黃 佳 潘 玫

葡萄胎是種良性疾病，但10%～20%可以發(fā)生惡變，成為侵蝕性葡萄胎或絨癌[1]。雖然妊娠滋養(yǎng)細(xì)胞腫瘤對(duì)化療敏感，治療效果較好，但現(xiàn)在發(fā)現(xiàn)耐藥以及復(fù)發(fā)的患者治療效果較差，這也是現(xiàn)今治療妊娠滋養(yǎng)細(xì)胞腫瘤的難點(diǎn)。RECK(reversion-inducing cysteine rich protein with Kazal motifs,RECK)，即伴有Kazal域的富含半胱氨酸的逆轉(zhuǎn)誘導(dǎo)蛋白，被認(rèn)為是新發(fā)現(xiàn)的1種抑癌基因，廣泛存在于正常組織中，而在腫瘤組織中的表達(dá)低。我們通過(guò)逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)方法檢測(cè)RECK mRNA的表達(dá)情況，探討RECK在葡萄胎惡變中所起的作用，以期望找到葡萄胎惡變的敏感標(biāo)記物。

1 資料與方法

1.1 標(biāo)本來(lái)源

標(biāo)本來(lái)自江西省婦幼保健院2003年1月-2008年1月因葡萄胎住院首次清宮標(biāo)本48例，患者年齡20～43歲，其中通過(guò)隨診過(guò)程中確診為惡性葡萄胎24例、未惡變葡萄胎24例。收集同期在本院門診行人工流產(chǎn)術(shù)的健康婦女早孕絨毛組織標(biāo)本20例，年齡20～40歲。

1.2 實(shí)驗(yàn)步聚

惡變的葡萄胎組織，未惡變的葡萄胎組織及正常早孕絨毛組織均在液氮中保存。取0.5 g 組織，應(yīng)用TAKARA 公司的RT-PCR 試劑盒。25 μl 體系：H2O 16.5 μl；10× buffer 2.5 μl；MgCl23 μl；dNTP 0.5 μl；引物(+) 0.5 μl；引物(-) 0.5 μl；Taq 酶 0.5 μl；cDNA 1 μl。反應(yīng)條件：94 ℃,30 s;57 ℃,30 s;72 ℃,30 s。共30個(gè)循環(huán)。引物設(shè)計(jì)見(jiàn)參考文獻(xiàn)[1]及國(guó)際互聯(lián)網(wǎng)cDNA 文庫(kù)。RECK 基因(477 bp)： 上游引物：5'-CCTCAGTGAGCACAGTTCAGA-3'，下游引物：5'-GCAGCACACACACTGCTGTA-3'，管家基因GAPDH(346 bp)用于內(nèi)對(duì)照。2%瓊脂糖凝膠電泳后，采用生物圖像分析儀檢測(cè)密度。將目的基因的亮度值與同一標(biāo)本的管家基因GAPDH 的亮度值作比，求出其相對(duì)表達(dá)量。比較惡變的葡萄胎組織，未惡變的葡萄組織及正常早孕絨毛組織目的基因相對(duì)表達(dá)量有無(wú)區(qū)別。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

RECK mRNA 在惡變葡萄胎組織中的表達(dá)水平(0.326±0.031)明顯低于未惡變葡萄胎組織中的表達(dá)水平(0.436±0.053)和正常早孕絨毛組織中的表達(dá)水平(0.453±0.025)(P<0.01)，而在未惡變葡萄胎組織和正常絨毛組織中RCEK mRNA的表達(dá)水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

3 討論

在正常妊娠早期，滋養(yǎng)細(xì)胞侵襲母體的特征與惡性腫瘤細(xì)胞非常類似，但有一個(gè)自限性。而變成腫瘤的滋養(yǎng)細(xì)胞卻在母體內(nèi)不斷造成破壞,甚至導(dǎo)致母體死亡。研究表明,RECK的抑癌作用主要是通過(guò)抑制腫瘤血管生成，并且與抑制基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)家族密切相關(guān)[2]。RECK在早孕胎盤的表達(dá)最低，足月妊娠時(shí)表達(dá)最高，這與妊娠過(guò)程中滋養(yǎng)細(xì)胞侵蝕能力正好相反，說(shuō)明RECK可能起了抑制滋養(yǎng)細(xì)胞侵蝕能力的作用。此外還有研究表明RECK過(guò)表達(dá),可明顯減少早孕絨毛外滋養(yǎng)細(xì)胞侵襲能力[3]。我們先前的研究也表明在葡萄胎中RECK與MMP的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)[4]。但是僅依靠定性的方式只能提示差異，只能說(shuō)明葡萄胎惡變的可能。因此本研究開(kāi)始定量測(cè)定RECKmRNA的表達(dá)水平，發(fā)現(xiàn)在惡性葡萄胎組織中的表達(dá)水平明顯低于未惡變葡萄胎組織，與我們先前的研究相一致。所以我們推測(cè)在葡萄胎的惡變過(guò)程中，RECK表達(dá)減少起到了一定的作用。當(dāng)然我們還需要更多的樣本數(shù)量以及更精確的定量方法，以便找出1個(gè)定量參考范圍應(yīng)用于臨床診斷。

[1] 豐有吉，沈 鏗，馬 丁，等.婦產(chǎn)科學(xué)(供八年制及七年制臨床醫(yī)學(xué)等專業(yè)用)〔M〕.北京：人民衛(wèi)生出版社,2005：351-355.

[2] 郭君紅,鄒 麗.調(diào)控RECK 基因表達(dá)對(duì)早孕絨毛外滋養(yǎng)細(xì)胞MMP-2 活化及細(xì)胞侵襲力的影響〔J〕.華中科技大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版),2007,36(4):495-499.

[3] Oh J,Takahashi R,Kondo S,et al.The membrane-anchored MMP inhibitor RECK is a key regulator of extracellular matrix integrity and angiogenesis〔J〕.Cell，2001,107(6):789-800.

[4] 黃 佳，潘 玫.RECK、MMP-2在葡萄胎組織中的表達(dá)及其意義〔J〕.南昌大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版)，2010,50(5)：20-22.