高瑋+金沁+趙冉

摘要：了解上海市貝類(lèi)產(chǎn)品副溶血性弧菌（VP）污染狀況，為貝類(lèi)產(chǎn)品中副溶血性弧菌的中毒防控和預(yù)警提供依據(jù)。采用GB/T 4789.7—2008《食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn)副溶血性弧菌檢驗(yàn)》測(cè)定方法，從海瓜子、文蛤、牡蠣、花蛤、竹蟶、扇貝836份貝類(lèi)中分離鑒定得到224株副溶血性弧菌，貝類(lèi)產(chǎn)品平均帶菌檢出率為26.8%，其中扇貝和牡蠣的帶菌率較高，分別為33.33%和33.13%。結(jié)果表明貝類(lèi)產(chǎn)品副溶血性弧菌污染率較高。

關(guān)鍵詞：貝類(lèi)；副溶血性弧菌；污染

中圖分類(lèi)號(hào)： X714；X172文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A文章編號(hào)：1002-1302（2014）02-0258-02

收稿日期：2013-06-18

作者簡(jiǎn)介：高瑋（1984—），女，安徽滁州人，碩士，助理工程師，主要從事微生物檢測(cè)工作。Tel：（021）65482263；E-mail：wissic520@163.com。

通作作者：金沁，工程師。Tel：（021）65482263；E-mail：karenucan@163.com。副溶血性弧菌廣泛分布于近岸海水、海底沉積物和海產(chǎn)品中，是引起我國(guó)細(xì)菌性食物中毒危害的首要食源性致病菌，特別是在一些沿海城市由該菌引起的食物中毒占細(xì)菌性食物中毒總數(shù)的比例高達(dá)60%以上[1]。有調(diào)查結(jié)果證實(shí)，從海水和健康的貝類(lèi)內(nèi)臟中曾多次分離到副溶血性弧菌[2-3]。貝類(lèi)是濾過(guò)性攝食，并且多生活在海底泥沙中，使得它們體內(nèi)得到副溶血性弧菌的“濃縮”而帶菌率較高。雖然我國(guó)是目前世界上主要的貝類(lèi)出口國(guó)之一，但對(duì)貝類(lèi)產(chǎn)品的衛(wèi)生管理卻遠(yuǎn)落后于發(fā)達(dá)國(guó)家，目前我國(guó)貝類(lèi)產(chǎn)品無(wú)法出口歐盟和美國(guó)。本研究為了解上海市常見(jiàn)不同種類(lèi)貝類(lèi)產(chǎn)品中副溶血性弧菌的污染狀況，2011年1月—2012月1月對(duì)市場(chǎng)出售的不同類(lèi)型的海產(chǎn)品共836份樣品進(jìn)行副溶血性弧菌的污染調(diào)查，為今后貝類(lèi)產(chǎn)品的副溶血性弧菌風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估和預(yù)警奠定基礎(chǔ)。

1材料與方法

1.1樣品來(lái)源

按照《海洋監(jiān)測(cè)規(guī)范第3部分》[4]，對(duì)上海市各大超市賣(mài)場(chǎng)的海瓜子、文蛤、牡蠣、花蛤、竹蟶、扇貝進(jìn)行隨機(jī)抽檢樣品。按照無(wú)菌采樣原則采集，采樣時(shí)間為2011年1月至2012年1月，每周采樣1次。采樣后置4 ℃保存，樣品種類(lèi)及采集數(shù)量見(jiàn)表1，3～8 h內(nèi)檢驗(yàn)。

菌株：副溶血性弧菌標(biāo)準(zhǔn)菌株ATCC33846、ATCC17802，購(gòu)自中國(guó)科學(xué)院微生物研究所。

1.2培養(yǎng)基及試劑

硫代硫酸鹽-檸檬酸鹽-膽鹽-蔗糖（TCBS）瓊脂、胰蛋白胨大豆（TSA）瓊脂、營(yíng)養(yǎng)肉湯及細(xì)菌鑒定生化試劑購(gòu)自上海市疾病預(yù)防控制中心，科瑪嘉培養(yǎng)基購(gòu)于上?？片敿挝⑸锛夹g(shù)有限公司。

