劉 茜，韓 麗，伊雄海，時逸吟，張 浩，王國明，彭 濤，楊振宇，任 碩

(1. 上海杉達學院，上海 201209；2. 上海出入境檢驗檢疫局，上海 200135；3. 重慶出入境檢驗檢疫局，重慶 400020；4. 中國檢驗檢疫科學研究院，北京 100123)

含油脂食品經(jīng)輻照，食品中的游離脂肪酸和三?；视涂尚纬?-烷基環(huán)丁酮(2-alkylcyclobutanones, 2-ACBs)，2-ACBs有著與母體脂肪酸相同的碳原子數(shù)，且烷基位于2號環(huán)位上。脂肪酸或三?；视偷聂驶跏ヒ粋€電子形成環(huán)狀化合物，再經(jīng)重排形成特定脂肪酸的2-ACBs[1-3]，簡化機理示于圖1。2-十二烷基環(huán)丁酮(2-dodecylcyclobutanone，2-DCB)是棕櫚酸(C16∶0)的輻解產(chǎn)物，2-十四烷基環(huán)丁酮(2-tetradecylcyclobutanone，2-TCB)是硬脂酸(C18∶0)的輻解產(chǎn)物，它們都是2-ACBs的一員[4]。至今，尚未在未經(jīng)輻照的食品中發(fā)現(xiàn)2-ACBs，因此可將其作為鑒定輻照油脂類食品的標志物。

目前有豬肉[5]、雞肉、魚肉[6-7]、花生、餅干[8]和牛肉[9]等含脂食品中2-ACBs檢測方法的報道，所使用的檢測技術(shù)有GC/MS法[10-11]和HPLC-ESI-MS/MS法[12]。但未見輻照油脂類功能食品，如魚油、南瓜籽油、大蒜油軟膠囊等的報道。

由于軟膠囊類基質(zhì)復(fù)雜，2-ACBs是脂溶性化合物，很難與基質(zhì)分離，而串聯(lián)質(zhì)譜具有高選擇性與高靈敏度，能夠?qū)?fù)雜基質(zhì)中的痕量物質(zhì)進行確證分析[13-14]。因此，本研究擬通過優(yōu)化固相萃取(SPE)條件，采用氣相色譜-三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜法(GC-QqQ-MS/MS)同時測定油脂類功能食品中輻照標志物2-DCB和2-TCB，旨為該類食品的檢測工作提供理論依據(jù)。

圖1 2-烷基環(huán)丁酮形成的簡化機理Fig.1 The simplified mechanism of 2-alkylcyclobutanones

1 實驗部分

1.1 儀器和材料、試劑

7890A-7000型氣相色譜-三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜儀：美國Agilent公司產(chǎn)品；ProElut Silica硅膠固相萃取柱(2 g/12 mL)，12孔固相萃取裝置：上海Dikma公司產(chǎn)品；R-215型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀：瑞士Buchi公司產(chǎn)品；XS603S型電子天平：美國Mettler Toledo公司產(chǎn)品。

魚油、南瓜籽油、亞麻籽油和大蒜油軟膠囊：均為未經(jīng)輻照的空白樣品；2-DCB、2-TCB標準品(純度≥98 %)：美國Sigma公司產(chǎn)品；正己烷(色譜純)：美國J.T.Baker 公司產(chǎn)品；叔丁基甲醚(色譜純)：美國Sigma公司產(chǎn)品；水為超純水。

1.2 實驗方法

1.2.1標準溶液的配制 分別準確稱取100 mg 2-DCB和2-TCB標準品于100 mL容量瓶中，用正己烷定容至刻度，搖勻，分別得到1.0 g/L 標準儲備液。

1.2.2輻照處理 通過60Co輻照源進行輻照(中國科學院上海輻照中心)，劑量率為0.5 kGy/h，空白魚油、南瓜籽油、亞麻籽油和大蒜油軟膠囊樣品的輻照劑量分別為0.5、1.0、2.0、5.0、8.0、10.0 kGy。

1.2.3樣品處理 稱取0.30 g樣品(精確至0.001 g)于具塞離心管中，加入2 mL 正己烷，充分渦旋混合，待凈化。依次用10 mL叔丁基甲醚，10 mL正己烷緩慢潤濕固相萃取柱，活化填料；將待凈化液轉(zhuǎn)移至萃取柱，棄去流出液；用10 mL正己烷淋洗；20 mLV(叔丁基甲醚)∶V(正己烷)=1∶99的溶液洗脫，250 mL旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)瓶接收。整個過程的流速控制在1 mL/min，直至洗脫液完全自然滴出。在35 ℃下，減壓蒸餾至約2 mL后，自然揮干，用正己烷定容至1 mL，待GC-QqQ-MS/MS分析。

1.2.4色譜條件 色譜柱：DB-5MS(30.0 m×0.25 mm×0.25 μm)；載氣He(99.995%)；恒流，流速1.0 mL/min；不分流進樣，進樣量1 μL，進樣口溫度260 ℃；程序升溫：起始溫度80 ℃，保持1 min，以15 ℃/min升至150 ℃，再以8 ℃/min升至200 ℃，然后以20 ℃/min升至260 ℃，保持5 min。

1.2.5質(zhì)譜條件 電子轟擊離子化(EI)，離子源溫度200 ℃，電離能量70 eV，傳輸線溫度280 ℃，溶劑延遲時間5.0 min。

2 結(jié)果與討論

2.1 固相萃取柱的選擇

對于油脂類樣品，采用固相萃取柱進行樣品凈化是必不可少的步驟。本實驗采用了ProElut Silica柱、硅膠柱[15-16]、中性氧化鋁柱[12]、Florisil柱[17-18]、PSA柱等固相萃取柱以及GPC方法進行樣品的凈化。由于2-ACBs的分子質(zhì)量較小，利用GPC方法的保留時間短，有大量雜質(zhì)干擾，無法進行定性定量分析，因此沒有選用GPC方法。對于油脂類功能性食品，ProElut Silica柱相對于其他填料的固相萃取柱來說，2-DCB和2-TCB的回收率較高，能更好的排除雜質(zhì)干擾，達到良好的凈化效果，可以滿足分析檢測的要求，樣品檢測的色譜圖示于圖2。

