昆明市醫(yī)學(xué)科學(xué)研究所，云南 昆明 650011

風(fēng)寒感冒顆粒的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

李立紀(jì)張風(fēng)雷鄒雁寧

昆明市醫(yī)學(xué)科學(xué)研究所，云南 昆明 650011

目的建立風(fēng)寒感冒顆粒的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。方法采用HPLC測(cè)定葛根素的含量，薄層色譜法TLC鑒別方中的葛根、麻黃及陳皮。結(jié)果定量方法簡(jiǎn)單、準(zhǔn)確。葛根素在0.0230～0.5750μg濃度范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，線性方程：Y=4428.2X-6.9577，R2=1；葛根素平均回收率98.76% ，RSD為1.5% (n=6)。TLC鑒別專(zhuān)屬性強(qiáng)，無(wú)干擾。結(jié)論本質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)可有效的控制風(fēng)寒感冒顆粒的質(zhì)量。

風(fēng)寒感冒顆粒；HPLC；TLC；質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

Abstract:ObjectiveTo establish the quality standard for Fenghan Ganmao Granules．MethodThe contents of puerarin were determined by HPLC．TLC was used to identify Radix Puerariae，Pericarpium Citri reticulatae Blanco and Ephedra sinica Stapf．ResultsThe linear range of puerarin was 0.0230～0.5750μg，y = 4428.2x-6.9577，R2=1．The average recovery was 98.76% ，RSD 1.5% (n=6) .The compounds were identified by TLC .ConclusionThe methods are simple．The result is accurate ， the reproducibility is good．There mothods can be used as the quality control of Fenghanganmao Granules．

Keywords:Fenghan Ganmao Granules；HPLC puerarin; TLC;quality standard

風(fēng)寒感冒顆粒由麻黃、葛根、紫蘇葉、防風(fēng)等1l味中藥組成，具有解表發(fā)汗、疏風(fēng)散寒之功效，臨床用于治療感冒身熱，頭痛，咳嗽，鼻塞，流涕之癥。是一種治療感冒常用的中成藥，風(fēng)寒感冒顆粒收載于衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)[1]，原標(biāo)準(zhǔn)項(xiàng)下只有顆粒劑通則檢查項(xiàng)，缺乏鑒別和含量測(cè)定項(xiàng)目。方劑中麻黃具有發(fā)汗散寒、宣肺平喘、利水消腫。陳皮具有理氣健脾、燥濕化痰的功效，葛根在2005版《中國(guó)藥典》中有粉葛、野葛，其葛根素含量相差很大，為了研究風(fēng)寒感冒顆粒的質(zhì)量控制，我們選用野葛，按部版要求制作了三個(gè)批次的風(fēng)寒感冒顆粒，制定了葛根、陳皮、麻黃的薄層鑒別方法及葛根素高效液相色譜定量的方法。

1 材料

1.1 儀器 高效液相色譜儀：Agilent1100系列，包括G1314A紫外檢測(cè)器、G1316A柱溫箱、G1313A自動(dòng)進(jìn)樣器、G1311A四元梯度泵、G1322A真空脫氣機(jī)、Agilent ChemStation工作站，色譜柱：Zorbax LiChrospher?100 RP-18(4.6×250mm，5-Micron)，島津2400紫外分光光度儀。

1.2 供試藥 風(fēng)寒感冒顆粒、風(fēng)寒感冒顆?？瞻钻幮栽嚇樱鹤灾?按國(guó)藥準(zhǔn)字Z43020521)，批號(hào)：20050823，20050824，20050825；高純水采用蒸餾水過(guò)MILLIPORE Simplicity 185純水機(jī)制備；甲醇(HPLC)，乙醇(AR)；陳皮苷、葛根素對(duì)照品由中國(guó)藥品生物制品檢定所購(gòu)得，批號(hào)：11072-200512，110752-200511。

