張培良 張煥珍

蛋白芯片檢測技術(shù)是新研究領(lǐng)域的一種高靈敏度、高通量、高特異性且微型化的蛋白質(zhì)分析技術(shù)［1］。本研究采用上海數(shù)康公司的HD2001A型生物芯片, 對已經(jīng)確診的100例惡性腫瘤患者和100例良性患者進(jìn)行相關(guān)分析, 探討在腫瘤臨床診斷檢測腫瘤標(biāo)記物(TM)的聯(lián)合應(yīng)用價值, 為腫瘤患者的早期診斷和治療提供精準(zhǔn)的依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 惡性腫瘤患者為本院2012年8月～2013年10月住院患者100例, 其中男62例, 女38例, 年齡34～79,平均年齡(53.2±7.8)歲, 其中胃癌25例, 胰腺癌15例, 乳腺癌10例, 肺癌11例, 肝癌21例, 直腸癌8例, 結(jié)腸癌10例。對照組100例, 其中肝臟疾病32例, 肺部疾病20例, 消化道疾病26例, 婦科疾病14例, 前列腺疾病8例, 兩組患者的一般資料差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05), 具有可比性。

1.2 方法 在患者空腹時采集外周血2 ml 對其離心分離血清, 分離后在4℃冰箱保存, 4 d左右取出檢測。檢測時將芯片的小方格內(nèi)放入待測血清或標(biāo)準(zhǔn)品100 μl；恒溫37 ℃, 30 min,100 rpm 搖床振蕩, 振蕩后取出芯片棄去孔內(nèi)液體；清洗后將芯片放入洗盒, 繼續(xù)洗液, 37℃搖床, 250 rpm, 10 min振蕩洗滌, 將棄去盒內(nèi)液體；重復(fù)洗滌4次；芯片小方格內(nèi)加100 μl 反應(yīng)液, 同樣重復(fù)洗滌 4次；等體積將檢測液 A 和 B混合, 加入 20 μl 混合的檢測液在膜表面, 通過蛋白芯片檢測儀進(jìn)行檢測, 60 s后拍攝圖像, 進(jìn)行反應(yīng)數(shù)據(jù)分析。

1.3 結(jié)果判定［2］根據(jù)C-12 檢測系統(tǒng)12種腫瘤標(biāo)志物的參考范圍:神經(jīng)元特異性烯醇化酶(NSE)＜13.0 ng/ml, 癌胚抗原 (CEA)＜5.0 ng/ml, 糖類抗原 125(CA125)＜35.0 U/ml, 糖類抗原 242(CA242)＜20.0 U/ml, 鐵蛋白 (ferritin)＜219.0 ng/ml(女 )、＜322.0 ng/ml(男 ), 糖類抗原 199(CA199)＜35.0 U/ml, 糖類抗原153(CA153)＜35.0 U/ml, 前列腺特異性抗原 (PSA)＜5.0 ng/ml, 甲胎蛋白(AFP)＜20.0 ng/ml, 人絨毛膜促性腺激素(β-HCG)＜3.0 ng/ml, 游離性前列腺特異性抗原(F-PSA)＜1.0 ng/ml, 生長激素(HGH)＜7.5 ng/ml。實驗排除溶血、脂血標(biāo)本。其他具體步驟要嚴(yán)格按照C-12上的使用說明書進(jìn)行操作。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 采用統(tǒng)計學(xué)軟件SPSS16.0對實驗數(shù)據(jù)進(jìn)行總結(jié)、處理, 計數(shù)資料采用χ2檢驗, P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

良性疾病組與惡性腫瘤組的陽性率比較, 惡性腫瘤組的陽性率明顯比良性疾病組高(P＜0.05)。C-12 蛋白芯片對惡性腫瘤檢測的陽性率85%, 靈敏度為82%。見表1。

表1 C-12蛋白芯片對各組的檢測陽性率(n, %)