1.3副溶血性弧菌的分離

貝類(lèi)樣品取貝類(lèi)的全部?jī)?nèi)容物（貝肉和液體），參照 GB/T 4789.7—2008 《食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn)副溶血性弧菌檢驗(yàn)》的分離方法進(jìn)行分離，每份樣品重復(fù)3次。無(wú)菌操作稱取試樣25 g，加入225 mL無(wú)菌堿性蛋白胨水（APW），均質(zhì)1 min制成均勻稀釋液，于36.5 ℃培養(yǎng)18 h。增菌液接種于TCBS平板36.5 ℃培養(yǎng)20 h，每板挑取2～3個(gè)可疑菌落劃線科瑪嘉弧菌顯色平板，置36.5 ℃培養(yǎng)24 h。挑取5個(gè)可疑菌落劃線3.5% NaCl 胰蛋白胨大豆瓊脂平板（TSA），36.5 ℃培養(yǎng)24 h。

1.4分離菌株的鑒定

參照GB/T 4789.7—2008，刮取TSA上的菌苔進(jìn)行三糖鐵試驗(yàn)、氧化酶試驗(yàn)、形態(tài)學(xué)鑒定、嗜鹽性試驗(yàn)和生理生化鑒定。

1.4.1初步鑒定挑取純培養(yǎng)的單個(gè)可疑菌落按順序進(jìn)行氧化酶、革蘭氏染色試驗(yàn)、3%氯化鈉三糖鐵試驗(yàn)和嗜鹽性試驗(yàn)，于36.5 ℃培養(yǎng)24 h觀察結(jié)果。

1.4.2確定試驗(yàn)挑取TSA上的純培養(yǎng)物接種于3%氯化鈉的甘露醇、賴氨酸、MR-VP培養(yǎng)基，36.5 ℃培養(yǎng)48 h觀察結(jié)果，隔夜培養(yǎng)物進(jìn)行ONPG試驗(yàn)；將純培養(yǎng)物制成懸濁液，用全自動(dòng)微生物鑒定儀（VITEK-2）鑒定。

副溶血性弧菌標(biāo)準(zhǔn)菌株（ATCC33846、ATCC17802）作為標(biāo)準(zhǔn)菌株進(jìn)行對(duì)照。

1.5統(tǒng)計(jì)方法

數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析采用SPSS1 1.5軟件χ2檢驗(yàn)，比較樣品中陽(yáng)性率的差異。

2結(jié)果與分析

2.1分離、鑒定結(jié)果

在TCBS瓊脂上得到256株藍(lán)色或藍(lán)綠色菌落，其余為黃色和黑色菌落。轉(zhuǎn)接至科瑪嘉顯色平板上得到紫紅色菌落224個(gè)。在科瑪嘉顯色平板分離的224株經(jīng)初篩試驗(yàn)和生化鑒定結(jié)果均為副溶血性弧菌（表2）。最后用全自動(dòng)微生物鑒定儀（VITEK-2）鑒定，結(jié)果于上述一致。

2.2貝類(lèi)產(chǎn)品中副溶血性弧菌檢出率

6種貝類(lèi)產(chǎn)品共836份分離得到224株副溶血性弧菌，平均檢出率為26.8%。不同種貝類(lèi)中副溶血性弧菌檢出率

3討論

本試驗(yàn)采集的樣品是海瓜子、文蛤、牡蠣、花蛤、竹蟶和扇貝，均為海水養(yǎng)殖品，是居民餐桌上極為常見(jiàn)的貝類(lèi)產(chǎn)品。7、8、9月是上海市副溶血性弧菌致集體性食物中毒的高峰[5]。因此采樣時(shí)間選擇為2011年1月到2012年的1月，調(diào)查結(jié)果有一定的代表性。結(jié)果顯示貝類(lèi)產(chǎn)品中副溶血性弧菌平均檢出率為26.8%，略低于安秀華等的貝類(lèi)產(chǎn)品副溶血性弧菌檢出率檢出率（27.2%）[6]，更低于趙虹等的副溶血性弧菌檢出率（50.0%）[7]。原因可能是由于本調(diào)查中的樣品均采自于超市賣(mài)場(chǎng)，不同于安秀華等的農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)，超市賣(mài)場(chǎng)在物流或者暫養(yǎng)過(guò)程中潔凈程度略高。

