安徽懷遠(yuǎn)（鮮石榴）、云南玉溪（酸石榴）、云南玉溪（鮮石榴）、安徽亳州（干燥皮）和上海（飲片，碳制）。新鮮石榴收集后，分離皮、果汁和種子，果汁濃縮至干，備用；石榴皮和種子60℃下鼓風(fēng)干燥，粉碎至粗粉，保存于干燥避光處備用。

1.2 儀器 T6紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)（北京普析通用儀器有限公司）、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海申生科技有限公司）、電子分析天平（Shimadzu）、鼓風(fēng)干燥箱（上海一恒科學(xué)儀器有限公司）、自動(dòng)雙蒸純水蒸餾器（上海和泰儀器有限公司）、容量瓶、離心管、具塞試管。

1.3 試劑與配制

1.3.1 試劑 DPPH（二苯基苦味?；诫?，Sigma Aldrich）、Vc （分析純，上海駿惠化工有限公司）、槲皮素標(biāo)準(zhǔn)品（98%，Sigma Aldrich）、無(wú)水乙醇（分析純，中國(guó)上海振興化工一廠）、95%乙醇（分析純，中國(guó)上海振興化工一廠）、甲醇（分析純，中國(guó)上海振興化工一廠）；三氯化鋁（分析純，Sigma Aldrich）。

1.3.2 配制 DPPH乙醇溶液的配制：準(zhǔn)確稱(chēng)取6mg DPPH，用95%乙醇（或無(wú)水乙醇）溶解并定容于200ml容量瓶中，DPPH濃度為76μmol/L，避光保存（0～4℃）。

附表1 10種產(chǎn)地和來(lái)源石榴皮抗氧化活性結(jié)果

附表2 10種產(chǎn)地和來(lái)源石榴皮總黃酮含量

1.4 方法

1.4.1 抗氧化活性測(cè)定[6][7][8]

1.4.1.1 供試品制備 石榴皮提取物制備：取石榴皮粗粉20g，加70%乙醇按m（料）∶V（液）＝1∶10浸泡3h，超聲提取30min（500W），濾液濃縮至干，加適量水配置成10mg/ml母液，備用。

1.4.1.2 測(cè)定方法 取樣品溶液和DPPH·溶液按照等體積比加入同一具塞試管中，搖勻，在避光條件下反應(yīng)30min后用分光光度計(jì)在525nm處測(cè)定吸光度T。同時(shí)測(cè)定DPPH溶液與等體積純水混合液的吸光度C，以及待測(cè)液與等體積95%乙醇混合液的吸光度T0。根據(jù)下列公式計(jì)算清除率：清除率＝[1-（T-T0）/C]×100%。同時(shí)，本實(shí)驗(yàn)采用Vc作為對(duì)照組。

1.4.1.3 半清除率（IC50）的測(cè)定 半清除率指清除率為50%時(shí)所需樣品的濃度。將待測(cè)抗氧化劑配制成系列溶液，測(cè)定各濃度抗氧化劑對(duì)DPPH自由基清除率，在清除率0%～100%的范圍內(nèi)，繪制清除率對(duì)濃度曲線(xiàn)，計(jì)算出清除率為50%時(shí)的濃度值，即為IC50值。IC50越低，說(shuō)明抗氧化活性越高。

1.4.2 總黃酮含量測(cè)定[9]

1.4.2.1 供試品制備 同1.4.1.1項(xiàng)下供試品制備。

1.4.2.2 對(duì)照品溶液的制備 槲皮素標(biāo)準(zhǔn)溶液：精密稱(chēng)取在120℃干燥至恒重的槲皮素對(duì)照品10mg于100ml容量瓶中，用70%乙醇溶解稀釋定容至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液備用（每1ml含槲皮素0.1mg）。

1.4.2.3 測(cè)定方法 三氯化鋁顯色法：分別取石榴皮提取液和槲皮素對(duì)照品溶液各1ml于2支10ml具塞試管中，加入1ml 1%三氯化鋁（甲醇）液，甲醇定容，搖勻，15min后用在200～500nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)進(jìn)行掃描，以不加顯色劑的溶液為空白。經(jīng)比較選擇以410nm處為最大吸收波長(zhǎng)。

