鄭雪梅，易 蘭

(1. 重慶市合川中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院，重慶 401520; 2. 西南大學榮昌校區(qū)，重慶 402460)

木瓜素有“百益果王”之稱，分為薔薇科木瓜屬植物木瓜與熱帶水果番木瓜科木瓜(即番木瓜Carica papaya Linn.)兩種[1-2]。薔薇科木瓜可食用、藥用，花色美麗，可供觀賞[1]。番木瓜是番木瓜科(Caricaceae)植物的果實，原產(chǎn)東南亞地區(qū)，可食用和藥用，但不供觀賞[2]。番木瓜既可作為食品，在傳統(tǒng)醫(yī)藥中又作為抗菌和避孕藥物使用。番木瓜廣泛種植于世界各地，中國是主要生產(chǎn)國之一。伊朗德黑蘭大學的Mehdipour 等研究發(fā)現(xiàn)，番木瓜果汁具有顯著的抗氧化活性。研究發(fā)現(xiàn)，薔薇科木瓜屬植物所含木瓜總皂苷及白芍總苷對免疫性關(guān)節(jié)炎大鼠血液的濃、黏、凝、聚狀態(tài)具有不同程度的改善作用[3-6];木瓜總苷具有抗炎作用[7-8]。但目前關(guān)于番木瓜是否具有抗炎活性，尚未見相關(guān)報道。本研究中擬對番木瓜的抗炎活性進行研究，報道如下。

1 儀器和試藥、動物

FA2104A 型電子分析天平(上海精天電子儀器廠);3K15 型高速臺式冷凍離心機(美國Sigma 公司);HH-W420 型數(shù)顯恒溫三用水箱(江蘇榮華儀器公司);UV-1800 型分光光度計(日本HITACHI 公司);超純水儀(美國Millipore 公司);KQ5200DB 型超聲波清洗器(江蘇昆山超聲儀器有限公司)。二甲苯、NaCl、冰醋酸、無水乙醇、甲醇、KOH、角叉菜膠均購于重慶東方化學試劑公司;丙二醛(MDA)測試盒、超氧化物歧化酶(SOD)試劑盒、腫瘤壞死因子α(TNF-α)試劑盒和一氧化氮(NO)化學法試劑盒等均購于南京建成生物工程研究所。昆明種小鼠，體重18 ～20 g，SPF級，購自第三軍醫(yī)大學實驗動物中心，動物合格證編號為

712099。

2 方法與結(jié)果

2.1 乙醇浸膏提取

取干燥番木瓜片100 g，粉碎，過40 目篩，用40%乙醇750 mL在50 ℃水浴中回流提取1.5 h，過濾;藥渣再加入40%乙醇750 mL回流提取1 h，過濾。合并2 次濾液，70 ℃下濃縮得到乙醇浸膏。

2.2 試驗分組及處理[9]

將30 只雄性小鼠隨機分為番木瓜乙醇浸膏高、低劑量組(A1組、A2組)和生理鹽水組(B 組)等3 組，每組10 只。A1組和A2組小鼠分別按每1 kg 體重灌胃2.0 g 和1.0 g 番木瓜乙醇浸膏，B組小鼠灌胃等容積的生理鹽水。番木瓜浸膏溶于純化水中，每只小鼠灌胃容積均為每10 g 體重0.2 mL，每天灌胃1 次，連續(xù)7 d。

2.3 二甲苯致炎試驗[9]

試驗動物分組及給藥方式同2.2 項，第7 天給藥后1 h，以移液槍移取0.15 mL 二甲苯滴加上小鼠右耳，用棉球均勻涂抹小鼠右耳雙側(cè)，15 min 后頸椎脫臼處死動物，用直徑8 mm 皮帶沖于左右耳廓相對應部位各打下一耳片，稱重，以左右耳片重之差為腫脹度，計算各組腫脹度值及耳腫脹抑制率，并與B 組比較。耳腫脹度=右耳重-左耳重，耳腫脹抑制率% = [(B 組耳腫脹度-A 組耳腫脹度)/B 組耳腫脹度] ×100%。結(jié)果見表1?？梢?，以二甲苯涂抹小鼠耳廓兩面后，可引起鼠耳明顯腫脹;灌胃2.0 g/kg 和1.0 g/kg 番木瓜浸膏均可使鼠耳腫脹度顯著降低，與B 組比較，差異均非常顯著(P ＜0.01)，說明番木瓜乙醇浸膏具有較好的抑制二甲苯誘導小鼠耳腫脹作用。

