王明慧，郜 丹，宋曉麗，李國光，陳有君，劉 萌，李立民

(內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學生命科學學院，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010018)

褐環(huán)粘蓋牛肝菌 (Suillus luteus(L.:Fr.)Gray)、野蘑菇(Agaricus arvensis Schaeff.:Fr.)、大白 樁 菇 (Leucopaxillus giganteus(Sow.:Fr.)Sing.)均為優(yōu)良的食用菌，有很高的營養(yǎng)價值和保健作用［1-3］。但是在人工培養(yǎng)過程中菌絲生長緩慢、易老化，不利于生產(chǎn)實踐應用，所以尋找加快其生長的培養(yǎng)方法具有重要意義。研究表明某些植物類激素及細菌抗生素類化合物有促進真菌菌絲生長的作用。水楊酸的高效、低成本、無毒、無殘留等特點，使其在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)應用中顯示出廣闊的前景［4］。紀秀娥等［5］研究發(fā)現(xiàn)低濃度的水楊酸對所試3株平菇(平菇夏王、蘇云6號和9400)菌絲的生長有明顯的促進作用，而較高濃度則呈現(xiàn)抑制作用。侯集瑞等［6］研究發(fā)現(xiàn)在濃度2～10 μg/mL范圍內(nèi)的α-萘乙酸對羊肚菌菌絲體生長有促進作用，以5 μg/mL時促進作用較強;而20～40 μg/mL濃度范圍內(nèi)有一定的抑制作用。毛慧玲等［7］研究表明，α-萘乙酸對茶樹菇菌絲生長起抑制作用，且濃度越低抑制作用越強。Nuhu Alam等［8］研究了萘乙酸對平菇生長的作用。古紅梅等［9］研究發(fā)現(xiàn)在所配制100 mL培養(yǎng)基中加入1 mL(1.28×10－3)～(6.40 ×10－3)U/mL 青霉素溶液，對木耳菌絲生長具有顯著促進作用。但這些非真菌類調節(jié)劑類化合物對真菌的作用具有普遍性還是特殊性作用還屬未知，也還未見報道水楊酸、萘乙酸及青霉素對大白樁菇、褐環(huán)粘蓋牛肝菌和野蘑菇菌絲生長的影響。為了弄清這些問題，本文探究了3種真菌菌絲在一定濃度的水楊酸、萘乙酸和青霉素作用下生長情況。

1 材料與方法

1.1 材料

菌株來源 試驗菌株褐環(huán)粘蓋牛肝菌(Sp9、00牛)由內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學菌根生物技術研究室提供，野蘑菇菌株分離自山西省右玉縣的野生種，大白樁菇菌株分離自錫林郭勒盟的野生菌株。

1.2 方法

1.2.1 處理 將配置好的水楊酸、萘乙酸、青霉素溶液，用已滅菌的細菌過濾滅菌器過濾后，加入已滅菌的液體培養(yǎng)基中，配制成含有不同濃度水楊酸、萘乙酸、青霉素的培養(yǎng)基。褐環(huán)粘蓋牛肝菌采用Pach培養(yǎng)基為基礎培養(yǎng)基［10］。水楊酸在培養(yǎng)基中的濃度為 4.76 × 10－10、2.38 × 10－9、4.76×10－9、2.38 × 10－8、4.76 × 10－8、4.76 × 10－7、4.76 ×10－6、4.76 ×10－5、1.90 ×10－4g/mL;萘乙酸在培養(yǎng)基中的濃度為 0.95、1.90、2.85、3.80、4.75 mg/L;青霉素在培養(yǎng)基中的濃度為4.57×10－7、4.57 ×10－6、4.57 × 10－5、4.57 × 10－4、4.57×10－3g/mL。野蘑菇采用CYM培養(yǎng)基為基礎培養(yǎng)基［11］。水楊酸在培養(yǎng)基中的濃度為 5.6×10－9、5.6 × 10－8、5.6 × 10－7、5.6 × 10－6、5.6 ×10－5g/mL;萘乙酸在培養(yǎng)基中的濃度為0.0566、0.283、0.566、0.849、1.132 mg/L;青霉素在培養(yǎng)基中的濃度為 0.188 ×10－6、0.188 ×10－5、0.188×10－4、0.188 × 10－3、0.188 × 10－2g/mL。大白樁菇采用PDA培養(yǎng)基為基礎培養(yǎng)基［12］。水楊酸在培養(yǎng)基中的濃度為 5.6 ×10－9、5.6 ×10－8、5.6×10－7、5.6 × 10－6、5.6 × 10－5、1.07 × 10－4、1.94×10－4g/mL;萘乙酸在培養(yǎng)基中的濃度為0.0566、0.566、1.132 、1.698、2.264 mg/L;青霉素在培養(yǎng)基中的濃度為 0.188 ×10－6、0.188 ×10－5、0.188 ×10－4、0.188 × 10－3、0.188 × 10－2g/mL。以不添加藥品的基礎培養(yǎng)基為對照，每個濃度設3次重復。用6 mm打孔器打取菌塊，接于固體平板上，于25℃恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)。

