白宗江+許鐵+杜葉平

【摘要】目的：觀察油酸（oleic acid，OA）二次靜脈注射法復(fù)制ARDS家兔模型的效果。方法：采用OA二次靜脈注射方法復(fù)制ARDS家兔模型。經(jīng)耳緣靜脈分2次緩慢注射OA（0.1ml/kg），第一次注射0.1ml，間隔10min后給予剩余量。健康成年雌性家兔12只，應(yīng)用隨機(jī)數(shù)字表法將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物隨機(jī)分為空白對(duì)照組（CON），ARDS組（OA），每組6只家兔。光學(xué)顯微鏡觀察肺組織病理切片變化，觀察CON組干預(yù)5h和OA組干預(yù)1h、5h后家兔血?dú)夥治鼋Y(jié)果，觀察各組肺干濕重比。結(jié)果：肺組織HE染色病理切片示，CON組肺泡壁結(jié)構(gòu)基本正常。OA組肺組織病理變化基本符合ARDS肺組織病理變化，可見(jiàn)肺組織出血、炎性細(xì)胞浸潤(rùn)、肺泡內(nèi)滲出液以及肺泡內(nèi)透明膜形成。與CON組比較，OA組在1h及5h檢測(cè)PaO2、PaO2/FiO2均顯著降低，差異統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。OA組于5h復(fù)測(cè)血?dú)夥治鍪据^1h測(cè)量PaO2、PaO2/FiO2升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。CON組與OA組各時(shí)間點(diǎn)所測(cè)PaCO2無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。與CON組比較，OA組D/W顯著降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論：OA二次靜脈注射法可在短時(shí)間內(nèi)成功復(fù)制ARDS家兔模型，并較傳統(tǒng)給藥方法家兔存活率提高。

【關(guān)鍵詞】急性呼吸窘迫綜合征；油酸；氧合指數(shù)

靜脈注射OA是復(fù)制ARDS模型的經(jīng)典方法之一，它具有可重復(fù)性高、操作簡(jiǎn)便等優(yōu)點(diǎn)。然而，應(yīng)用動(dòng)物復(fù)制傳統(tǒng)給藥方法的油酸型ARDS模型具有約15%～30%的死亡率[1-3]。本實(shí)驗(yàn)旨在觀察改良后的OA二次靜脈注射法所復(fù)制ARDS家兔模型肺組織病理變化、血?dú)夥治鼋Y(jié)果和肺干濕重比，評(píng)價(jià)OA二次靜脈注射法復(fù)制ARDS家兔模型的效果。

資料與方法

實(shí)驗(yàn)試劑：OA（Purity>98%）購(gòu)自生工生物工程（上海）股份有限公司；戊巴比妥鈉粉劑購(gòu)自徐州醫(yī)學(xué)院（德國(guó)分裝，分子式C11H17O3N2Na，分子量246.26，Lot.No.WS20080810）。

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組：健康成年雌性家兔12只，體重2.0～3.0kg。徐州醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，許可證號(hào)：SCXK（蘇）2011-0037。所有動(dòng)物飼養(yǎng)和實(shí)驗(yàn)操作程序符合徐州醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物福利倫理委員會(huì)相關(guān)規(guī)定，并經(jīng)徐州醫(yī)學(xué)院動(dòng)物倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。應(yīng)用隨機(jī)數(shù)字表法將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物隨機(jī)分為空白對(duì)照組（CON組），ARDS組（OA組），每組6只家兔。

實(shí)驗(yàn)方法：家兔稱(chēng)重后耳緣靜脈注射3%戊巴比妥鈉（30mg/kg），麻醉穩(wěn)定后將家兔仰臥位固定在兔臺(tái)上。OA組經(jīng)耳緣靜脈分2次緩慢注射OA（0.1ml/kg），第一次注射0.1ml，間隔10min后給予剩余量；CON組經(jīng)耳緣靜脈分2次緩慢注射生理鹽水（0.1ml/kg），第一次注射0.1ml，間隔10min后給予剩余量。

標(biāo)本的采集及檢測(cè)：OA組于干預(yù)1h和5h后經(jīng)頸動(dòng)脈抽取動(dòng)脈血檢測(cè)氧分壓和二氧化碳分壓。CON組于干預(yù)5h后動(dòng)脈抽取動(dòng)脈血檢測(cè)氧分壓和二氧化碳分壓。過(guò)量麻醉法處死家兔，開(kāi)胸取左上肺4%甲醛固定，石蠟包埋，切片行HE染色觀察肺組織病理變化。取右下肺用冷生理鹽水沖去殘血，測(cè)量肺濕重（W）后放入80℃烤箱中7天后取出測(cè)量干重（D），計(jì)算肺干濕重比（D/W）。

統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：SPSS 16.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料以 ±s表示，組間比較采用單因素方差分析，方差齊則用SNK法檢測(cè)，方差不齊則用Dunnett's T3法檢測(cè)。檢驗(yàn)水準(zhǔn)：α=0.05，P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié)果