2 方法

2.1 化學(xué)成分的TLC鑒定

2.1.1 葛根的薄層鑒別 取三批樣品各10g，加50ml甲醇，超聲處理30min，過(guò)濾，濾液蒸干，殘?jiān)?0ml水溶解，分別用乙酸乙酯、正丁醇提取3次，每次20ml。分別合并乙酸乙酯、正丁醇，用水洗滌3次，每次20ml，分別蒸干乙酸乙酯、正丁醇。殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為供試品溶液。另取葛根素對(duì)照品，加甲醇制成每毫升含1mg的溶液，作為對(duì)照品。展開(kāi)劑用甲醇∶水(100∶10∶13)展二次；展開(kāi)，取出，晾干，置紫外燈(365nm)下檢視，供試品乙酸乙酯部分與對(duì)照品相同位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)(見(jiàn)圖1A)。經(jīng)陰性對(duì)照試驗(yàn)及三批樣品試驗(yàn)觀察，斑點(diǎn)分離清晰,層析效果好,陰性對(duì)照無(wú)干擾，達(dá)到了薄層鑒別目的，確定本法可行。

2.1.2 陳皮的薄層鑒別 取葛根素薄層鑒別項(xiàng)下的供試品溶液的乙酸乙酯部分，另取陳皮苷對(duì)照品1mg，加吡啶制成每毫升含1mg的溶液，作為對(duì)照品。展開(kāi)劑用乙酸乙酯∶甲醇∶水(100∶17∶13)展開(kāi)至約4cm或8cm，取出，晾干。噴以三氯化鋁試液；置紫外燈(365nm)下檢視，供試品與對(duì)照品相同位置上，顯相同亮黃色的熒光斑點(diǎn)(見(jiàn)圖1B)。經(jīng)陰性對(duì)照試驗(yàn)及三批樣品試驗(yàn)觀察，斑點(diǎn)分離清晰，層析效果好，陰性對(duì)照無(wú)干擾，達(dá)到了薄層鑒別目的.

2.1.3 麻黃的薄層鑒別 取葛根素薄層鑒別項(xiàng)下的正丁醇部分供試品溶液，另取麻黃對(duì)照品藥材1g，加濃氨水8滴，再加氯仿20ml，加熱回流1h，過(guò)濾，濾液蒸干，殘?jiān)?ml甲醇充分溶解，過(guò)濾，濾液作為對(duì)照品溶液。以氯仿∶甲醇∶濃氨水試液(20∶5∶0.5)為展開(kāi)劑；展開(kāi)，取出，晾干，噴以茚三酮試液，再加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的紅色斑點(diǎn)。達(dá)到了薄層鑒別目的(見(jiàn)圖1C)，確定本法可行。

A: 顆粒中葛根素的TCL鑒定，依次為1、2、3三個(gè)批次，4為葛根藥材，5為對(duì)照品，6陰性對(duì)照

B:顆粒中陳皮苷的TCL鑒定，依次為1、2、3三個(gè)批次，4為陳皮藥材，5為對(duì)照品，6陰性對(duì)照

C:顆粒中麻黃的TCL鑒定，依次為1、2、3三個(gè)批次，4為麻黃對(duì)照藥材，5陰性對(duì)照

2.2 HPLC定量測(cè)定傷風(fēng)顆粒中的苦杏仁苷

2.2.1 含量測(cè)定方法學(xué)考察 色譜條件：色譜柱：Zorbax LiChrospher?100 RP-18(4.6×250mm，5μm)，流動(dòng)相:甲醇-水(25∶75)[2]；檢測(cè)波長(zhǎng)250nm；流速1.0ml/ min，柱溫∶25℃；進(jìn)樣量：10μl。在此色譜條件下，風(fēng)寒感冒顆粒中葛根素其他組分均能達(dá)到基線分離(見(jiàn)圖2-B),葛根素峰的理論板數(shù)大于3000，對(duì)照品、樣品、及陰性對(duì)照品HPLC圖見(jiàn)圖2(A、B、C)

2.2.2 對(duì)照品溶液的制備 精密稱(chēng)取苦杏仁對(duì)照品2.30mg，用1ml甲醇溶解，置100ml量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，即得供HPLC用的對(duì)照品溶液。

