黃 暉 黃傳生 楊文萍 黃 慧

彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤(diffuse large B cell lymphoma，DLBCL)是成人最常見的非霍奇金淋巴瘤[1]。有研究表明[2]，兒童和成人 DLBCL 在免疫表型及分子遺傳學(xué)特征方面有一定的差異。因此，我們收集本地區(qū)11例兒童DLBCL，隨機選取18例成人DLBCL作為對照組，觀察CD5、CD10、bcl-6、MUM1和bcl-2蛋白在兒童DLBCL和成人DLBCL中的表達(dá)差異。應(yīng)用熒光原位雜交技術(shù)檢測bcl-6基因重排情況。

1 材料與方法

1.1 病例來源

18例成人DLBCL組織來源于江西省腫瘤醫(yī)院病理科，11例兒童DLBCL組織來源于江西省兒童醫(yī)院[3-4]和江西省腫瘤醫(yī)院病理科。標(biāo)本均經(jīng)4%中性福爾馬林液固定、石蠟包埋、4 μm厚切片、HE染色、光鏡觀察。由兩位經(jīng)驗豐富的病理醫(yī)生參照WHO(2008)分類標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行診斷分類。

1.2 免疫組織化學(xué)SP法染色

抗體來源于北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司?？贵w和克隆號為CD5(sp19)、CD10(56C6)、bcl-2(100)、bcl-6(GI191E/A8)、MUM1(MUM1P)。同時設(shè)陰性及陽性對照，實驗室操作按照說明書進(jìn)行，DAB顯色。陽性部位：CD5表達(dá)于細(xì)胞膜、CD10表達(dá)于細(xì)胞膜、bcl-2表達(dá)于細(xì)胞質(zhì)、bcl-6表達(dá)于細(xì)胞核和MUM1表達(dá)于細(xì)胞核。30%以上的腫瘤細(xì)胞顯示棕黃色則為陽性表達(dá)。根據(jù)CD10、bcl-6、MUM1的表達(dá)水平將DLBCL分為生發(fā)中心B細(xì)胞(GCB)型和非生發(fā)中心B細(xì)胞(non-GCB)型[5]。

1.3 熒光原位雜交(FISH)

bcl-6雙色分離重排探針購置北京金菩嘉醫(yī)療科技有限公司。實驗室操作和結(jié)果判斷參照文獻(xiàn)[6]。

1.4 統(tǒng)計學(xué)分析

應(yīng)用SPSS 17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析，計數(shù)資料采用χ2檢驗，不滿足χ2檢驗條件時采用Fisher精確概率法。P<0.05有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 臨床資料

所選29例DLBCL均為非特指DLBCL。11例兒童DLBCL，男性10例，女性1例，平均年齡9.5歲。18例成人DLBCL，男性12例，女性6例，平均年齡45歲。

2.2 免疫組化和FISH結(jié)果(表1)

11例兒童DLBCL 中CD5、CD10、bcl-6、MUM1和bcl-2陽性表達(dá)率分別為18.2%(2例)、45.5%(5例)、54.5%(6例)、36.4%(4例)和63.6%(7例)，GCB型6例(54.5%)、non-GCB型5例(45.5%)，bcl-6基因斷裂1例(10%)、擴增2例(20%)；18例成人DLBCL中CD5、CD10、bcl-6、MUM1和bcl-2 陽性表達(dá)率分別為16.7%(3例)、0(0例)、44.4%(8例)、83.3%(15例)和55.6%(10例)，GCB型1例(5.6%)、non-GCB型17例(94.4%)，bcl-6基因斷裂5例(27.8%)。兒童GCB型和non-GCB型DLBCL中bcl-2蛋白表達(dá)比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P=1.000)。兒童DLBCL和成人DLBCL各預(yù)后蛋白表達(dá)和bcl-6基因重排情況比較見表2。

表1 29例DLBCL免疫組化和FISH結(jié)果

注：1～11號為兒童DLBCL，12～29為成人DLBCL。

3 討論

DLBCL是一異質(zhì)性腫瘤，其長期緩解率為50%左右，且不同的亞型有著不同的預(yù)后。第四版WHO造血與淋巴組織腫瘤腫瘤分類中，將非特指DLBCL分為3個免疫亞型：GCB型、non-GCB型和CD5陽性DLBCL。多數(shù)文獻(xiàn)報道[1，6-7]，CD5、MUM1和bcl-2陽性表達(dá)與不良預(yù)后有關(guān)，而表達(dá)CD10和bcl-6者預(yù)后較好。