2.2 質(zhì)譜條件的優(yōu)化

首先用1.0 mg/L混合標準溶液進行全掃描分析，獲得2-DCB和2-TCB的一級質(zhì)譜圖。對一級質(zhì)譜圖進行分析，比較各碎片離子的相對豐度，選擇豐度較高的2～3個離子作為母離子。每個化合物選擇1個母離子，設(shè)定不同的碰撞能量，對其產(chǎn)生的二級質(zhì)譜碎片離子進行掃描，得到子離子掃描質(zhì)譜圖，選擇響應(yīng)最好的2～3個碎片離子作為子離子。對不同的母離子、子離子以及碰撞電壓進行優(yōu)化，結(jié)果列于表1。

圖2 未輻照魚油樣品(a)，0.03 mg/L 2-DCB和2-TCB標準品(b)，未輻照加標魚油樣品(0.1 mg/kg魚油，c)，輻照未加標魚油樣品(2 kGy，d)的GC-QqQ-MS/MS色譜圖Fig.2 GC-QqQ-MS/MS chromatograms of non-irradiated fish oil (a), 2-DCB and 2-TCB at 0.03 mg/L (b), non-irradiated fish oil spiked at 0.1 mg/kg (c) and non-spiked fish oil irradiated at 2 kGy (d)

化合物 保留時間/min 母離子(m/z) 子離子(m/z) 碰撞能量/eV2-DCB12.19883*,703,32-TCB13.911297*,843,3

注：*為定量離子

2.3 方法學驗證

2.3.1標準曲線 分別取適量1.0 g/L 2-DCB和2-TCB標準儲備液，用正己烷配制成濃度為0.005、0.02、0.1、0.5、1.0 mg/L系列標準工作溶液。按優(yōu)化的GC-QqQ-MS/MS條件，取1 μL進樣，以響應(yīng)值(y)對質(zhì)量濃度(x)進行線性回歸，回歸方程分別為y=60.613 6x-171.295 5和y=19.779 5x-78.831 8，線性相關(guān)系數(shù)(R2)分別為0.999 8和0.999 9。

2.3.2回收率、精密度和檢測限 未輻照樣品中不含有2-ACBs，對4種油脂類功能食品進行回收率實驗。每個樣品添加量分別為0.01、0.05、0.10 mg/kg，每一添加水平的樣品數(shù)為6個，樣品處理和測定按1.2.3～1.2.5進行。分別測定添加樣品中2-ACBs的含量，計算添加回收率，加標樣品的回收率及精密度列于表2。由表2可見，平均添加回收率為85.6%～97.1%，相對標準偏差(RSD)小于7.0%(n=6)。按照10倍信噪比(S/N)確立的方法，定量限(LOQ)為5 μg/kg。

表2 2-DCB和2-TCB的加標回收率及相對標準偏差

2.4 輻照劑量對輻照油脂類功能性食品中2-ACBs含量的影響

該研究中油脂類功能性食品的輻照劑量分別為0.5、1.0、2.0、5.0、8.0和10.0 kGy，輻照標志物2-DCB和2-TCB濃度與輻照劑量的關(guān)系示于圖3。從圖3可見，在0.5～10.0 kGy輻照劑量范圍內(nèi)，輻照劑量與輻照油脂類功能性食品中2-DCB和2-TCB濃度呈線性正相關(guān)關(guān)系，這與文獻[19-20]的結(jié)果一致。2-DCB的回歸方程分別為ya=54.161x+20.123(R2=0.999 4)；yb=41.214x+7.137(R2=0.995 6)；yc=46.094x-9.915(R2=0.999 9)；yd=48.658x+28.806(R2=0.996 4)；2-TCB的回歸方程分別為ya=20.907x+6.996(R2=0.999 2)；yb=19.285x+2.823(R2=0.995 7)；yc=17.099x+6.814(R2=0.996 6)；yd=18.267x+7.989(R2=0.996 2)。

理論上，該方法不僅能夠?qū)?jīng)過輻照的油脂類功能食品進行定性鑒別，也可以準確定量，并根據(jù)2-ACBs含量判斷其經(jīng)輻照的劑量。事實上，樣品貯藏時間、溫度等環(huán)境條件會對其產(chǎn)生的2-ACBs有不同程度的降解，雖然不同劑量與2-ACBs含量之間存在線性關(guān)系，但無法準確、有效的定量。因此，該方法的研究意義在于對油脂類功能食品是否經(jīng)過輻照給予定性鑒定。

圖3 輻照劑量對輻照油脂類功能性食品中2-DCB和2-TCB含量的影響Fig.3 The influence of irradiation dose to 2-DCB and 2-TCB of irradiated fat-containing function foods

3 結(jié)論

本實驗建立了ProElut Silica固相萃取柱凈化、GC-QqQ-MS/MS同時測定輻照油脂類功能食品中2-DCB和2-TCB的方法，并應(yīng)用于實際樣品的檢測。實驗優(yōu)化了前處理條件和儀器條件，并對4種軟膠囊樣品進行檢測。該方法可有效地排除軟膠囊樣品基質(zhì)的干擾，檢測結(jié)果準確、靈敏、穩(wěn)定，能為輻照油脂類功能食品中輻照標志物的檢測提供理論依據(jù)。

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