張宏梅,崔佰吉,張秀榮 (吉林醫(yī)藥學(xué)院藥學(xué)院，吉林 吉林 132013)

多潘立酮(Domperidone)為第二代胃腸動(dòng)力藥，為苯并咪唑類外周D2受體拮抗劑，有促進(jìn)胃動(dòng)力和止吐作用[1],使胃排空速率加快，并抑制各種原因所致的惡心、嘔吐。有關(guān)物質(zhì)的控制，一直是化學(xué)藥物質(zhì)量控制的關(guān)鍵，有關(guān)多潘立酮有關(guān)物質(zhì)的測(cè)定的報(bào)道也比較多，但是有關(guān)物質(zhì)測(cè)定過(guò)程中多潘立酮的供試品濃度選擇存在一定的差異性，報(bào)道中[2-4]曾采用相當(dāng)于多潘立酮0.2、0.25 mg/mL，而中國(guó)藥典增補(bǔ)版中采用的多潘立酮的濃度為0.5 mg/mL。本研究采用高效液相色譜法進(jìn)行多潘立酮有關(guān)物質(zhì)的測(cè)定，通過(guò)測(cè)定不同濃度的多潘立酮有關(guān)物質(zhì)，進(jìn)而考察濃度對(duì)于有關(guān)物質(zhì)測(cè)定的影響。

1 儀器與試藥

日本島津LC-20A系列高效液相色譜儀，包括在線真空脫氣裝置、二元梯度泵、自動(dòng)進(jìn)樣器、二極陣列管檢測(cè)器和LC-Solution色譜工作站；CPA225D電子天平(賽多利斯)；MILLIPORE(Synergy185)超純水制備儀；KQ-250DE型數(shù)控超聲波清洗器。

甲醇為色譜純，水為超純化水，其他試劑為分析純；多潘立酮(100304-200502中國(guó)藥品生物制品檢定所)，氟哌利多(EDQM D3100000,16/12/2009)；多潘立酮片(本實(shí)驗(yàn)室自制)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)

色譜柱：島津 wondaSilTM,C18色譜柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)；流動(dòng)相：甲醇∶0.5%醋酸銨水溶液(67∶33)，檢測(cè)波長(zhǎng)為280 nm，柱溫30 ℃。多潘立酮和氟哌利多的分離度應(yīng)大于2.0。

2.2 溶液的制備

取本品的細(xì)粉適量，分別配置多潘立酮濃度為5、2.5、1.25、0.9、0.7、0.5、0.2 mg/mL的溶液，作為供試品溶液；分別精密量取各供試品溶液1 mL，置200 mL量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照溶液；取多潘立酮對(duì)照品10 mg，氟哌利多對(duì)照品15 mg，精密稱定，置100 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為系統(tǒng)適應(yīng)性溶液。

2.3 專屬性實(shí)驗(yàn)

多潘立酮片為西安楊森制藥有限公司在國(guó)內(nèi)首家生產(chǎn)并銷售，其公布的說(shuō)明書中包含有所使用的輔料信息為：淀粉、氫化植物油、乳糖、硬脂酸鎂、微晶纖維素、聚維酮K90、預(yù)交化淀粉、十二烷基硫酸鈉。本實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行多潘立酮片的處方優(yōu)化，最后選定的輔料為：淀粉、乳糖、硬脂酸鎂、微晶纖維素、聚維酮K30、十二烷基硫酸鈉。

通過(guò)破壞性試驗(yàn)研究，本實(shí)驗(yàn)的色譜條件可以對(duì)各種破壞條件下產(chǎn)生的雜質(zhì)進(jìn)行有效的測(cè)定，同時(shí)輔料的破壞性試驗(yàn)也表明，輔料對(duì)于本制劑的有關(guān)物質(zhì)測(cè)定沒(méi)有影響，系統(tǒng)適應(yīng)性實(shí)驗(yàn)符合要求。

2.4 有關(guān)物質(zhì)的測(cè)定

2.4.1 進(jìn)樣體積的影響

取濃度為5 mg/mL的供試品及其自身對(duì)照溶液，采用自動(dòng)進(jìn)樣器進(jìn)樣，進(jìn)樣體積分別為5、10、20、30 μL，注入液相色譜儀，記錄主成分峰保留時(shí)間2倍的色譜圖。不同進(jìn)樣體積的樣品在不同的保留時(shí)間出現(xiàn)不同的雜質(zhì)，經(jīng)過(guò)數(shù)據(jù)處理，共有10個(gè)雜質(zhì)峰被檢出，有關(guān)物質(zhì)含量見(jiàn)表1，變化趨勢(shì)圖見(jiàn)圖1。由實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，隨著進(jìn)樣體積的增加，有關(guān)物質(zhì)的含量也有所增加，但是增加的幅度不是很大，在進(jìn)樣量20、30 μL時(shí)，有關(guān)物質(zhì)的百分含量差異不是特別明顯。同時(shí)對(duì)比不同進(jìn)樣體積下的不同色譜峰可以發(fā)現(xiàn)，進(jìn)樣體積增加后，有關(guān)物質(zhì)明顯增加的色譜峰為相對(duì)保留時(shí)間0.372、1.133的色譜峰，其增加的百分率分別為198.32%和99.68%。可見(jiàn)隨著進(jìn)樣量的增加主要增加的有關(guān)物質(zhì)為以上2個(gè)色譜峰。

