李曉娜，韓 雪，楊 濤 (.河北省體育科學(xué)研究所普通外科，河北 石家莊 050000；.河北省石家莊市第一醫(yī)院普通外科，河北 石家莊 0500)

·論著·

KIF14過(guò)表達(dá)與肝細(xì)胞肝癌的發(fā)生密切相關(guān)

李曉娜1，韓 雪1，楊 濤2
(1.河北省體育科學(xué)研究所普通外科，河北 石家莊 050000；2.河北省石家莊市第一醫(yī)院普通外科，河北 石家莊 050011)

目的探討KIF14表達(dá)與肝細(xì)胞肝癌發(fā)生的關(guān)系。方法應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)檢測(cè)50例肝細(xì)胞肝癌組織及50例正常肝組織中KIF14的表達(dá)。結(jié)果與正常肝組織相比，KIF14 mRNA在肝細(xì)胞肝癌組織中過(guò)表達(dá)(P<0.01)。肝細(xì)胞肝癌中KIF14 DNA拷貝數(shù)也明顯高于正常肝組織(P<0.01)。結(jié)論KIF14過(guò)表達(dá)在肝細(xì)胞肝癌的發(fā)生過(guò)程中發(fā)揮著重要作用，它也許可以作為肝癌的潛在治療靶點(diǎn)。

肝腫瘤；驅(qū)動(dòng)蛋白；分子靶向治療

10.3969/j.issn.1007-3205.2014.07.006

肝細(xì)胞肝癌(hepatocellularcarcinoma,HCC)是全世界最常見(jiàn)的內(nèi)臟腫瘤之一[1]。HCC的治療包括傳統(tǒng)的手術(shù)治療、肝臟移植和分子靶向治療，但是由于HCC發(fā)病機(jī)制尚不明確，不能做到對(duì)HCC早期診斷、早期治療，從而不能有效地改善HCC患者的生存質(zhì)量及生存率。人類驅(qū)動(dòng)蛋白在人類腫瘤的發(fā)生過(guò)程中發(fā)揮著重要作用。深入研究驅(qū)動(dòng)蛋白的具體作用機(jī)制和功能可能有利于腫瘤靶向治療的發(fā)展[2-3]。KIF14作為驅(qū)動(dòng)蛋白家族成員[4]，在1q區(qū)域扮演著癌基因角色，這可能是KIF14導(dǎo)致了腫瘤發(fā)生中基因的不穩(wěn)定[5-6]。同時(shí)KIF14在細(xì)胞周期中規(guī)律存在，與有絲分裂進(jìn)程相關(guān)。本研究通過(guò)檢測(cè)50例HCC組織與50例正常肝組織中KIF14的表達(dá)，探討KIF14表達(dá)與HCC發(fā)生的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料：實(shí)驗(yàn)標(biāo)本均來(lái)源于2010年10月—2011年12月我院50例手術(shù)患者HCC組織，均經(jīng)術(shù)后病理證實(shí)，其中男性29例 ，女性21例 ，年齡41～63歲，平均(53.06±6.68)歲；50例正常肝組織取自肝血管瘤患者術(shù)后標(biāo)本，其中男性23例 ，女性27例 ，年齡37～59歲，平均(50.00±6.70)歲。實(shí)驗(yàn)標(biāo)本獲得后保存于-80℃冰箱中。所有100例實(shí)驗(yàn)標(biāo)本獲取均通過(guò)我院倫理審查機(jī)構(gòu)許可并書(shū)面征得所有患者同意。2組性別、年齡差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2 組織RNA分離和實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(real-timequantitativepolymerasechainreaction，RT-qPCR)：根據(jù)說(shuō)明書(shū)使用TRIZOL試劑提取總RNA。使用5μg總RNA和SuperScriptⅡ及寡dT執(zhí)行逆轉(zhuǎn)錄。RT-qPCR分析使用FastSYBRGreenMasterMix系統(tǒng)。KIF14引物和GAPDH內(nèi)參序列如下，KIF14,5′-TGGTGAAATGGCCTGTACAAGT-3′(forward),5′-GGCAACCAGTTAACCCTTTGAG-3′(reverse);GAPDH,5′-GAAATCCCATCACCATCTTC-CAGG-3′(forward),5′-GAGCCCCAGCCTTCTCCATG-3′(reverse)。PCR反應(yīng)條件如下，95℃ 20s；95℃ 3min；60℃ 30s；使用ABI-7500(應(yīng)用生物系統(tǒng))共計(jì)40個(gè)循環(huán)。相對(duì)定量方法得到的CT值，通過(guò)三聯(lián)反應(yīng)測(cè)定所有樣本的KIF14 和甘油醛-3-磷酸脫氫酶(glyceraldehyde-3-phosphatedehydrogenase,GAPDH)。取探測(cè)基因的可用三聯(lián)反應(yīng)CT平均值，減去GAPDH的CT值，獲得ΔCT。KIF14的相對(duì)mRNA表達(dá)水平應(yīng)用2-ΔCT方法計(jì)算。