調(diào)查中發(fā)現(xiàn)不同種貝類(lèi)中副溶血性弧菌的檢出率不同，有顯著差異。提示市售貝類(lèi)產(chǎn)品的質(zhì)量不僅與品種有關(guān)，可能與養(yǎng)殖環(huán)境等其他因素有關(guān)，Kaspar等發(fā)現(xiàn)，硬殼蛤?qū)ξ⑸锏姆e累量與溫度有關(guān)，在11.5～21.5 ℃的春季積累量最大[8]；江海洋等的研究結(jié)果表明副溶血性弧菌（VP）污染程度與其生長(zhǎng)的水質(zhì)有一定的相關(guān)性[9]；Son等的研究結(jié)果表明生長(zhǎng)環(huán)境的水質(zhì)直接影響雙殼貝類(lèi)的安全性[10]。endprint

美國(guó)國(guó)家貝類(lèi)衛(wèi)生計(jì)劃（NSSP）表示，對(duì)貝類(lèi)養(yǎng)殖場(chǎng)的監(jiān)測(cè)管理，是貝類(lèi)及其產(chǎn)品質(zhì)量安全衛(wèi)生控制的基礎(chǔ)工作。不同的養(yǎng)殖環(huán)境，即使是同一貝類(lèi)產(chǎn)品，體內(nèi)副溶血性弧菌的帶菌率差異很大。我國(guó)沿海地區(qū)居民常有生食或半生食貝類(lèi)、甲殼類(lèi)等海產(chǎn)品的習(xí)慣，近年來(lái)內(nèi)地城市也開(kāi)始流行生吃海產(chǎn)品。貝類(lèi)產(chǎn)品在生產(chǎn)流通銷(xiāo)售各環(huán)節(jié)中也容易受環(huán)境影響被污染或者變質(zhì)。經(jīng)調(diào)查，大型超市及批發(fā)市場(chǎng)的貝類(lèi)產(chǎn)品都會(huì)經(jīng)過(guò)暫養(yǎng)和凈化過(guò)程后才能上市銷(xiāo)售。因此，消費(fèi)者應(yīng)在大型超市、批發(fā)市場(chǎng)等正規(guī)渠道購(gòu)買(mǎi)貝類(lèi)產(chǎn)品。邵玉芳等的研究結(jié)果說(shuō)明由于副溶血性弧菌不耐熱，56 ℃加熱 5 min 或90 ℃加熱1 min即可將其殺滅，或以1%食醋處理 5 min，可大大降低風(fēng)險(xiǎn)[11]。連續(xù)的監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)有助于確定貝類(lèi)采集區(qū)域的細(xì)菌水平，促進(jìn)貝類(lèi)養(yǎng)殖行業(yè)實(shí)施污染源頭跟蹤管理，為市場(chǎng)創(chuàng)造良好的原料供應(yīng)源。同時(shí)，消費(fèi)者應(yīng)關(guān)注國(guó)家有關(guān)部門(mén)的消費(fèi)預(yù)警公告，勿使用處于預(yù)警期有安全隱患的貝類(lèi)。

