鄧敏 趙茜 馬建中

(上海市第二人民醫(yī)院病理科，上海 200011)

近年來，我國甲狀腺癌的發(fā)病率呈逐漸上升趨勢(shì)。甲狀腺癌中最主要的類型是甲狀腺乳頭狀癌。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是甲狀腺乳頭狀癌復(fù)發(fā)的重要因素并與患者預(yù)后相關(guān)。本研究檢測(cè)了細(xì)胞周期調(diào)控因子p27、細(xì)胞周期蛋白D1(cyclin D1)在甲狀腺乳頭狀癌中的表達(dá)并分析了它們與乳頭狀癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系，旨在了解它們?cè)诩谞钕偃轭^狀癌發(fā)生發(fā)展中的作用，為甲狀腺乳頭狀癌的診斷和預(yù)后判斷提供依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集我院2000—2013年手術(shù)切除的甲狀腺良性病變60例(其中男性10例，女性50例；年齡20～72歲；包括結(jié)節(jié)性甲狀腺腫30例，甲狀腺腺瘤30例)和甲狀腺乳頭狀癌92例(其中男性13例，女性79例；年齡23～75歲；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者42例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者50例)。診斷均按照2004年世界衛(wèi)生組織內(nèi)分泌腫瘤分類標(biāo)準(zhǔn)。

1.2 方法 免疫組織化學(xué)試劑、p27抗體、cyclin D1抗體購于上海長島生物技術(shù)公司，二氨基聯(lián)苯胺(3,3′-diaminobenzidine，DAB)顯色劑購于基因科技(上海)有限公司。采用免疫組織化學(xué)EnVision兩步法檢測(cè)組織中P27和cyclin D2的表達(dá)，DAB顯色，蘇木精復(fù)染。用已知陽性切片作為陽性對(duì)照，用磷酸鹽緩沖液(phosphate-buffered saline，PBS)代替一抗作陰性對(duì)照。

1.3 結(jié)果判斷 p27、cyclin D1以核著色為陽性，采用半定量法對(duì)細(xì)胞核著色強(qiáng)度和陽性細(xì)胞率進(jìn)行評(píng)分。細(xì)胞核著色強(qiáng)度評(píng)分：無著色0分；淡黃色1分；棕黃色2分；棕褐色3分。計(jì)數(shù)400個(gè)細(xì)胞，按陽性細(xì)胞所占比例評(píng)分，<5%為0分；5%～25%為1分；26%～50%為2分；51%～75%為3分；>75%為4分。2項(xiàng)評(píng)分相加：<2分為陰性(-)；2～3分為弱陽性(+)；4～5分為中度陽性(++)；6～7分為強(qiáng)陽性(+++)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)數(shù)資料組間比較采用χ2檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

在60例甲狀腺良性病變中，p27陽性表達(dá)者55例，多為中到強(qiáng)陽性，陽性表達(dá)率為91.7%；在92例甲狀腺乳頭狀癌中，p27陽性表達(dá)者57例，陽性表達(dá)率為62.0%；p27在甲狀腺乳頭狀癌和良性病變中的表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。在50例無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的甲狀腺乳頭狀癌中，p27陽性表達(dá)者38例，陽性表達(dá)率為76.0%；在42例有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的甲狀腺乳頭狀癌中，p27陽性表達(dá)者19例，陽性表達(dá)率為45.2%；p27在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的甲狀腺乳頭狀癌中的表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。見表1。

在60例甲狀腺良性病變中，cyclin D1陽性表達(dá)者17例，以弱陽性為主，陽性表達(dá)率為28.3%；在92例甲狀腺乳頭狀癌中，cyclin D1陽性表達(dá)者58例，多為中到強(qiáng)陽性，陽性表達(dá)率為63.0%；cyclin D1在甲狀腺乳頭狀癌和良性病變中的表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。在50例無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的甲狀腺乳頭狀癌中，cyclin D1陽性表達(dá)者25例，陽性表達(dá)率為50.0%；在42例有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的甲狀腺乳頭狀癌中，cyclin D1陽性表達(dá)者33例，陽性表達(dá)率為78.6%；cyclin D1在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的甲狀腺乳頭狀癌中的表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。見表1。有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的甲狀腺乳頭狀癌中p27和cyclin D1的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(r=-0.46，P<0.01)。

表1 p27、cyclin D1在甲狀腺病變中的表達(dá)情況 (n)