2.2.3 線性關(guān)系考察 分別精密吸取對(duì)照品溶液1、2、5、10、15、20、25μl按上述色譜條件測(cè)定峰面積。以峰面積積分值(Atm*s)為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣量(μg)為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算回歸方程，葛根素：y=4428.2-6.9577，R2=1；結(jié)果表明葛根素進(jìn)樣量在0.0230～0.5750μg范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系。

2.2.4 精密度考察 吸取葛根素對(duì)照品溶液，每次進(jìn)樣20μl，重復(fù)進(jìn)樣5次，計(jì)算RSD為0.96%。

2.2.5 樣品的測(cè)定

2.2.5.1 樣品的提取方法的考察 根據(jù)文獻(xiàn)資料，準(zhǔn)確取1g顆粒采用90%、70%、50%、30%超聲提取20min，過(guò)濾，定容，待測(cè)。90%甲醇提取物雜質(zhì)多，未達(dá)到基線分離，且提取率低；30%甲醇提取HPLC分離尚可，文獻(xiàn)報(bào)道用此法多，但很難過(guò)濾，葛根素提取不完全；50%甲醇超聲提取，葛根素提取率高。2.2.5.2 供試品溶液的制備 準(zhǔn)確稱(chēng)取0.5g的顆粒，加入15ml的50%甲醇超聲20min，濾過(guò)除去大部分不溶的淀粉，定容至25ml；尚還有細(xì)小的淀粉顆粒，再次過(guò)濾至清亮，最后用微孔濾膜(0.5μm)濾過(guò)。用于高效液相分析，供試品中葛根素與雜質(zhì)峰達(dá)到基線分離(見(jiàn)圖2B)。

2.2.5.3 重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 精密稱(chēng)取顆粒0.5g，共5份，按上述方法制成供試品溶液并進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果表明，葛根素5次測(cè)定值的RSD為1.8%。

2.2.5.4 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 取對(duì)照品溶液及供試品溶液,分別于1、2、4、6、8小時(shí)考察葛根素對(duì)照品溶液及供試品溶液穩(wěn)定性，葛根素峰面積積分值的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為1.2、2.3%，對(duì)照品溶液及供試品溶液均穩(wěn)定。

2.2.5.5 加樣回收率 分別精密稱(chēng)取6份已測(cè)知含量的樣品0.5g，研細(xì)，精密稱(chēng)取，置具塞錐形瓶中，分別精密加入葛根素對(duì)照品溶液(用50%甲醇水配制成0.023mg/mL)0.5、1.5、2ml,再加入15ml 50%甲醇，以下按供試品溶液制備方法從,“超聲處理……”起，同方法操作。計(jì)算回收率。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 葛根素回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.2.5.6 樣品測(cè)定 精密吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液各10μl ，分別注入液相色譜儀進(jìn)行測(cè)定，取2次測(cè)定的平均值作為結(jié)果，詳見(jiàn)表2。

表2 樣品測(cè)定結(jié)果

3 討論

筆者曾選擇測(cè)定防風(fēng)中的升麻素苷C22H27O11和5-O-甲基維斯阿米醇苷C22H28O10，因含量低，尚未達(dá)到基線分離，因此最終沒(méi)有作為指標(biāo)成分。在本實(shí)驗(yàn)中，樣品提取方法薄層定性檢測(cè)和HPLC略有不同，HPLC用30%的乙醇提取所得的葛根素最大。干擾很小。三個(gè)薄層均選用甲醇提取，分別用乙酸乙酯、正丁醇溶劑分配，麻黃檢測(cè)用正丁醇部分，葛根、陳皮用乙酸乙酯部分。采用本研究所制定的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)可有效的控制風(fēng)寒感冒顆粒的質(zhì)量。

[1]中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥典委員會(huì)．中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)(中藥成方制劑第1冊(cè))[S]．1998：45.

[2]中華人民共和國(guó)藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典(一部)[S].2005:223.

QualitystandardforFenghanGanmaoGranules

LI Li-ji,ZHANG Feng-lei,ZOU Yan-ning

Kunming Institute of Medical Science ，Kunming 650051，China

李立紀(jì)，主管藥師，E-mail: lilijiyn@sohu.com

R286

A

1007-8517(2014)24-0019-03

2014.10.28)