馬洪波,彭國(guó)良,楊 萍,劉 微,張洋婷,劉 敏,郗艷麗,雷鈞濤* (.吉林醫(yī)藥學(xué)院,吉林 吉林 0;.空軍臨潼航空醫(yī)學(xué)鑒定訓(xùn)練中心,陜西 臨潼 70600;蘭州軍區(qū)臨潼療養(yǎng)院,陜西 臨潼 70600)

酸漿亦稱(chēng)紅姑娘，為茄科多年生草本植物，其果實(shí)具有清熱解毒、陣痛、強(qiáng)心、利咽、化痰、利尿、降血糖等功效?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)為[1]酸漿有抗乙肝、治療上呼吸道感染及糖尿病的作用。多糖是由多個(gè)相同的單糖基以糖苷鍵相連而形成的高聚物，具有生物活性功能，如免疫調(diào)節(jié)、抗病毒、抗腫瘤、降血壓、降血脂、降血糖等。酸漿果含蛋白質(zhì)、脂肪、糖類(lèi)、維生素、礦物質(zhì)、酸漿果紅素等[2]。其酸漿中的主要成分是多糖，為了更好地提取出酸漿果實(shí)中的多糖，本實(shí)驗(yàn)通過(guò)優(yōu)選的單因素進(jìn)行組合，進(jìn)行正交實(shí)驗(yàn)確定最佳協(xié)同作用條件，找到篩選酸漿多糖的最佳提供工藝。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料處理

酸漿購(gòu)于安徽省亳州市萬(wàn)珍中藥飲片廠。稱(chēng)取預(yù)處理之后的酸漿粉175 g，加入2.4 L的石油醚(沸程60～90 ℃)于80 ℃的恒溫水浴鍋上水浴回流脫脂4 h，抽濾，濾液減壓濃縮回收石油醚，濾渣自然烘干，備用。

采用熱水提取法提取酸漿粗多糖：脫脂酸漿果實(shí)→熱水提取→抽濾(取濾液)→脫色→醇沉4 ℃冰箱中過(guò)夜→干燥→粗多糖[3]。

1.2 供試品溶液的制備

取酸漿粗多糖置于50 mL錐形瓶中，加適量純水，沸水浴使溶解，趁熱過(guò)濾，并用熱水洗殘?jiān)?，將洗液與錐形瓶中溶液混合，轉(zhuǎn)移至100 mL容量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻即得。

1.3 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制

精密稱(chēng)取葡萄糖10.31 mg，置于 10 mL 容量瓶中，加適量水溶解，并稀釋至刻度，搖勻。精密吸取0.0、0.1、0.2、0.4、0.6、0.8 mL于25 mL比色管,分別加水補(bǔ)1.0 mL。上述溶液分別加3，5-二硝基水楊酸試液1.5 mL,于沸水浴中加熱5 min,流水冷卻,加水稀釋至25 mL刻度。以相應(yīng)溶液為空白，在520 nm處測(cè)定吸收度。以吸光度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.4 酸漿果實(shí)中多糖含量的測(cè)定

精密量取供試品溶液2.5 mL，置于50 mL錐形瓶中，加水2.5 mL，加6 mol/L鹽酸溶液5 mL，在沸水浴中加熱30 min，用流水冷卻后加酚酞指示液1滴，用40%氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)至微紅色，轉(zhuǎn)移至25 mL容量瓶中，加水至刻度，搖勻，即得總糖溶液。精密量取供試品溶液5 mL，置于10 mL容量瓶中，加酚酞指示液1滴，用40%氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)至微紅色，加水至刻度，搖勻，即得單糖溶液。

精密量取上述總糖溶液和單糖溶液1 mL，分別置于10 mL具塞刻度試管中,加純水至2 mL，分別精密加入3，5-二硝基水楊酸試液2 mL，混勻，在100 ℃水浴中加熱5 min，取出，立即用冰水浴冷卻至室溫,加水3 mL搖勻。用相應(yīng)的試劑作空白，照分光光度法在520 nm處依法顯色，測(cè)定吸光度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程中計(jì)算出總糖和單糖濃度，由總糖含量減去單糖含量，即得多糖的含量[4]。

1.5 單因素實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)

選擇料液比、醇沉濃度、提取時(shí)間、提取次數(shù)4個(gè)影響因素進(jìn)行單因素實(shí)驗(yàn)，其中料液比分別為1∶30、1∶40、1∶50、1∶60、1∶70，醇沉濃度分別為55%、65%、75%、85%、95%，提取時(shí)間分別為1 h、1.5 h、2 h、2.5 h、3 h，提取次數(shù)分別為1、2、3次。

1.6 正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)

根據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)及單因素實(shí)驗(yàn)，選擇料液比、醇沉濃度、提取時(shí)間、提取次數(shù)4個(gè)影響因素，每個(gè)因素取3個(gè)水平，以多糖提取率為主要考察指標(biāo)，選用L9(34)正交表進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

2 結(jié) 果

以粗多糖的含量為指標(biāo)，在料液比為1∶60、乙醇濃度為85%、提取時(shí)間2.5 h、提取次數(shù)為2次時(shí)，提取出的多糖含量最高。單因素實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的因素水平見(jiàn)表1,正交實(shí)驗(yàn)表如表2。

按照上述最佳提取工藝提取條件，對(duì)一組樣品進(jìn)行驗(yàn)證，測(cè)定多糖的提取含量為10.535 3、10.553 3、10.751 7、10.586 6、10.672 1 mg/g。

表 1 因素水平表

表 2 正交實(shí)驗(yàn)表

3 討 論

在本實(shí)驗(yàn)中采用熱水提取法，料液比1∶60，醇沉濃度為95%，提取次數(shù)為2次，提取時(shí)間為1.5時(shí)提取率最高。測(cè)定多糖含量采用的3，5-二硝基水楊酸法不使用硫酸，分別測(cè)定總糖和單糖的含量后，進(jìn)而計(jì)算出樣品中酸漿多糖的含量，方法學(xué)驗(yàn)證表明，該法精密度、重現(xiàn)性等良好，是一種簡(jiǎn)便、實(shí)用的有效分析方法。此外，應(yīng)用3，5-二硝基水楊酸法時(shí)，還應(yīng)注意，樣品測(cè)試液制備過(guò)程中，酸水解必須控制適宜時(shí)間,時(shí)間短則多糖水解不完全，時(shí)間長(zhǎng)則單糖和鹽酸發(fā)生化學(xué)反應(yīng)生成糖醛，不能和3，5-二硝基水楊酸發(fā)生縮合反應(yīng)。

參考文獻(xiàn)：

[1] Yang Xiaoping,Guo Dayong,ZhangJinming,et al.Characterization and antitumor activity of pollen polysaccharide[J].Int Immunopharmacol,2007,7(4):427-434.

[2] 李 蕾,岳喜華,于 歡，等.響應(yīng)面法優(yōu)化酸漿果多糖的提取工藝[J].食品與生物技術(shù)學(xué)報(bào)，2009，28(1):53-56.

[3] 葛 玉，段玉峰，劉俊花，等.酸漿果多糖不同提取工藝研究[J].食品科學(xué)，2006，27(8)：178-182.

[4] 楊貴明，蔣愛(ài)華，薛秋生.用DNS光度法測(cè)定還原糖的條件研究[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2006，34(14)：3258.