表1 番木瓜乙醇浸膏對小鼠二甲苯致耳腫脹及角叉菜膠致足腫脹的影響(± s，n=10)

表1 番木瓜乙醇浸膏對小鼠二甲苯致耳腫脹及角叉菜膠致足腫脹的影響(± s，n=10)

注:與B 組比較，△P ＜0.05，▲P ＜0.01。表2 同。

二甲苯致炎試驗 角叉菜膠致炎試驗組別給藥劑量(g/kg)A1 組A2 組B 組2.0 1.0同體積耳廓腫脹度(mg)2.01±0.45▲3.19±2.82▲6.87±2.52抑制率(%)70.74 53.57-足腫脹度(mg)28.1±12.08▲33.1±9.6△42.6±12.95抑制率(%)34.38 22.30-

2.4 角叉菜膠致炎試驗[9]

試驗動物分組及給藥方式見2.2 項，第7 天給藥后1 h，在左后足跖注射1%角叉菜膠50 μL 致炎，于致炎后4 h 于踝關(guān)節(jié)處剪下左右后肢，稱重，以左右后肢重之差作為炎癥腫脹程度。足腫脹度=左后肢量-右后肢量，足腫脹抑制率% =[(B 組足腫脹度-A 組足腫脹度)/B 組足腫脹度] ×100%。將炎足剝皮剪碎，放入2.5 mL 生理鹽水中浸泡40 min，3 000 r/min 離心15 min，上清液即為炎足上清液，于-20℃冰箱保存，備用。結(jié)果見表1?？梢?，角叉菜膠能引起小鼠足爪腫脹反應，灌胃高、低劑量番木瓜乙醇浸膏均能抑制角叉菜膠所致小鼠足爪腫脹，差異顯著(P ＜0.05 或P ＜0.01)，高劑量番木瓜乙醇浸膏抗炎效果優(yōu)于低劑量。

2.5 對炎足上清液中炎性因子及氧化損傷因子含量的影響

取2.4 項下制備的炎足上清液0.5 mL，加0.5 mol/L KOH甲醇液2 mL，在50 ℃下異構(gòu)化20 min，用甲醇稀釋至4 mL，于278 nm 波長處測定吸光度(OD)值，以每g 炎性組織相對應的吸光度值表示前列腺素E2(PGE2)的含量[10]。MDA，NO，TNF-α 含量的測定按照試劑盒說明操作[9]。結(jié)果見表2?？梢?，番木瓜乙醇浸膏灌胃可抑制角叉菜膠所致小鼠炎足上清液中PGE2含量，高劑量抑制作用顯著(P ＜0.05)，低劑量抑制作用不顯著(P ＞0.05);番木瓜乙醇浸膏灌胃時高、低劑量對角叉菜膠所致小鼠炎足上清液中MDA 均有抑制作用(P ＜0.05)，且灌胃劑量越大，抑制作用越好;番木瓜乙醇浸膏灌胃時高劑量、低劑量均能導致小鼠炎足上清液中NO 含量升高，高劑量組升高顯著(P ＜0.05)，低劑量組升高不明顯(P ＞0.05)。番木瓜乙醇浸膏灌胃時高劑量與低劑量均能導致小鼠炎足上清液中TNF -α 含量下降，高劑量組下降顯著(P ＜0.05)，低劑量組下降不顯著(P ＞0.05)。

表2 番木瓜乙醇浸膏對角叉菜膠致小鼠炎足中炎性因子及氧化損傷因子含量的影響(± s，n=10)

表2 番木瓜乙醇浸膏對角叉菜膠致小鼠炎足中炎性因子及氧化損傷因子含量的影響(± s，n=10)