1.2.2 菌落直徑和菌絲干重的測定 每2 d測定1次菌落直徑大小。以菌落中心為中心點，在平板上劃“十”字，用游標卡尺在2條線上測量長度，再取2次的平均值作為菌落大小，以統(tǒng)計菌絲的生長情況。最后1次測定直徑后，將菌落用接種刀取出，在沸水浴中煮掉菌絲上培養(yǎng)基，用吸水紙吸干，包在烘干稱量過的稱量紙中，在烘干箱中烘干至恒重，測量菌絲的干重。

2 結果與分析

2.1 水楊酸對3種真菌生長的影響

2.1.1 水楊酸對大白樁菇生長的影響 不同濃度水楊酸處理大白樁菇菌絲生長的趨勢曲線見圖1、圖2所示，水楊酸濃度在(5.6×10－9)～(5.6×10－8)g/mL范圍內(nèi)，大白樁菇菌落直徑及菌絲干重與對照相比均沒有顯著性差異;水楊酸濃度在(5.6×10－7)～(5.6×10－5)g/mL 范圍內(nèi)，隨著濃度升高，大白樁菇菌落直徑和菌絲干重增大，且大于對照。濃度為(5.6 ×10－7)、(5.6 ×10－5)g/mL的處理菌落直徑顯著高于對照，5.6×10－6g/mL濃度下菌落直徑極顯著高于對照、菌絲干重顯著高于對照，5.6×10－5g/mL濃度下菌絲干重極顯著高于對照。水楊酸濃度大于5.6×10－5g/mL條件下，隨著水楊酸濃度升高，菌落直徑和菌絲干重減小，在1.94×10－4g/mL濃度下菌絲不生長。由此得知，水楊酸濃度在(5.6×10－9)～(5.6×10－8g/mL)范圍內(nèi)對大白樁菇菌絲生長沒有影響，濃度在5.6×10－7～5.6 ×10－5g/mL 范圍內(nèi)能夠促進大白樁菇菌絲生長，濃度大于1.07×10－4g/mL則抑制大白樁菇菌絲生長。

圖1 大白樁菇菌落直徑隨水楊酸濃度的變化趨勢Fig.1 Trendes of Leucopaxillus giganteus colony diameters with the concentration of salicylic acid

圖2 大白樁菇菌絲干重隨水楊酸濃度的變化趨勢Fig.2 Trend of the dry weight of Leucopaxillus giganteus mycelium with the concentration of salicylic acid

2.1.2 水楊酸對褐環(huán)粘蓋牛肝菌生長的影響不同濃度水楊酸對褐環(huán)粘蓋牛肝菌Sp9菌落直徑的影響見圖3。培養(yǎng)基中水楊酸濃度在0～4.76×10－7g/mL范圍內(nèi)，不同處理間菌落直徑?jīng)]有顯著差異;濃度大于4.76×10－7g/mL條件下，隨著水楊酸濃度增加，Sp9菌落直徑逐漸減小，且小于對照。水楊酸濃度大于4.76×10－5g/mL條件下，與對照相比差異達到極顯著水平，1.90×10－4g/mL濃度處理菌絲完全沒有生長。由此可知，水楊酸濃度在(4.76 ×10－10)～(4.76 ×10－7)g/mL范圍內(nèi)，對Sp9菌落直徑生長無明顯作用;濃度大于4.76×10－6g/mL時抑制 Sp9菌落直徑的增長，且濃度越高抑制作用越強，致死濃度可能不大于1.90 ×10－4g/mL。

圖3 Sp9菌落直徑隨水楊酸濃度的變化趨勢Fig.3 Trendes of Sp9 colony diameters with the concentration of salicylic acid