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美國(guó)國(guó)家貝類(lèi)衛(wèi)生計(jì)劃（NSSP）表示，對(duì)貝類(lèi)養(yǎng)殖場(chǎng)的監(jiān)測(cè)管理，是貝類(lèi)及其產(chǎn)品質(zhì)量安全衛(wèi)生控制的基礎(chǔ)工作。不同的養(yǎng)殖環(huán)境，即使是同一貝類(lèi)產(chǎn)品，體內(nèi)副溶血性弧菌的帶菌率差異很大。我國(guó)沿海地區(qū)居民常有生食或半生食貝類(lèi)、甲殼類(lèi)等海產(chǎn)品的習(xí)慣，近年來(lái)內(nèi)地城市也開(kāi)始流行生吃海產(chǎn)品。貝類(lèi)產(chǎn)品在生產(chǎn)流通銷(xiāo)售各環(huán)節(jié)中也容易受環(huán)境影響被污染或者變質(zhì)。經(jīng)調(diào)查，大型超市及批發(fā)市場(chǎng)的貝類(lèi)產(chǎn)品都會(huì)經(jīng)過(guò)暫養(yǎng)和凈化過(guò)程后才能上市銷(xiāo)售。因此，消費(fèi)者應(yīng)在大型超市、批發(fā)市場(chǎng)等正規(guī)渠道購(gòu)買(mǎi)貝類(lèi)產(chǎn)品。邵玉芳等的研究結(jié)果說(shuō)明由于副溶血性弧菌不耐熱，56 ℃加熱 5 min 或90 ℃加熱1 min即可將其殺滅，或以1%食醋處理 5 min，可大大降低風(fēng)險(xiǎn)[11]。連續(xù)的監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)有助于確定貝類(lèi)采集區(qū)域的細(xì)菌水平，促進(jìn)貝類(lèi)養(yǎng)殖行業(yè)實(shí)施污染源頭跟蹤管理，為市場(chǎng)創(chuàng)造良好的原料供應(yīng)源。同時(shí)，消費(fèi)者應(yīng)關(guān)注國(guó)家有關(guān)部門(mén)的消費(fèi)預(yù)警公告，勿使用處于預(yù)警期有安全隱患的貝類(lèi)。

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美國(guó)國(guó)家貝類(lèi)衛(wèi)生計(jì)劃（NSSP）表示，對(duì)貝類(lèi)養(yǎng)殖場(chǎng)的監(jiān)測(cè)管理，是貝類(lèi)及其產(chǎn)品質(zhì)量安全衛(wèi)生控制的基礎(chǔ)工作。不同的養(yǎng)殖環(huán)境，即使是同一貝類(lèi)產(chǎn)品，體內(nèi)副溶血性弧菌的帶菌率差異很大。我國(guó)沿海地區(qū)居民常有生食或半生食貝類(lèi)、甲殼類(lèi)等海產(chǎn)品的習(xí)慣，近年來(lái)內(nèi)地城市也開(kāi)始流行生吃海產(chǎn)品。貝類(lèi)產(chǎn)品在生產(chǎn)流通銷(xiāo)售各環(huán)節(jié)中也容易受環(huán)境影響被污染或者變質(zhì)。經(jīng)調(diào)查，大型超市及批發(fā)市場(chǎng)的貝類(lèi)產(chǎn)品都會(huì)經(jīng)過(guò)暫養(yǎng)和凈化過(guò)程后才能上市銷(xiāo)售。因此，消費(fèi)者應(yīng)在大型超市、批發(fā)市場(chǎng)等正規(guī)渠道購(gòu)買(mǎi)貝類(lèi)產(chǎn)品。邵玉芳等的研究結(jié)果說(shuō)明由于副溶血性弧菌不耐熱，56 ℃加熱 5 min 或90 ℃加熱1 min即可將其殺滅，或以1%食醋處理 5 min，可大大降低風(fēng)險(xiǎn)[11]。連續(xù)的監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)有助于確定貝類(lèi)采集區(qū)域的細(xì)菌水平，促進(jìn)貝類(lèi)養(yǎng)殖行業(yè)實(shí)施污染源頭跟蹤管理，為市場(chǎng)創(chuàng)造良好的原料供應(yīng)源。同時(shí)，消費(fèi)者應(yīng)關(guān)注國(guó)家有關(guān)部門(mén)的消費(fèi)預(yù)警公告，勿使用處于預(yù)警期有安全隱患的貝類(lèi)。

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