吳艷霞

【摘要】目的探討Survivin在鼻咽癌患者中的表達(dá)情況及其相關(guān)性。方法選擇30例經(jīng)病理組織學(xué)證實為鼻咽癌的患者為研究對象, 并選擇30例鼻咽黏膜慢性炎為對照組, 采用免疫組化法測定兩組鼻黏膜標(biāo)本中Survivin表達(dá)情況及采用RT-PCR法測定兩組Survivin的表達(dá)量, 并分析彼此間的相關(guān)性。結(jié)果Survivin的相對表達(dá)量：對照組(0.07±0.04)、Ⅰ期鼻咽癌(1.14±0.21)、Ⅱ期鼻咽癌(1.37±0.27)、Ⅲ期鼻咽癌(1.59±0.34), Ⅳ期鼻咽癌(1.82±0.41), 兩兩相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。鼻咽癌組織中Survivin陽性表達(dá)率顯著高于對照組, 差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論Survivin可能參與到鼻咽癌腫瘤的發(fā)生及發(fā)展過程中, 通過測定Survivin表達(dá)強度對預(yù)測鼻咽癌病情有重要的意義。

【關(guān)鍵詞】Survivin；鼻咽癌細(xì)胞；淋巴轉(zhuǎn)移鼻咽癌(NPC)是指鼻咽腔側(cè)壁及頂部生長的惡性腫瘤, 目前普遍認(rèn)為NPC發(fā)病過程復(fù)雜, 其發(fā)病過程與環(huán)境、EB病毒、飲食、遺傳等因素有關(guān)［1, 2］。近年研究指出, 基因表達(dá)異常與腫瘤的發(fā)病機制具有密切的關(guān)系。對Survivin與鼻咽癌細(xì)胞增殖中的作用機制進(jìn)行研究, 旨在為同類疾病的治療提供參考指導(dǎo), 現(xiàn)報告如下。

1資料與方法

1. 1一般資料選擇本院2010年1月~2011年12月收治的鼻咽癌患者30例為研究對象, 患者經(jīng)病理組織學(xué)及影像學(xué)診斷證實為鼻咽癌, 所有患者均行手術(shù)治療且術(shù)前沒接受放療、化療。男18例, 女12例, 年齡29~76歲, 平均年齡(49.6±3.8)歲。患者腫瘤大小0.8~5.9 cm, 平均(2.8±1.4)cm?；颊卟±韺W(xué)分級：G1級10例, G2級12例, G3級8例。患者FIGO(病理組織學(xué))臨床分期：Ⅰ期9例, Ⅱ期7例, Ⅲ期8例, Ⅳ期6例, 淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移12例?；颊卟±矸旨壖芭R床分期均符合2000年WHO對鼻咽癌的分級標(biāo)準(zhǔn)。選擇同期在行身體檢查的鼻咽黏膜慢性炎30例為對照組, 男17例, 女13例, 年齡21~78歲, 平均年齡(48.8±4.2)歲。兩組一般資料比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05), 具有可比性。

1. 2方法①免疫組化法：采用免疫組化法檢測兩組鼻黏膜組織中Survivin的表達(dá)。Survivin鼠抗人多克隆抗體購于北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。Survivin鼠抗體多克隆抗為即用型。Survivi采用EDTA熱修復(fù)處理20 min, 并采用PBS緩沖液對樣品進(jìn)行沖洗, 隨后依次在試樣板中加入一抗、二抗以及DAB進(jìn)行顯色反應(yīng)。經(jīng)蘇木精復(fù)染后采用乙醇對樣本脫水并制成中性樹膠封片, 并與已知的陽性切片進(jìn)行對比, 陰性對照則采用PBS緩沖液替代一抗的樣本進(jìn)行參照。②PCR方法：采用RT-PCR(購于日本TAKAPA公司)測定各組Survivin含量, 設(shè)計針對人Survivin的PCR的探針序列以及熒光檢測引物, 選擇人GAPDH(由美國BD公司提供)作為測試的內(nèi)參物, 并采用Trizol試劑盒(美國Invitrogen公司)提取RNA, 熒光定量PCR實驗嚴(yán)格按照試劑盒操作說明進(jìn)行。Survivin相對表達(dá)量=目的基因/內(nèi)參基因。

1. 3免疫組化結(jié)果的判斷①Survivin陽性表達(dá)為棕黃色顆粒見于細(xì)胞核內(nèi), Survivin陽性表達(dá)為棕黃色顆粒見于細(xì)胞質(zhì)及細(xì)胞核內(nèi)。②在倍數(shù)為100的顯微鏡下觀察細(xì)胞著色情況, 根據(jù)著色程度由輕至重可分別記為0、1、2、3。隨機選取5個視野點, 采用倍數(shù)為400的顯微鏡分別對5個視野進(jìn)行觀察, 每個視野進(jìn)行細(xì)胞計數(shù), 并計算細(xì)胞的陽性百分比(以500個細(xì)胞作為一組計算單位), 細(xì)胞陽性百分率：1為<10%, 2為10%~50%, 3為>50%。積分計算：①與②計算所得的分值相乘。積分為0分：陰性“-”, 1~3分：弱陽性“+”, 4~6分：中度陽性“++”, 7~9分：強陽性“+++”。