表2 兒童DLBCL和成人DLBCL各預(yù)后蛋白表達(dá)和
bcl-6基因重排情況比較/例

參數(shù) 例數(shù)兒童DLBCL成人DLBCLP值免疫分型 GCB型76 1 non-GCB型225170.006CD10表達(dá) 陽性550 陰性246180.004bcl-6表達(dá) 陽性1468 陰性155100.710MUM1表達(dá) 陽性19415 陰性10730.017CD44表達(dá) 陽性23815 陰性6330.646bcl-2表達(dá) 陽性17710 陰性12480.717bcl-6基因 斷裂725 正常196130.628

CD10和bcl-6可作為生發(fā)中心細(xì)胞起源腫瘤的標(biāo)記物[8]。MUM1為生發(fā)中心晚期和生發(fā)中心后B細(xì)胞標(biāo)記物[9]。根據(jù)CD10、bcl-6和MUM1的表達(dá)情況，DLBCL分為GCB型和non-GCB型，前者預(yù)后較好[5]。李義等[6]報道，bcl-6蛋白陽性表達(dá)者比陰性者預(yù)后好。國外文獻(xiàn)報道[7，10-11]，GCB型DLBCL為40%左右，約60%為non-GCB型。國內(nèi)文獻(xiàn)報道不一[6，12-14]，GCB型DLBCL比例為18%～48%，這是否提示國內(nèi)不同地區(qū)其發(fā)病機制有著不同。我們隨機選取的18例成人DLBCL，僅有1例為GCB型，其CD10和MUM1陰性，bcl-6陽性，bcl-2陰性，bcl-6基因正常。這是否提示本地區(qū)GCB型DLBCL發(fā)病率比國內(nèi)其他地區(qū)低，其機制如何，有待今后進(jìn)一步研究。此外，其原因也可能和所選病例出現(xiàn)蛋白丟失有關(guān)。

兒童DLBCL與成人不同，兒童DLBCL中GCB型為60%～85%[2，15-16]，本組兒童DLBCL病例中GCB型6例(54.5%)、non-GCB型5例(45.5%)，與文獻(xiàn)報道的基本一致。從免疫分型來看，兒童DLBCL以GCB型為主，而成人則以non-GCB型多見。這也可以解釋兒童DLBCL預(yù)后比成人好，但是否還存在其他影響因素，有待積累更多病例后進(jìn)行研究。

bcl-2蛋白陽性表達(dá)常常是由于bcl-2/IgH基因易位或bcl-2基因擴增引起的[12]。bcl-2蛋白陽性表達(dá)在GCB型與預(yù)后無關(guān)，而在non-GCB型中陽性表達(dá)則是影響預(yù)后的不良因素[7，13]。雖然兒童DLBCL中bcl-2蛋白的表達(dá)率可高達(dá)63%，但兒童DLBCL則很少出現(xiàn)bcl-2基因重排或擴增[2，15-18]。bcl-2蛋白在成人和兒童DLBCL中表達(dá)率分別為55.6%(10例)和63.6%(7例)。與文獻(xiàn)報道的一致。兒童DLBCL中bcl-2蛋白表達(dá)與成人DLBCL比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.717)。bcl-2蛋白在兒童GCB型和non-GCB型DLBCL中表達(dá)比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P=1.000)。這表明在兒童DLBCL中存在其他機制引起bcl-2蛋白的表達(dá)，并且bcl-2蛋白陽性表達(dá)可能不是其預(yù)后不良指標(biāo)。

CD5陽性DLBCL發(fā)病率約為10%，其預(yù)后比CD5陰性者差，且CD5陽性DLBCL加用利妥昔單抗并不能提高生存率[1，19-20]。本組29例DLBCL中，CD5陽性2例，17.2%。

約30%DLBCL發(fā)生bcl-6基因改變，幾乎都發(fā)生于成人DLBCL，兒童罕見[1，6，18]。雖然bcl-6蛋白陽性者預(yù)后較好，bcl-6基因斷裂者總體生存率低于正常者，但bcl-6基因重排與bcl-6蛋白表達(dá)不存在相關(guān)性，且bcl-6蛋白與bcl-6基因重排無關(guān)[6]。本組5例成人DLBCL存在bcl-6基因斷裂，3例bcl-6蛋白陰性；6例bcl-6蛋白陽性者無bcl-6基因斷裂。兒童DLBCL存在1例bcl-6基因斷裂，2例bcl-6基因擴增，與文獻(xiàn)報道不一致。是否提示為本地兒童DLBCL所特有的分子遺傳學(xué)改變，有待積累更多病例后進(jìn)行闡述。

綜述所述，結(jié)合文獻(xiàn)報道[21]，目前仍有必要對DLBCL進(jìn)行免疫分型和bcl-2蛋白的檢測，為指導(dǎo)臨床治療和預(yù)后判斷提供依據(jù)。

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