2.4.2 濃度對(duì)有關(guān)物質(zhì)的影響

精密量取濃度為5、2.5、1.25、0.9、0.7、0.5、0.2 mg/mL的溶液及其自身對(duì)照溶液20 μL，注入液相色譜儀，記錄主成分峰保留時(shí)間2倍的色譜圖。經(jīng)過(guò)數(shù)據(jù)處理后，各個(gè)濃度項(xiàng)下的有關(guān)物質(zhì)情況見(jiàn)表2，有關(guān)物質(zhì)檢查結(jié)果分布見(jiàn)圖2。由實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，當(dāng)多潘立酮的濃度為2.5、5.0 mg/mL時(shí)出現(xiàn)雜質(zhì)峰9個(gè)，為所有濃度中出現(xiàn)雜質(zhì)峰數(shù)最多的，同時(shí)從趨勢(shì)圖上可以看出，不同濃度的多潘立酮對(duì)于有關(guān)物質(zhì)的測(cè)定影響不是非常明顯，在本研究所選定的濃度范圍內(nèi)，2.5 mg/mL為雜質(zhì)峰檢測(cè)數(shù)量最多的一個(gè)濃度點(diǎn)，可以作為多潘立酮有關(guān)物質(zhì)檢查的參考依據(jù)。

表 1 不同進(jìn)樣體積有關(guān)物質(zhì)結(jié)果表(μL)

圖 1 不同進(jìn)樣體積有關(guān)物質(zhì)變化圖

表 2 不同濃度有關(guān)物質(zhì)檢查結(jié)果表(mg/mL)

圖 2 不用濃度有關(guān)物質(zhì)檢查結(jié)果分布

3 討 論

有關(guān)物質(zhì)檢查過(guò)程中，分別采用不同的進(jìn)樣體積和不同的進(jìn)樣濃度進(jìn)行考察，其實(shí)質(zhì)均是改變單次進(jìn)樣量的考察。高效液相色譜儀可以提供不同的進(jìn)樣體積，最大可以達(dá)到2 000 μL的進(jìn)樣量，但是過(guò)高的進(jìn)樣量會(huì)給色譜柱產(chǎn)生較大的負(fù)荷，所以尋求合適的進(jìn)樣量、還能滿足測(cè)定的需要尤為關(guān)鍵。本研究分別采用5、10、20、30 μL作為進(jìn)樣體積，常規(guī)檢測(cè)的進(jìn)樣體積一般為10 μL和20 μL，其他體積采用的相對(duì)比較少，從實(shí)驗(yàn)結(jié)果也可以看出，20 μL和30 μL的進(jìn)樣體積在檢測(cè)結(jié)果上沒(méi)有明顯的差異，所以沒(méi)有再進(jìn)行30 μL以上體積的檢測(cè)，20 μL的檢測(cè)體積能夠滿足檢測(cè)的需要。

數(shù)據(jù)處理過(guò)程中發(fā)現(xiàn)，在相對(duì)保留時(shí)間為0.170的位置，有一色譜峰，其峰面積并不隨著進(jìn)樣體積和進(jìn)樣濃度的改變而發(fā)生明顯變化，單獨(dú)進(jìn)行溶劑檢測(cè)后也發(fā)現(xiàn)這一色譜峰的存在，所以在數(shù)據(jù)處理過(guò)程中舍棄本研究判定的溶劑峰。

供試品溶液的濃度過(guò)高，也就是說(shuō)進(jìn)樣量過(guò)大，會(huì)造成主峰嚴(yán)重拖尾、裂縫、柱超載等問(wèn)題，如果設(shè)定過(guò)低則會(huì)出現(xiàn)靈敏度低，有關(guān)物質(zhì)無(wú)法檢測(cè)到的現(xiàn)象[5-6]。從本研究也可以發(fā)現(xiàn)，當(dāng)檢測(cè)濃度比較低的條件下，檢測(cè)出的雜質(zhì)峰相對(duì)比較少，本研究采用了最高的濃度為5.0 mg/mL，這個(gè)濃度與BP2010中多潘立酮片的有關(guān)濃度檢查供試品溶液的濃度是一致的，但是色譜系統(tǒng)上存在較大的差異，所以檢測(cè)結(jié)果的對(duì)比上還需要進(jìn)一步的研究。

本研究考察了不同的濃度對(duì)有關(guān)物質(zhì)的影響，所檢測(cè)結(jié)果均小于1.0%，但是不同的進(jìn)樣量檢查的結(jié)果還是有很大的差異。然而這些在1.0%范圍內(nèi)的差異并不能證明濃度越高就是最優(yōu)檢測(cè)條件的選擇依據(jù)，還需要進(jìn)一步確認(rèn)增加幅度比較大的幾個(gè)色譜峰的結(jié)構(gòu)確認(rèn)，以及進(jìn)一步的藥理毒理學(xué)方面的研究，最終確定每一個(gè)雜質(zhì)對(duì)制劑的影響，為制劑的安全評(píng)價(jià)和質(zhì)量控制提供理論依據(jù)。

參考文獻(xiàn)：

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