1. 4統(tǒng)計學(xué)方法使用SPSS17.0對各項資料進(jìn)行統(tǒng)計分析, 計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差( x-±s)表示, 采用t檢驗, 計數(shù)資料采用χ2檢驗。以P<0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2結(jié)果

2. 1Survivin的相對表達(dá)量對照組(0.07±0.04)、Ⅰ期鼻咽癌(1.14±0.21)、Ⅱ期鼻咽癌(1.37±0.27)、Ⅲ期鼻咽癌(1.59±0.34), Ⅳ期鼻咽癌(1.82±0.41), 兩兩相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05), 詳見表1。

表1Survivin的相對表達(dá)量( x-±s)

項目 例數(shù) Survivin含量

對照組 30 0.07±0.04

Ⅰ期 9 1.14±0.21a

Ⅱ期 7 1.37±0.27ab

Ⅲ期 8 1.59±0.34abc

Ⅳ期 6 1.82±0.4abcd

注：與對照組相比, aP<0.05；與Ⅰ期相比, bP<0.05；與Ⅱ期相比, cP<0.05；與Ⅲ期相比, dP<0.05

2. 2Survivin在鼻咽癌中的陽性表達(dá)率分析鼻咽癌組織中Survivin陽性表達(dá)率顯著高于對照組, 差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05), 詳見表2。

3討論

Survivin是凋亡抑制蛋白家族中作用最強的成員, 其與IAP家族中的其他蛋白有所不同, Survivin不僅具有參與細(xì)胞有絲分裂, 調(diào)節(jié)細(xì)胞質(zhì)分裂的作用, 同時還能抑制細(xì)胞凋亡。Survivin的表達(dá)水平受細(xì)胞有絲分裂水平的影響, 其可與有絲分裂中的紡錘體微管特異性結(jié)合, 對維持細(xì)胞有絲分裂具有重要的作用。相關(guān)研究指出, 通過干預(yù)細(xì)胞有絲分裂過程中Survivin的表達(dá)可導(dǎo)致細(xì)胞在G2期凋亡。陳吉添等［3］研究指出, Survivin在正常生長的胚胎細(xì)胞中具有較高的表達(dá)水平, 而在成人終末分化的睪丸、胎盤中的表達(dá)水平則非常低, 甚至不表達(dá)。但在一些惡性腫瘤組織如腸癌、胃癌、子宮內(nèi)膜癌中均具有較高的表達(dá)能力。本研究中對照組(0.07±0.04)、Ⅰ期鼻咽癌(1.14±0.21)、Ⅱ期鼻咽癌(1.37±0.27)、Ⅲ期鼻咽癌(1.59±0.34), Ⅳ期鼻咽癌(1.82±0.41), 兩兩相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。免疫熒光分析顯示, 鼻咽癌組織中Survivin陽性表達(dá)率顯著高于對照組, 差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05), 無論是定性還是定量分析均顯示, Survivin在鼻咽癌中均有較高的表達(dá)水平, 研究結(jié)果與舒禹先等［4］一致。Survivin在鼻咽癌中隨著患者臨床分期的增加, 其表達(dá)水平顯著增加, 從而提示Survivin與鼻咽癌病情進(jìn)展關(guān)系密切。臨床可通過測定鼻咽癌患者鼻黏膜組織中Survivin表達(dá)水平判斷患者病情進(jìn)展的情況, 從而為臨床治療鼻咽癌提供指導(dǎo)。

參考文獻(xiàn)

［1］ 蔡俊宏, 符生苗, 涂志華, 等.鼻咽癌Survivin基因表達(dá)與預(yù)后關(guān)系的研究.海南醫(yī)學(xué), 2011(18):1-3.

［2］ 伍紅良, 凌月福, 黃嵐珍, 等.EGCG 對鼻咽癌CNE-2細(xì)胞增殖、凋亡及Survivin、VEGF表達(dá)的影響.實用醫(yī)學(xué)雜志, 2011, 27(7):1138-1141.

［3］ 陳吉添, 陳瑜, 吳薇紫, 等. Livin與Survivin在鼻咽癌組織中的表達(dá)及臨床意義.實用癌癥雜志, 2012, 27(1):21-23, 29.

［4］ 舒禹先, 鄔蒙. Survivin蛋白在鼻咽癌組織中表達(dá)及其臨床意義.實用癌癥雜志, 2012, 27(4):362-365.

［收稿日期：2014-03-17］

endprint