不同濃度水楊酸對褐環(huán)粘蓋牛肝菌Sp9菌絲干重的影響情況見圖4。水楊酸濃度小于4.76×10－10g/mL的處理，菌絲干重與對照基本相同;水楊酸濃度在 (4.76×10－9) ～ (4.76×10－6)g/mL范圍內(nèi)菌絲干重均大于對照組，但是t檢驗差異都沒有達到顯著水平，4.76×10－7g/mL濃度處理菌絲干重與對照之間差值最大 (P=0.08)。水楊酸濃度大于4.76×10－7g/mL條件下，隨著濃度增加，菌絲干重減小;濃度大于4.76×10－5g/mL條件下，菌絲干重小于對照組，1.90×10－4g/mL濃度下菌絲干重增長為零。由此可見，水楊酸濃度在 (4.76×10－10) ～(4.76×10－6)g/mL范圍內(nèi)有促進Sp9菌絲重量增長的作用，濃度高于4.76×10－6g/mL時則抑制菌絲重量增長。

圖4 Sp9菌絲干重隨水楊酸濃度的變化趨勢Fig.4 Trend of the dry weight of Sp9 mycelium with the concentration of salicylic acid

2.1.3 水楊酸對野蘑菇生長的影響 實驗結果表明，經(jīng)不同濃度水楊酸處理，野蘑菇菌絲生長沒有表現(xiàn)出明顯差異，各濃度水楊酸處理下菌落直徑相差不大，而菌絲干重有所差異。野蘑菇菌絲干重隨水楊酸濃度的變化曲線如圖5所示。經(jīng)不同濃度水楊酸的處理，野蘑菇菌絲干重均低于對照，且隨水楊酸濃度的增加，菌絲干重大致呈遞減趨勢。在5.6×10－6g/mL濃度下菌絲干重與對照有顯著差異，5.6×10－5g/mL濃度下菌絲干重與對照相比有極顯著差異。由此得知，水楊酸濃度在(5.6×10－9)～(5.6×10－5)g/mL范圍內(nèi)對野蘑菇菌落直徑大小無明顯影響，但是菌絲干重降低，菌絲稀疏、徒長是菌絲干重降低的原因。

圖5 野蘑菇菌絲干重隨水楊酸濃度的變化趨勢Fig.5 Trend of the dry weight of Agaricus arvensis Schaeff mycelium with the concentration of salicylic acid

2.2 萘乙酸對3種真菌生長的影響

2.2.1 萘乙酸對大白樁菇菌絲生長的影響 不同濃度萘乙酸對大白樁菇菌絲生長的影響如圖6、圖7所示。所有濃度萘乙酸處理大白樁菇菌落直徑及菌絲干重均大于對照，在0.0566～0.566 mg/L濃度范圍內(nèi)大白樁菇菌落直徑及菌絲干重逐漸增大，在0.566～2.264 mg/L濃度范圍內(nèi)菌落直徑及菌絲干重逐漸減小，但仍大于對照。萘乙酸濃度在2.264 mg/L下菌落直徑與對照相比達到顯著水平。由此可看出，萘乙酸濃度在0.0566～2.264 mg/L范圍內(nèi)對大白樁菇菌絲生長具有一定的促進作用。

圖6 大白樁菇菌落直徑隨萘乙酸濃度變化曲線Fig.6 The curves of Leucopaxillus giganteus colony diameters with the concentration of naphthylacetic acid

圖7 大白樁菇菌絲干重隨萘乙酸濃度的變化曲線Fig.7 The curves of the dry weight of Leucopaxillus giganteus mycelium with the concentration of naphthylacetic acid

2.2.2 萘乙酸對褐環(huán)粘蓋牛肝菌及野蘑菇菌絲生長的影響 由實驗結果可知，經(jīng)不同濃度萘乙酸處理，褐環(huán)粘蓋牛肝菌Sp9、00牛及野蘑菇菌絲生長雖然有所差異，但與對照相比差異不明顯，經(jīng)t檢驗分析可知沒有達到顯著水平。所以，在所試萘乙酸濃度范圍內(nèi)對褐環(huán)粘蓋牛肝菌Sp9、00牛及野蘑菇菌絲生長沒有影響。