3 討 論

現(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)為，腫瘤是一種細(xì)胞周期性疾病，細(xì)胞周期調(diào)節(jié)失控使細(xì)胞無限制增殖，導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生。細(xì)胞周期有G1/S和G2/M兩個(gè)關(guān)鍵限制點(diǎn)，主要由細(xì)胞周期蛋白(cyclins)、細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶(CDKs)、細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶抑制物(CDKIs)進(jìn)行調(diào)控。cyclin D1是細(xì)胞周期的正調(diào)控因子，其通過使Rb蛋白磷酸化，促使細(xì)胞由G1期進(jìn)入S期，引起細(xì)胞增殖。p27是細(xì)胞周期的負(fù)調(diào)控因子，可抑制cyclin D1-CDK激酶活性，阻止細(xì)胞由G1期進(jìn)入S期，從而抑制細(xì)胞的增殖。

cyclin D1基因是1991年Motokura等[1]在甲狀旁腺腺瘤的研究中發(fā)現(xiàn)的，該基因定位于11q13，全長120 kb，有5個(gè)外顯子，4個(gè)內(nèi)含子，編碼含295個(gè)氨基酸殘基的蛋白質(zhì)。研究[2]表明，cyclin D1過表達(dá)可縮短細(xì)胞周期的G1期，促進(jìn)細(xì)胞進(jìn)入S期，導(dǎo)致細(xì)胞過度增殖而發(fā)生腫瘤。cyclin D1在許多惡性腫瘤中均異常高表達(dá)。Yu等[3]研究發(fā)現(xiàn)，乳腺癌、非小細(xì)胞肺癌等腫瘤中cyclin D1的過表達(dá)與腫瘤的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)。Khoo等[4]發(fā)現(xiàn)，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的甲狀腺乳頭狀癌中cyclin D1的陽性表達(dá)率明顯高于對(duì)照組。在本研究中，cyclin D1在甲狀腺乳頭狀癌中的陽性表達(dá)率明顯高于甲狀腺良性病變，而且有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的甲狀腺乳頭狀癌中cyclin D1陽性表達(dá)率高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的甲狀腺乳頭狀癌，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。上述結(jié)果說明，cyclin D1與甲狀腺乳頭狀癌的發(fā)生有關(guān)，而且與腫瘤的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和預(yù)后有關(guān)。

p27基因是在1994年由Polyak等[5]發(fā)現(xiàn)，該基因定位于12p13；其編碼的蛋白質(zhì)含有198個(gè)氨基酸殘基，分子量為27 kD，屬于Cip/Kip蛋白家族成員，又稱為激酶抑制蛋白1，是CDKIs家族的成員。p27是一種抑癌基因，可抑制CDKs復(fù)合物的活性，阻斷Rb磷酸化，阻止細(xì)胞通過G1/S期轉(zhuǎn)換，抑制細(xì)胞分裂增殖，促進(jìn)細(xì)胞凋亡。P27蛋白水平的降低可導(dǎo)致細(xì)胞持續(xù)增殖，促進(jìn)腫瘤的發(fā)生。p27還具有增強(qiáng)細(xì)胞間黏附的功能，p27的減少與E-cadherin的下調(diào)引起的細(xì)胞間接觸抑制有關(guān)[6]。研究[7]表明，在許多腫瘤中都有p27低表達(dá)。本研究顯示，p27在甲狀腺乳頭狀癌中的陽性表達(dá)率低于良性病變，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的甲狀腺乳頭狀癌中p27陽性表達(dá)率低于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的甲狀腺乳頭狀癌；差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；這提示p27水平的下降可能促進(jìn)了甲狀腺乳頭狀癌的發(fā)生、發(fā)展，p27可作為甲狀腺癌診斷和預(yù)后的參考指標(biāo)。這與Ito等[8]的研究一致，該研究發(fā)現(xiàn)p27的低表達(dá)與甲狀腺乳頭狀癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移有關(guān)，認(rèn)為p27是判斷甲狀腺乳頭狀癌惡性程度及預(yù)后的重要指標(biāo)。

Khoo等[4]對(duì)125例甲狀腺乳頭狀癌的研究發(fā)現(xiàn)，p27低表達(dá)和cyclin D1高表達(dá)對(duì)甲狀腺乳頭狀癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有很好的預(yù)測(cè)價(jià)值。本研究也顯示，p27低表達(dá)和cyclin D1高表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移顯著相關(guān)；p27和cyclin D1在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的甲狀腺乳頭狀癌中的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)。然而，p27和cyclin D1在甲狀腺乳頭狀癌的發(fā)生發(fā)展中的作用機(jī)制尚不清楚，有待進(jìn)一步研究。

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