1.3 實(shí)時(shí)熒光定量PCR評(píng)價(jià)拷貝數(shù)：按照制造商的說(shuō)明，用QIAampDNA迷你工具包 (Qiagen)，從組織中提取DNA。使用TaqMan基因拷貝數(shù)檢測(cè)試劑盒的應(yīng)用生物系統(tǒng)計(jì)算KIF14 拷貝數(shù)。使用一套ASXL2(應(yīng)用生物系統(tǒng))引物作為參考基因，如Reis-Filho等所述。在每個(gè)標(biāo)本中獲得KIF14 到ASXL2的復(fù)制比例作為每個(gè)試樣的KIF14拷貝數(shù)。

2 結(jié) 果

HCC組織中KIF14mRNA和KIF14DNA拷貝數(shù)明顯高于正常肝臟組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，見(jiàn)表 1 。

GroupsKIF14mRNAKIF14DNANormallivertissues0．28±0．160．84±0．43HCCtissues1．81±0．994．77±2．58 t10．78810．625 P0．0000．000

3 討 論

驅(qū)動(dòng)蛋白超家族成員，在人類多種腫瘤的發(fā)生過(guò)程中起著重要的作用。KIF14作為其重要成員，在人類腫瘤發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中的作用越來(lái)越受到人們的重視。本研究結(jié)果顯示在HCC組織中KIF14 mRNA表達(dá)水平及KIF14 DNA拷貝數(shù)均顯著高于正常肝組織，這表明 KIF14有可能在人類肝細(xì)胞肝癌發(fā)生過(guò)程中扮演著重要角色。

KIF14是胞質(zhì)分裂和染色體分離的必要條件，同時(shí)還具有在細(xì)胞分裂中期使染色體對(duì)齊的作用[7]，這些均說(shuō)明KIF14在人類腫瘤發(fā)生的過(guò)程中具有不可忽視的作用。目前已有研究[6,8-9]發(fā)現(xiàn)，KIF14在卵巢癌、視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤、乳腺癌、腦膠質(zhì)瘤等多種腫瘤中表達(dá)明顯增加，并且認(rèn)為，KIF14在卵巢癌、肺癌、腦膠質(zhì)瘤中是一個(gè)獨(dú)立的預(yù)后標(biāo)志和潛在的治療靶點(diǎn)。本研究中KIF14在HCC中高表達(dá)，證明KIF14在HCC的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中起重要作用。但是，KIF14在HCC發(fā)生過(guò)程中的具體作用機(jī)制是什么目前還不明確，需要進(jìn)一步深入研究。

目前KIF14在人類腫瘤發(fā)生過(guò)程中的具體作用機(jī)制及其調(diào)控機(jī)制還不明確，但KIF14在多種人類腫瘤組織中異常高表達(dá)證明其在研究人類腫瘤發(fā)生機(jī)制中有著重要的意義。并且由于KIF14在HCC組織中特異性的高表達(dá)，有可能使其成為HCC早期診斷的生物學(xué)標(biāo)志及新的治療靶點(diǎn)。

[1] 楊濤,孫軼飛,王立偉，等.KIF14過(guò)表達(dá)與肝細(xì)胞肝癌手術(shù)預(yù)后密切相關(guān)[J].河北醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),2014,35(3):263-265.

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(本文編輯：許卓文)

KIF14EXPRESSIONCLOSELYRELATEDWITHHEPATOCELLULAR
CARCINOMATUMORIGENESIS

LIXiaona1,HANXue1,YANGTao2
(1.DepartmentofGeneralSurgery,theSportsScienceInstituteofHebeiProvince,Shijiazhuang050000,China;2.DepartmentofGeneralSurgery,theFirstHospitalofShijiazhuangCity,HebeiProvince,Shijiazhuang050011,China)

CT:ObjectiveToinvestigatetherelationshipbetweenKIF14expressionandhepatocellularcarcinoma(HCC).MethodsThisstudyexploredthecorrelationbetweenKIF14expressionandhepatocellularcarcinomabydeterminingKIF14expressioninHCCtissuesandnormallivertissues.Real-timequantitativepolymerasechainreactionwasappliedtotestKIF14in50casesofHCCtissuesand50casesofnormallivertissues.ResultsComparedwiththenormallivertissues,KIF14mRNAinHCCtissueswasoverexpressed(P<0.01).KIF14DNAcopiesinHCCtissueswerealsosignificantlyhigherthanthoseinnormallivertissues(P<0.01).ConclusionKIF14overexpressionisveryimportantinHCCtumorigenesisandmayserveasapotentialtherapeutictargetforHCC.

liverneoplasms;kinesin;molecuartargetedtherapy

2014-04-02；

2014-05-07

河北省科學(xué)技術(shù)研究與發(fā)展計(jì)劃項(xiàng)目(132777236)

李曉娜(1979-) 女，滿族，吉林吉林人，河北省體育科學(xué)研究所主治醫(yī)師，醫(yī)學(xué)碩士，從事普通外科疾病診治研究。

R735.7

A

1007-3205(2014)07-0761-02