3 討論

生物芯片是近年來醫(yī)學(xué)界一個備受矚目的醫(yī)療成果,可以將人體的各項檢測變得非常集中化, 而且可對人體內(nèi)的細(xì)胞進(jìn)行簡單快速地解讀。生物芯片主要就是采用了微細(xì)加工［3,4］。雙抗體夾心法的化學(xué)發(fā)光檢測方法是多腫瘤標(biāo)志物蛋白芯片檢測系統(tǒng)是基礎(chǔ), 12種腫瘤標(biāo)志物的抗體被固相基質(zhì)上包被, 將血清中對應(yīng)的腫瘤標(biāo)志物進(jìn)行捕捉, 與第二抗體結(jié)合, 對其催化使其產(chǎn)生化學(xué)反應(yīng)的光信號, 將芯片采取專門的芯片閱讀儀對腫瘤標(biāo)志物進(jìn)行定量檢測。

本研究對卵巢癌使用多腫瘤標(biāo)志物蛋白芯片進(jìn)行分析和檢測, 蛋白芯片是一種應(yīng)用較為廣泛生物芯片, 蛋白芯之所以發(fā)光主要就是利用了抗體和抗原特異性的結(jié)合通過催化化學(xué)反應(yīng)來進(jìn)行檢測的。然后利用計算機(jī)來判斷熒光的強(qiáng)弱結(jié)果。蛋白芯片技術(shù)避免了過去分析方法的弱點, 具有快速讀取、高通量和樣本量少的優(yōu)勢, 對于原始蛋白的提取物和血液中的蛋白質(zhì)快速進(jìn)行分析, 而且可以對于血液, 提取多種組織和細(xì)胞中的蛋白質(zhì)信息, 所以廣泛的運用于檢測癌癥,經(jīng)過醫(yī)學(xué)研究, 該技術(shù)對于檢測腫瘤蛋白質(zhì)水平的變化已經(jīng)成熟, 比起其他的檢測能夠?qū)δ[瘤特征進(jìn)行反映。雖然生物芯片已經(jīng)成熟但是不可能達(dá)到百分百的效果, 仍會有一些患者由于病情原因被誤診。畢竟腫瘤患者在不斷地變化之中,很難預(yù)測。蛋白芯片檢測技術(shù)的特異性和敏感性在所有目前存在的檢測手段中相對較高, 盡管達(dá)不到百分百的成功率,但是對腫瘤做出合理而科學(xué)的檢測成功率相對還是很高的。

目前在醫(yī)學(xué)界倡導(dǎo)腫瘤標(biāo)志物聯(lián)合檢驗的方法的人占的比率還是較大的, 因為腫瘤診斷這種方法可以提高敏感度和特異性, 在適合腫瘤臨床檢測的同時, 在臨床上對腫瘤高?；颊叩捏w檢篩查也具有顯著的意義, 在臨床診斷上C-12芯片法的基本價值也是顯著的。對陽性血清腫瘤標(biāo)志物的檢驗因為有了12 項指標(biāo)的聯(lián)合所以更加精確。目前所有腫瘤的標(biāo)志物的指標(biāo)會有所顯示。而對于單項腫瘤標(biāo)志物如肺癌、乳腺癌、 胃癌陽性比例不高的, 通過C-12芯片法的聯(lián)合檢測可以發(fā)現(xiàn)多項腫瘤標(biāo)志物呈陽性, 這不僅為臨床治療提供有效的監(jiān)測指標(biāo)還有助于提高臨床診斷的靈敏度。多腫瘤標(biāo)志物蛋白芯片檢測系統(tǒng)在臨床中的應(yīng)用具有一定價值。

［1］ 程建平, 張建明, 金躍.多腫瘤標(biāo)志物蛋白芯片檢測系統(tǒng)在腫瘤診斷與篩查中的應(yīng)用研究.中國實驗診斷學(xué), 2008, 1(3):1370-1371.

［2］ 陳莉彭, 劍雄, 周細(xì)國.多腫瘤標(biāo)志物蛋白芯片檢測系統(tǒng)在臨床中的應(yīng)用.中國醫(yī)藥導(dǎo)報, 2006, 3(29):29-30.

［3］ 胡興榮, 徐先早, 崔顯念, 等.多腫瘤標(biāo)志物蛋白芯片檢測系統(tǒng)的應(yīng)用分析.檢驗醫(yī)學(xué)與臨床, 2007, 4(10):929-930.

［4］ 潘振華.多腫瘤標(biāo)志物蛋白芯片檢測技術(shù)在卵巢癌臨床應(yīng)用中的評價.現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué), 2012, 39(24):6399-6340.