組別PGE2(OD 值)MDA(nmol/mgprot)NO(μmol/L)SOD(U/mL)TNF-α(ng/L)A1 組(2.0 g/kg)0.42 ±0.82△1.42 ±0.85△1.28 ±3.51△112.42 ±6.85 34.02 ±0.95△A2 組(1.0 g/kg)0.59 ±1.65 1.89 ±0.65△1.12 ±0.55 101.98 ±7.55 43.71 ±24.46 B 組0.67 ±0.29 3.07 ±10.29 1.07 ±8.29 103.07 ±8.29 48.83 ±7.27

2.6 對致炎小鼠血清中SOD 含量的影響[9]

試驗動物分組及給藥方式同2.2 項，用對角叉菜膠致炎按照2.4 項下方法進行。于致炎4 h 后，眼眶靜脈取血，血樣靜置15 min 后，2 500 r/min 離心10 min，取上清液(血清)0.2 mL，按照試劑盒說明操作測定致炎小鼠血清中SOD 含量。結(jié)果見表3?？梢?，番木瓜乙醇浸膏灌胃高劑量能導致小鼠血清中SOD 含量升高，但作用不顯著(P ＞0.05)，而低劑量則無此作用。

3 討論

“十病九炎”。炎癥是一種極常見而又十分重要的基本病理過程，也是人類以防御性為主的一種保護性反應。在炎癥過程中，由細胞釋放或體液中產(chǎn)生的PGE2，MDA，NO，TNF-α 和白細胞介素1α(IL-1α)等炎性因子通過各種途徑作用于血管，使血管擴張、通透性增加，引起滲出，吸引白細胞到達炎癥部位，導致組織損傷，引起局部炎癥反應和全身反應。

抗炎試驗多采用化學致炎劑二甲苯引起某些炎癥，角叉菜膠所致小鼠炎足中，也可能是造成了過多炎性因子的釋放。番木瓜乙醇浸膏的高、低劑量可有效緩解二甲苯所致耳廓腫脹，以及減輕小鼠炎足腫脹度的作用，說明其對炎癥反應早期的急性滲出性腫脹有明顯的抑制作用。PGE2是重要的炎性因子，灌胃高劑量番木瓜乙醇浸膏能降低角叉菜膠所致小鼠炎足上清液中PGE2含量，具有明顯抗炎作用。MDA 是氧自由基攻擊生物膜中不飽和脂肪酸而形成的脂質(zhì)過氧化物，可反映出機體內(nèi)脂質(zhì)過氧化和機體細胞受自由基攻擊的損傷程度。番木瓜乙醇浸膏灌胃高、低劑量能降低角叉菜膠所致小鼠炎足上清液中MDA 含量，且浸膏灌胃劑量越大，抑制作用越好。NO 作為自由基，可以損傷正常細胞，在心肌和腦組織缺血-再灌注損傷過程中起著重要的作用，低濃度的NO 促進細胞凋亡，NO 含量過低可造成血管過度擴張和滲漏、氣道充血、加重氣道炎癥反應和組織損傷[11-13]。高劑量番木瓜灌胃能導致小鼠炎足上清液中NO 的含量升高，說明能減少炎癥反應。TNF-α 也是炎性反應介質(zhì)，番木瓜灌胃高劑量與低劑量均能導致小鼠炎足上清液中TNF-α 含量下降，降低炎性因子水平。SOD 是機體內(nèi)清除氧自由基的重要抗氧化酶，對機體的氧化與抗氧化平衡至關(guān)重要，能清除超氧陰離子自由基(O2-)，保護細胞免受損傷。SOD 活力的高低間接反映了機體清除氧自由基的能力，是反映細胞膜功能和機體炎性反應的主要指標[13]。番木瓜乙醇浸膏灌胃高劑量也不顯著升高小鼠血清中SOD 含量，說明炎性反應中炎性介質(zhì)的種類是多樣的，機體中不同炎性介質(zhì)對同一種抗炎物質(zhì)的反應還存在一定差異。

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