王艷生 姚宏靜 王立成 林筠 黃琪 朱國慶

血清免疫固定電泳常見問題的分析

王艷生 姚宏靜 王立成 林筠 黃琪 朱國慶

免疫固定電泳最長用于M蛋白相關疾病的鑒定。通過對日常工作中遇到的血清免疫固定電泳常見問題進行了認真的分析, 針對相應問題提出了解決辦法, 以便提高血清免疫固定電泳的檢測水平。

免疫固定電泳；M蛋白；β巰基乙醇

M蛋白是漿細胞或B淋巴細胞單克隆惡性增殖分泌的大量結構均一的, 無抗體活性和無免疫活性免疫球蛋白或其肽鏈亞單位, 臨床上稱之為單克隆免疫球蛋白(monoclonal proteins, M蛋白)［1］。免疫固定電泳技術是結合區(qū)帶電泳的分離作用和單克隆抗體的特異性及高敏感性來檢測樣本中的單克隆免疫球蛋白［2］。此技術在惡性單克隆免疫球蛋白血癥的診斷、分型、療效隨訪和意義未名單克隆免疫球蛋白血癥轉化的病程監(jiān)測都有重要意義。

1 血清免疫固定電泳常見問題

①抗原抗體比例不合適 免疫增殖性疾病中會出現(xiàn)某種或幾種免疫球蛋白異常增高, 高濃的球蛋白使血清免疫固定電泳某個球蛋白區(qū)出現(xiàn)有著色較深的濃密條帶或出現(xiàn)邊緣著色而中心區(qū)域蛋白不著色的“口型”。著色較深的濃密條帶的出現(xiàn)會使判讀很困難, 是否有單克隆條帶隱匿在其中不容易判讀；還是此樣本為一個多克隆免疫球蛋白病無法區(qū)分?！翱谛汀比菀壮霈F(xiàn)假陰性的結果。② IgM型聚合度高, 非特異性沉淀影響判讀, 在β或γ區(qū)可見致密而均質(zhì)條帶。第一種情況凝膠的點樣處和整個泳道出現(xiàn)沉淀。另一種情況是出現(xiàn)兩條單克隆帶。③IgA型譜帶寬而彌散, IgA型較其他類型的單克隆比較譜帶寬而彌散不易判讀。④血清免疫固定只有重鏈單克隆成分, 初診時血清免疫固定只有重鏈單克隆成分勿輕易診斷為重鏈病。⑤血清免疫固定只有輕鏈單克隆成分。⑥血清免疫固定電泳陰性的漿細胞病, 臨床上典型的漿細胞病特征及病理損傷, 但血清免疫固定電泳為陰性。⑦血清免疫固定的血清蛋白電泳條帶假的狹區(qū)帶易與M蛋白混淆。以上討論了對血清免疫固定電泳技術在日常工作中常見問題, 現(xiàn)就其問題逐一分析和解決。

2 分析與討論

①高濃度的球蛋白需要考慮提高抗體濃度或降低抗原的濃度, 一般采用生理鹽水降低抗原濃度的方法［3］。掌握正確的適合自己實驗室試劑盒的稀釋比例, 最好先進行免疫球蛋白及輕鏈的定量。因免疫固定電泳的檢測靈敏度可達0.25 g/L,恰當?shù)南♂尡壤谀z片上會呈現(xiàn)清晰且濃而狹窄界限明顯的沉淀線即單克隆免疫球蛋白。②由于大量IgM多以19 S五聚體形式存在, 造成凝膠的點樣處和整個泳道出現(xiàn)沉淀的情況。19 S五聚體伴隨7 S單體亞單位會造成兩條單克隆帶［4］。這兩種情況經(jīng)β巰基乙醇處理會使大分子聚合蛋白解聚和適當?shù)南♂屇艿玫嚼硐氲膯慰寺l帶。β巰基乙醇使用濃度為100 μl標本中加入10 μl10%的β巰基乙醇。另需注意β巰基乙醇毒性分級為高毒且具有特殊臭味, 高濃度吸入本品有致人死亡危險, 有條件的話可在通風櫥中戴手套操作。③由于IgA分子的多態(tài)性形成的二聚體和三聚體導致蛋白質(zhì)的不同遷移率［5］。使IgA型單克隆免疫球蛋白病呈現(xiàn)多條帶的現(xiàn)象。在不能清晰判讀的情況下可以用經(jīng)β巰基乙醇處理使大分子聚合蛋白解聚和適當?shù)南♂尩慕饩鄯椒?。④有些M蛋白的四級結構會阻礙輕鏈抗原決定簇與其相應的輕鏈抗血清的結合, 此時可經(jīng)β巰基乙醇處理使大分子聚合蛋白解聚和適當?shù)南♂尩慕饩鄯椒? 再做實驗能得到正確的結果。⑤若與三種重鏈α, γ, μ不發(fā)生反應而與κ或λ輕鏈反應,則需進一步作游離輕鏈的補充檢測。若呈陰性結果, 則需再做抗IgD和抗IgE檢測。⑥第一種為不分泌型多發(fā)性骨髓瘤；第二種為輕鏈型多發(fā)性骨髓瘤, 由于輕鏈的分子量較小易迅速自腎排除故有時血清中反而呈現(xiàn)陰性。這種情況可用本-周蛋白的檢測或尿固定電泳來檢測輕鏈的單克隆成分的有無。⑦溶血標本在β位會形成血紅蛋白區(qū)帶；陳舊血清在近原位由于IgG的聚合形成的窄區(qū)帶；血漿標本在r位會形成纖維蛋白原帶［6］。以上3種情況可通過樣本的質(zhì)量前控制,用新鮮血清標本可以避免此類情況的發(fā)生。

［1］ 侯建.M蛋白的鑒定及結果分析.中華血液學雜志, 2002, 23 (10):559-560.

［2］ 陳世倫, 于力, 邱錄貴.多發(fā)性骨髓瘤診療常規(guī).北京:人民衛(wèi)生出版社, 2012:29-34.

［3］ 從玉隆.檢驗醫(yī)學.北京:人民衛(wèi)生出版社, 2009:684-689.

［4］ 朱鑒清.電泳技術臨床應用.遼寧:遼寧科學技術出版社, 2006:82-91.

［5］ 張亨.巰基乙醇的性質(zhì)、生產(chǎn)及應用.杭州化工, 2003, 33(3): 22.

［6］ 朱國慶, 姚宏靜.免疫固定電泳技術的應用體會.實用醫(yī)技雜志, 2007, 14(35):4858-4859.

2014-04-28］

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