廣西壯族自治區(qū)花紅藥業(yè)股份有限公司，廣西 柳州 545007

HPLC法測(cè)定金松止癢洗液中梣酮的含量

陸暉劉春明黃秀花

廣西壯族自治區(qū)花紅藥業(yè)股份有限公司，廣西 柳州 545007

目的建立金松止癢洗液中梣酮的含量測(cè)定方法。方法采用HPLC法，以Zorbax XDB-C18為分析柱(4.6mm×150mm,5μm)，甲醇-水(60∶40)為流動(dòng)相，流速1ml·min-1，檢測(cè)波長(zhǎng)為236nm。結(jié)果梣酮在0.02～0.25μg線性關(guān)系良好(R=0.9999),平均加樣回收率為98.51%，RSD為0.91%(n=6)。結(jié)論本法準(zhǔn)確、簡(jiǎn)便、重復(fù)性好，可作為金松止癢洗液的質(zhì)量控制方法。

金松止癢洗液；梣酮；HPLC

Abstract:ObjectiveTo establish an HPLC method for determining the content of fraxinellone in Jinsongzhiyang lotion.Methodsmethanol-water(60∶40)，the flow rate was 1.0 ml·min-1，and the deterring wavelength was 236nm.ResultsThe linear range of gaillic acid was from 0.02μg to 0.25μg(R=0.9999).The average recovery rate was 98.51%,RSD was 0.91%(n=6).ConlusionThe method was accurate and simple with high repeatablility,which can be used for the qualtity control of Jinsongzhiyang lotion.

Keywords:Jinsongzhiyang lotion；fraxinellone；HPLC

金松止癢洗液為我公司獨(dú)家品種(國(guó)藥準(zhǔn)字B20020210)，由白鮮皮、千里光等9味中藥組成，具有清熱祛濕、殺蟲止癢之功效，用于治療成年女性外陰炎、濕熱帶下、外陰及皮膚瘙癢等癥。白鮮皮為方中主藥，梣酮為白鮮皮主要有效成分[1]，參考相關(guān)文獻(xiàn)[1-3]白鮮皮及其制劑的含量測(cè)定方法，本文采用HPLC法測(cè)定金松止癢洗液中的梣酮。

1 儀器和試藥

1.1 儀器 安捷倫1200高效液相色譜儀(美國(guó)Angilent公司)，含在線脫氣機(jī)、自動(dòng)進(jìn)樣器、四元梯度泵、UV檢測(cè)器；AL104型電子分析天平(梅特勒-托利多儀器有限公司)；SB4200DT型超聲波清洗機(jī)(寧波新芝生物科技股份有限公司)。

1.2 試藥 梣酮(批號(hào)：111700-200602，中國(guó)食品藥品檢定研究院)；甲醇為色譜純，其余試劑為分析純，水為娃哈哈飲用純凈水；金松止癢洗液3批(批號(hào)：20140101、20140102、20140103，廣西壯族自治區(qū)花紅藥業(yè)股份有限公司)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱：Zorbax XDB-C18色譜柱(4.6×150mm，5μm)；流動(dòng)相：甲醇-水(60∶40)；檢測(cè)波長(zhǎng)：236nm；柱溫：30℃；流速：1.0ml/min；進(jìn)樣量10μl。

2.2 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取梣酮對(duì)照品10.0mg，置于20ml量瓶，加甲醇至刻度，搖勻，作為貯備液(梣酮濃度為0.500mg/ml)，精密量取貯備液1ml，置于50ml量瓶，加甲醇至刻度，搖勻，即得梣酮濃度為0.010mg/ml的對(duì)照品溶液。

