郭麗

FQ-PCR法與染色涂片法檢測腦脊液結(jié)核桿菌的對(duì)照性分析

郭麗

目的 對(duì)比熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)法(FQ-PCR)及染色涂片法在腦脊液結(jié)核桿菌檢測中的應(yīng)用價(jià)值。方法 結(jié)核性腦膜炎(TBM)疑似患者320例, 臨床醫(yī)師在無菌操作下抽取患者腦脊液送至實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行FQ-PCR法與染色涂片法檢測, 觀察檢測結(jié)果。結(jié)果 320例TBM疑似患者共確診45例。FQ-PCR法檢測的陽性率為15.63%, 明顯高于染色涂片法的6.25%, 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；染色涂片法檢測的特異度為92.31%、靈敏度為44.44%, 均低于FQ-PCR方法的98.21%、90.91%, 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。結(jié)論 相較于染色涂片法, FQ-PCR法具有更高的特異度及靈敏度, 且操作快速、簡便, 在腦脊液結(jié)核桿菌的檢測中具有重要的應(yīng)用價(jià)值。

熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)法；染色涂片法；結(jié)核性腦膜炎；腦脊液結(jié)核桿菌

結(jié)核性腦膜炎(TBM)是由結(jié)核桿菌導(dǎo)致的脊膜與腦膜的非化膿性炎性疾病。近年來, 隨著吸毒、AIDS、酗酒、免疫抑制劑使用率的不斷提高, 致使TBM的發(fā)生率迅速遞增。TBM是結(jié)核病中死亡率最高的類型之一［1］, 早發(fā)現(xiàn)、早治療對(duì)TBM患者的療效及預(yù)后十分重要。臨床發(fā)現(xiàn), TBM的臨床表現(xiàn)及腦脊液(CSF)測定均不具備典型特征, 這給確診帶來了極大的困難。本研究對(duì)320例疑似TBM的患者分別應(yīng)用FQ-PCR及染色涂片法進(jìn)行CSF抗酸桿菌測定, 對(duì)比兩種方法的檢測結(jié)果, 為提高臨床診斷效果提供有效參考?，F(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2013年1月～2014年1月本院收治的TBM疑似患者320例, 臨床醫(yī)師在無菌操作下抽取患者腦脊液送至實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行FQ-PCR法與染色涂片法檢測。

1.2 儀器 FQ-PCR實(shí)時(shí)定量檢查儀(型號(hào)：ABI 7300, 產(chǎn)地：美國)；試劑：結(jié)核分枝桿菌(TB)核酸擴(kuò)增熒光檢測試劑盒［2］(深圳市匹基生物工程有限公司, 國藥準(zhǔn)字S20030084)。

1.3 方法

1.3.1 FQ-PCR法 CSF標(biāo)本以1500 r的速度離心5 min,去除上清液, 將TB核酸提取液50 μl加入沉淀物中, 輕彈管底使沉淀物懸浮。在100℃放置樣本, 然后在-20℃或4℃下冷卻。樣本管以10000 r的速度離心5 min, 選擇上清液, 反應(yīng)模板以4℃內(nèi)保存, 在自動(dòng)反應(yīng)管中加入模板上清液2 μl以供PCR使用, 具體操作根據(jù)試劑盒說明書的要求嚴(yán)格執(zhí)行。

1.3.2 染色涂片法 腦脊液標(biāo)本離心后, 沉渣方式涂片抗酸染色, 并在鏡下查找抗酸桿菌。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。計(jì)數(shù)資料以率(%)表示, 采用χ2檢驗(yàn)。P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩種方法的抗酸桿菌測定結(jié)果 320份CSF標(biāo)本經(jīng)染色涂片法檢測, 共檢出抗酸桿菌20例, 陽性率為6.25%；經(jīng)FQ-PCR法檢測, 檢出抗酸桿菌50例, 陽性率為15.63%；FQ-PCR檢測法的陽性檢出率明顯高于染色涂片法, 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。

2.2 兩種方法測定CSF結(jié)核桿菌的性能評(píng)估 320例疑似TBM的患者經(jīng)MRI、CT、CSF生化檢驗(yàn)并結(jié)合臨床癥狀診斷后, 共有45例確診為TBM。FQ-PCR檢測CSF結(jié)核桿菌的陽性率、特異度、靈敏度均高于染色法, 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。見表1。

表1 兩種方法測定CSF結(jié)核桿菌的性能評(píng)估(%)

3 討論

目前, TBM的診斷依據(jù)主要依賴于臨床表現(xiàn)、CSF檢查結(jié)果及相關(guān)影像學(xué)檢查, 其中CSF的免疫學(xué)、生化及病原學(xué)、細(xì)胞學(xué)測定結(jié)果是確診的重要參考值。同時(shí), 作者了解到,早診斷、早治療對(duì)TBM患者的療效及預(yù)后具有重要的影響,因此選擇一種快速、有效的結(jié)核桿菌檢測方法是保障TBM患者健康的關(guān)鍵。

本文研究結(jié)果可見, FQ-PCR對(duì)于CSF結(jié)核桿菌的陽性檢出率明顯高于染色涂片法(P＜0.05)；染色涂片法特異度為92.31%、靈敏度為44.44%, 均低于FQ-PCR方法的98.21%、 90.91%(P＜0.05)。其中FQ-PCR的陽性檢出率為50例, 高于確診TBM的45例, 作者認(rèn)為這可能與FQ-PCR方法敏感性過高、實(shí)驗(yàn)或取樣送檢過程中感染所致的假陽性有關(guān)；還可能與醫(yī)師在未經(jīng)影像學(xué)及臨床癥狀確診的情況下用藥, 而使患者病情在未確診的情況下痊愈有關(guān)。雖然上述兩種原因可造成FQ-PCR陽性診斷率高于確診率, 但二者陽性率之間的差異性較小。

染色涂片法對(duì)于TBM的檢出率較低, 且需要進(jìn)行1個(gè)月的培養(yǎng)處理, 耗時(shí)過長, 延誤了患者的治療時(shí)間。目前,改良染色涂片法雖然提高了檢出率, 但檢測效果也是差強(qiáng)人意［3］。因此, 在現(xiàn)階段的結(jié)核桿菌檢測方法中, FQ-PCR具有更明顯的應(yīng)用優(yōu)勢, 有效提高了臨床確診率。

綜上所述, FQ-PCR作為特異度強(qiáng)、靈敏度高、快速、簡便的腦脊液結(jié)核桿菌檢查方法, 在TBM的診斷中具有重要的臨床應(yīng)用價(jià)值, 值得推廣。

［1］ 張愛民.實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)檢測腦脊液中結(jié)核桿菌DNA的臨床應(yīng)用.中國臨床實(shí)用醫(yī)學(xué), 2010, 4(1):652.

［2］ 鞏建華,薛秀榮,馬愛玲.腦脊液結(jié)核桿菌抗原及核酸聯(lián)合檢測對(duì)結(jié)核性腦膜炎早期診斷的評(píng)價(jià).河北醫(yī)學(xué), 2012, 18(9):122-124.

［3］ 魏建華,薛曉紅,熊建軍, 等.結(jié)核分枝桿菌DNA分子生物學(xué)檢測.預(yù)防醫(yī)學(xué)情報(bào)雜志, 2012, 28(1):56-58.

2014-06-30］

130500 吉林省結(jié)核病醫(yī)院檢驗(yàn)科