2 結(jié)果

2.1 石榴皮提取物抗氧化活性 10種產(chǎn)地的石榴皮提取物，按照1.4.1項(xiàng)下抗氧化活性測(cè)定方法，分別進(jìn)行DPPH自由基清除實(shí)驗(yàn)，結(jié)果見(jiàn)附表1。由附表1可見(jiàn)，不同產(chǎn)地的石榴皮的抗氧化活性存在明顯差異（IC50：5.1±1.0～19.2±1.8μg/ml）。其中，酸石榴（云南玉溪、陜西臨潼產(chǎn)）較其他石榴皮抗氧化活性強(qiáng)，并且以云南玉溪產(chǎn)酸石榴皮抗氧化活性最好；其他產(chǎn)地的石榴皮中，新疆烏魯木齊和安徽懷遠(yuǎn)產(chǎn)石榴皮抗氧化活性最強(qiáng)，且與炮制后石榴皮飲片的抗氧化活性相當(dāng)。

2.2 石榴皮提取物總黃酮含量 10種產(chǎn)地和來(lái)源的石榴皮提取物，按照1.4.2項(xiàng)下總黃酮含量測(cè)定方法，分別進(jìn)行總黃酮含量的測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)附表2。由附表2可以看出，不同品種、產(chǎn)地的石榴皮的總黃酮含量存在明顯差異（55.18～117.04mg/g），酸石榴皮中總黃酮含量最高，并且以云南玉溪與陜產(chǎn)酸石榴皮總黃酮含量最高；其他產(chǎn)地石榴皮中，以新疆烏魯木齊和安徽懷遠(yuǎn)產(chǎn)石榴皮總黃酮含量較高。

3 討論

石榴作為藥食兩用植物，不但營(yíng)養(yǎng)豐富，而且具有較為廣泛的藥用價(jià)值，在唐代《本草拾遺》及明代《本草綱目》中均有記載：石榴具有生津化食、抗胃酸過(guò)多、軟化血管、解毒的功能[10][11]；石榴皮均有抗菌、抗病毒的作用[12]，臨床用于腹瀉、潰瘍性結(jié)腸炎等的治療。

大量研究顯示，石榴含有多種生理活性成分，具有抗氧化、清除自由基、預(yù)防心腦血管疾病等多種功能，而作為占石榴20～30%的石榴皮還沒(méi)有得到充分的利用，大部分都被廢棄，造成嚴(yán)重的資源浪費(fèi)。因此，石榴皮的合理開(kāi)發(fā)對(duì)于石榴的開(kāi)發(fā)具有重要意義。

通過(guò)本次研究可以發(fā)現(xiàn)，不同產(chǎn)地的石榴皮在總黃酮含量以及抗氧化活性存在較大差異。此外，總黃酮含量較高的石榴皮抗氧化作用也較好，兩者呈正相關(guān)性。因此，總黃酮可能是石榴皮具有抗氧化活性的物質(zhì)基礎(chǔ)。

此外，筆者比較酸石榴和甜石榴的數(shù)據(jù)時(shí)發(fā)現(xiàn)，產(chǎn)自云南玉溪和陜西臨潼的酸石榴在總黃酮和抗氧化活性遠(yuǎn)高于甜石榴。這也與當(dāng)?shù)厮崾裰饕鳛樗幱孟嗷ビ∽C。尤其是云南玉溪產(chǎn)地的酸石榴其DPPH清除率的IC50達(dá)到0.005mg/ml，接近于公認(rèn)的強(qiáng)抗氧化劑Vc（0.003mg/ml）。這也對(duì)酸石榴的進(jìn)一步開(kāi)發(fā)利用提供了理論依據(jù)。

這一研究結(jié)果對(duì)于開(kāi)發(fā)利用石榴皮提供了一定的參考依據(jù)。若利用這部分廢棄資源開(kāi)發(fā)新型黃酮制劑，尤其是抗氧化劑的開(kāi)發(fā)利用，可增加石榴的附加值，提高經(jīng)濟(jì)效益。