2.3 青霉素對3種真菌生長的影響

2.3.1 青霉素對褐環(huán)粘蓋牛肝菌菌絲生長的影響 由不同濃度青霉素處理后，褐環(huán)粘蓋牛肝菌00牛菌落直徑生長情況如圖8所示。經(jīng)不同濃度青霉素處理，褐環(huán)粘蓋牛肝菌00牛菌落直徑生長小于對照，且濃度越高菌落直徑越小。青霉素濃度在(4.57×10－6)～(4.57×10－4)g/mL范圍內(nèi)，00牛菌落直徑顯著低于對照，濃度在4.57×10－3g/mL條件下00牛菌落直徑極顯著低于對照。經(jīng)不同濃度青霉素處理后，褐環(huán)粘蓋牛肝菌Sp9菌落直徑也小于對照，在(4.57×10－6)～(4.57×10－3)g/mL范圍內(nèi)，隨著濃度的升高，Sp9菌落直徑減小。經(jīng)4.57×10－3g/mL濃度處理，Sp9菌落直徑顯著低于對照，經(jīng)4.57×10－7、4.57×10－6g/mL濃度處理，Sp9菌落直徑極顯著低于對照。由此可知，青霉素濃度在(4.57×10－7)～(4.57×10－3)g/mL 范圍內(nèi)對褐環(huán)粘蓋牛肝菌菌落直徑生長具有抑制作用，且濃度越高抑制作用越強。

圖8 00牛菌落直徑隨青霉素濃度變化趨勢Fig.8 Trendes of 00 cattle colony diameters with the concentration of penicillin

由不同濃度青霉素處理后，褐環(huán)粘蓋牛肝菌00牛菌絲干重情況如圖9所示。經(jīng)不同濃度青霉素處理，褐環(huán)粘蓋牛肝菌00牛菌絲干重小于對照，且濃度越高菌絲干重越小。青霉素濃度在4.57×10－5、4.57 ×10－4g/mL 條件下 00 牛菌絲干重與對照相比達到極顯著差異。經(jīng)不同濃度青霉素處理后，褐環(huán)粘蓋牛肝菌Sp9菌絲干重小于對照，且濃度越高菌絲干重越小。經(jīng)4.57×10－4g/mL濃度處理，Sp9菌絲干重顯著低于對照。由此看出，青霉素濃度在 4.57 ×10－7～4.57 ×10－3g/mL范圍內(nèi)對褐環(huán)粘蓋牛肝菌菌絲干重具有抑制作用。

圖9 00牛菌絲干重隨青霉素濃度變化趨勢Fig.9 Trend of the dry weight of 00 cattle mycelium with the concentration of penicillin

2.3.2 青霉素對大白樁菇及野蘑菇菌絲生長的影響 由實驗結果可知，青霉素在較低濃度(小于1.88×10－5g/mL)下對大白樁菇菌絲生長具有一定的促進作用，但促進作用不明顯;濃度大于1.88×10－5g/mL下對大白樁菇菌絲生長起抑制作用。由不同濃度青霉素處理后的野蘑菇菌絲生長之間沒有表現(xiàn)出明顯差異，所以培養(yǎng)基中青霉素濃度在(1.88×10－7)～(1.88 ×10－3)g/mL 范圍內(nèi)對野蘑菇菌絲生長沒有影響。

3 討論

經(jīng)過試驗研究發(fā)現(xiàn)，水楊酸在較低濃度下能夠促進某些真菌(如大白樁菇、褐環(huán)粘蓋牛肝菌等)菌絲生長，較高濃度下則抑制真菌菌絲生長，甚至使真菌致死。可以通過加入適量的水楊酸加快大白樁菇、褐環(huán)粘蓋牛肝菌菌絲的生長速度，且水楊酸在低濃度下不僅對人體無害，而且還有殺菌、消炎等功效。

萘乙酸在較低濃度下會促進大白樁菇菌絲的生長，但對褐環(huán)粘蓋牛肝菌、野蘑菇菌絲生長基本無影響。萘乙酸是一種植物生長調節(jié)劑，也可以促進某些真菌的生長。值得注意的是萘乙酸對人體有一定毒性，在使用時應嚴格控制用量。

青霉素在較低濃度下既能夠促進大白樁菇菌絲的生長，也能夠抑制褐環(huán)粘蓋牛肝菌菌絲生長，但對某些真菌 (如野蘑菇)無明顯影響。青霉素雖然是一類抗生素，但同時也可以促進某些真菌的生長，這其中的作用機理還有待于進一步研究。

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