2.3 供試品溶液的制備 取本品適量，經(jīng)0.45μm微孔濾膜過(guò)濾，取續(xù)濾液，即得。

2.4 陰性對(duì)照品的制備 按規(guī)定制法制備缺白鮮皮的陰性樣品，再按“2.3”項(xiàng)下制備方法制備陰性對(duì)照品溶液。

2.5 系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn) 分別取對(duì)照品溶液、供試品溶液及陰性對(duì)照品溶液按上述色譜條件進(jìn)樣，進(jìn)樣量為10μl。在本實(shí)驗(yàn)條件下，梣酮的保留時(shí)間約為10.0min，梣酮與其相鄰峰的分離度>1.5，以梣酮計(jì)算理論塔板數(shù)不低于3000，供試品溶液與對(duì)照品溶液色譜在同一保留時(shí)間位置上有相應(yīng)色譜峰，陰性對(duì)照品色譜圖中無(wú)梣酮的色譜峰，陰性無(wú)干擾。

2.6 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 精密吸取梣酮對(duì)照品溶液(C=0.010mg/ml)2、5、10、15、20、25μl進(jìn)樣，按上述色譜條件測(cè)定色譜峰面積，以峰面積A對(duì)進(jìn)樣量(μg)進(jìn)行線性回歸計(jì)算，得線性回歸方程為：A=2.878×103X-2.936，R=0.9999。梣酮在0.02～0.25μg，與峰面積線性關(guān)系良好。

2.7 精密度試驗(yàn) 精密吸取梣酮對(duì)照品溶液(C=0.010mg/ml)10μl，連續(xù)進(jìn)樣5次測(cè)定，梣酮峰面積的RSD為0.54%，表明儀器精密度良好。

2.8 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取供試品溶液(20140101批樣品)，分別于0、4、8、24h進(jìn)樣10μl測(cè)定，梣酮峰面積值RSD為0.25%，表明供試品溶液在24h有良好的穩(wěn)定性。

2.9 重復(fù)性試驗(yàn) 對(duì)同一批金松止癢洗液(20140101批)平行制備5份供試品溶液，分別進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算其梣酮含量，其RSD為1.70%，表明該方法的重復(fù)性良好。2.10 加樣回收率試驗(yàn) 精密稱取同一批金松止癢洗液(20140101批)(含梣酮10.20μg/ml)6份，各取約50ml，每份等量加入梣酮酸貯備液(C=0.500mg/ml)1.0ml，按“2.3”項(xiàng)下進(jìn)行樣品制備并測(cè)定，計(jì)算回收率。梣酮的平均回收率為98.51%，RSD為0.91%，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果(n=6)

2.11 樣品測(cè)定 對(duì)3批金松止癢洗液進(jìn)行測(cè)定，每批平行測(cè)定兩份，測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 樣品含量測(cè)定結(jié)果(n=3)

3 討論

金松止癢洗液為純中藥制劑，由9味中藥組成，成分復(fù)雜，其對(duì)應(yīng)白鮮皮的有效成分有梣酮、黃酮醇等，經(jīng)預(yù)試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，黃酮醇含量測(cè)定雜質(zhì)干擾嚴(yán)重，色譜分離度不理想，而梣酮含量較高，其色譜峰峰型、分離度都比較理想，故選定梣酮作為該制劑的含量測(cè)定成分。在流動(dòng)相的選擇方面，嘗試過(guò)甲醇-水不同比例流動(dòng)相，經(jīng)過(guò)比較，按藥典收載的白鮮皮藥材梣酮含量測(cè)定方法甲醇-水(60∶40)，峰型尖銳，分離度理想，分析時(shí)間適宜，故予以采用。本文建立了金松止癢洗液中梣酮的含量測(cè)定方法，所建方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、可行，重現(xiàn)性好，可用于該制劑的質(zhì)量控制。

[1] 陳發(fā)奎．常用中草藥有效成分含量測(cè)定[M]．北京：人民衛(wèi)生出版社，1997：517．

[2] 原春蘭，楊得鎖．RP-HPLC測(cè)定白鮮皮中梣酮含量[J]．中國(guó)中藥雜志，2006，31(12)：992-994．

[3] 國(guó)家藥典委員會(huì)．中華人民共和國(guó)藥典(一部)[M]．北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010．

HPLCdeterminationoffraxinelloneinJinsongzhiyanglotion

LU Hui，LIU Chun-ming，HUANG Xiu-hua

Guangxi Huahong Pharmaceutical Co. Ltd., Liuzhou 545007,China

R927

A

1007-8517(2014)24-0013-02

2014.09.15)