關(guān)于ARDS模型制備：根據(jù)ARDS“柏林定義”[4]，OA組于干預(yù)1h后血?dú)夥治鰴z測(cè)示家兔氧合指數(shù)均已達(dá)到ARDS診斷標(biāo)準(zhǔn)，即PaO2/FiO2≤300。本實(shí)驗(yàn)選擇健康成年家兔，且實(shí)驗(yàn)過(guò)程中嚴(yán)格限制靜脈入水量，可排除心功能不全及液體過(guò)量負(fù)荷所導(dǎo)致的肺水腫。故可認(rèn)為ARDS家兔模型復(fù)制成功。在干預(yù)5h過(guò)程中OA組家兔均存活下來(lái)。

肺組織病理學(xué)（見(jiàn)圖1，×400倍）：肺組織HE染色病理切片示，CON組肺泡壁結(jié)構(gòu)基本正常。OA組肺組織病理變化基本符合ARDS肺組織病理變化，可見(jiàn)肺組織出血、炎性細(xì)胞浸潤(rùn)、肺泡內(nèi)滲出液以及肺泡內(nèi)透明膜形成。

PaO2、PaCO2、PaO2/FiO2及肺干濕重比：與CON組比較，OA組在1h及5h檢測(cè)PaO2、PaO2/FiO2均顯著降低，差異統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。OA組于5h復(fù)測(cè)血?dú)夥治鍪据^1h測(cè)量PaO2、PaO2/FiO2升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。CON組與OA組各時(shí)間點(diǎn)所測(cè)PaCO2無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。與CON組比較，OA組D/W顯著降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見(jiàn)表1。

討論

自1968年由Ashbaugh DG等人首次報(bào)道用OA成功復(fù)制非心源性肺水腫動(dòng)物模型后，將OA應(yīng)用于ARDS的研究報(bào)道逐漸增多[5]。靜脈注射OA通過(guò)刺激肺動(dòng)脈血管收縮、直接損傷肺泡毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞和抑制鈉離子通道從而促進(jìn)ARDS的發(fā)生，其次OA通過(guò)刺激機(jī)體氧化應(yīng)激反應(yīng)、增高促凝血活性等機(jī)制加重肺損傷反應(yīng)[6-7]。研究表明OA導(dǎo)致動(dòng)物模型死亡主要與血流動(dòng)力學(xué)不穩(wěn)定相關(guān)[8]，注射OA的動(dòng)物在1h內(nèi)出現(xiàn)低血壓和心輸出量降低。本實(shí)驗(yàn)旨在通過(guò)改良OA給藥方法，以達(dá)到在復(fù)制ARDS模型的同時(shí)提高動(dòng)物生存率的目的。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果示，OA組于干預(yù)1h后檢測(cè)血?dú)夥治鍪狙鹾现笖?shù)已達(dá)到ARDS診斷標(biāo)準(zhǔn)，OA組肺組織HE染色病理切片亦符合ARDS病理變化。與CON組比較，OA組各時(shí)間段PaO2、PaO2/FiO2、肺干濕重比均降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。提示注射OA后，家兔出現(xiàn)低氧血癥、肺水腫，這符合ARDS的病理生理變化。證實(shí)OA二次靜脈注射法可成功復(fù)制ARDS模型。OA組家兔于干預(yù)5h后均存活，提示OA二次靜脈注射法較傳統(tǒng)給藥法有助于提高ARDS家兔存活率。必須指出，OA組于5h復(fù)測(cè)血?dú)夥治霰容^1h測(cè)量PaO2、PaO2/FiO2升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），這可能是由于油酸作為一種有毒脂肪酸進(jìn)入家兔體內(nèi)后，在急性毒理作用后家兔機(jī)體自我修復(fù)的結(jié)果。表明家兔作為一種實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，可以一定程度上對(duì)抗OA的毒理作用，減少家兔死亡率。

綜上所述，OA二次靜脈注射法可在短時(shí)間內(nèi)成功復(fù)制ARDS家兔模型，并較傳統(tǒng)給藥方法家兔存活率提高。家兔性格溫馴，易于進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。然而，本實(shí)驗(yàn)為小樣本實(shí)驗(yàn)，且持續(xù)時(shí)間短，需大樣本長(zhǎng)期實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步評(píng)估OA二次靜脈注射法在ARDS家兔模型中的效果。

參考文獻(xiàn)

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綜上所述，OA二次靜脈注射法可在短時(shí)間內(nèi)成功復(fù)制ARDS家兔模型，并較傳統(tǒng)給藥方法家兔存活率提高。家兔性格溫馴，易于進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。然而，本實(shí)驗(yàn)為小樣本實(shí)驗(yàn)，且持續(xù)時(shí)間短，需大樣本長(zhǎng)期實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步評(píng)估OA二次靜脈注射法在ARDS家兔模型中的效果。

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