於敏等

摘要：將96頭28日齡斷奶仔豬隨機(jī)分為4組，分別為卡介菌多糖核酸高劑量組（60 μg/kg）、中劑量組（30 μg/kg）、低劑量組（15 μg/kg）、空白對(duì)照組，仔豬按照分組要求注射給藥。分別于注射前、注射后5、10、15、20 d前腔靜脈采血，分離血清，測(cè)定血清中總超氧化物歧化酶（T-SOD）、脂質(zhì)過(guò)氧化物（LPO）、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（GSH-PX）、IgG、IgM含量。結(jié)果表明：卡介菌多糖核酸能顯著提高仔豬血清中T-SOD、GSH-PX、IgG、IgM含量，顯著降低LPO含量，且這種抗氧化和免疫增強(qiáng)作用和用藥時(shí)間、劑量有相關(guān)性。

關(guān)鍵詞：卡介菌多糖核酸；抗氧化；免疫活性；斷奶仔豬

中圖分類(lèi)號(hào)： S858.28 文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A 文章編號(hào)：1002-1302（2014）04-0152-03

收稿日期：2013-08-25

基金項(xiàng)目：江蘇農(nóng)牧科技職業(yè)學(xué)院橫向課題（編號(hào)：PT1209）。

作者簡(jiǎn)介：於敏（1982—），女，江蘇南京人，碩士，講師，主要從事免疫增強(qiáng)劑開(kāi)發(fā)及病理學(xué)研究。E-mail：42019802@qq.com?？ń榫嗵呛怂幔˙CG-PSN） 是從卡介菌中經(jīng)熱酚法處理后提取的新型免疫調(diào)節(jié)劑，含有多糖、核酸等多種免疫活性物質(zhì)。BCG-PSN 具有免疫調(diào)節(jié)及抗炎作用，在改善免疫功能、抗過(guò)敏、抗感染方面具有良好療效[1-2]。仔豬斷奶是一個(gè)較強(qiáng)的應(yīng)激，包括仔豬與母豬隔離，新群體形成，從吃母乳轉(zhuǎn)成吃飼料，環(huán)境小氣候改變等。仔豬斷奶常伴有消化系統(tǒng)紊亂、免疫功能低下、嚴(yán)重腹瀉、生長(zhǎng)停滯甚至死亡，給生產(chǎn)造成巨大經(jīng)濟(jì)損失[3]。雖然BCG-PSN對(duì)機(jī)體有免疫調(diào)節(jié)功能，但在仔豬斷奶應(yīng)激模式下是否具有免疫增強(qiáng)作用，以及能否降低仔豬腹瀉率卻未曾見(jiàn)報(bào)道。本研究以斷奶仔豬為對(duì)象，研究了BCG-PSN對(duì)斷奶仔豬腹瀉指標(biāo)、抗氧化和免疫功能的影響，旨在為解決生產(chǎn)上由于斷奶所產(chǎn)生的一系列問(wèn)題提供依據(jù)。

1材料與方法

1.1試驗(yàn)動(dòng)物

28日齡姜曲海豬斷奶仔豬96頭，購(gòu)于江蘇農(nóng)牧科技職業(yè)學(xué)院姜曲海種豬場(chǎng)，公母各半，常規(guī)飼養(yǎng)，并按分組要求給予藥物。

1.2試劑與儀器

BCG-PSN為浙江萬(wàn)馬藥業(yè)有限公司產(chǎn)品，批號(hào)：20110410，其中多糖核酸含量不少于0.3 g/L；酶標(biāo)儀，美國(guó)Biotek公司產(chǎn)品，型號(hào)：ELX800；紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)，日本日立公司產(chǎn)品，型號(hào)：U-2910；超氧化物歧化酶（SOD）、脂質(zhì)過(guò)氧化物（LPO）、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（GSH-PX）、IgG、IgM檢測(cè)試劑盒購(gòu)于南京建成生物工程研究所。

1.3試驗(yàn)設(shè)計(jì)

將96頭斷奶仔豬隨機(jī)分為4組，每組3圈，每圈8頭，分別為BCG-PSN高劑量組（Ⅰ組，60 μg/kg），BCG-PSN中劑量組（Ⅱ組，30 μg/kg），BCG-PSN低劑量組（Ⅲ組，15 μg/kg）、空白對(duì)照組（Ⅳ組），空白對(duì)照組用生理鹽水代替BCG-PSN。每組受試豬進(jìn)行連續(xù)7 d注射給藥，首次用藥前每頭豬空腹稱(chēng)重，以確定給藥量。于首次用藥前以及用藥后5、10、15、20 d，在每圈隨機(jī)選取仔豬5頭，每組15頭，前腔靜脈采血，分離血清，檢測(cè)相應(yīng)指標(biāo)，試驗(yàn)期共20 d。

1.4檢測(cè)指標(biāo)

1.4.1觀(guān)察指標(biāo)試驗(yàn)期間每天觀(guān)察受試豬的精神狀態(tài)、食欲、糞便、發(fā)病、死亡等情況。試驗(yàn)結(jié)束后對(duì)每頭豬再次稱(chēng)重，以確定增重情況。按下式計(jì)算腹瀉頻率：

腹瀉頻率= ∑（腹瀉仔豬數(shù)×仔豬腹瀉時(shí)間）/（試驗(yàn)仔豬數(shù)×正試期時(shí)間）×100%。

1.4.2抗氧化指標(biāo)檢測(cè)用羥胺法測(cè)定血清中總超氧化物歧化酶（T-SOD）含量，LPO、GSH-PX含量檢測(cè)方法嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明進(jìn)行檢測(cè)。

1.4.3免疫球蛋白檢測(cè)用免疫抑制法測(cè)定血清中IgG、IgM 含量。

1.5數(shù)據(jù)分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)用SPSS 18.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)和方差分析。

2結(jié)果與分析

2.1觀(guān)察指標(biāo)

在整個(gè)試驗(yàn)期間，各試驗(yàn)組豬未見(jiàn)明顯的異常臨床表現(xiàn)，采食、行動(dòng)、精神狀態(tài)、呼吸等均正常，部分豬腹瀉。

由表1可以看出，在斷奶仔豬用藥前和用藥后，各試驗(yàn)組間平均增重未見(jiàn)顯著差異（P>0.05），但BCG-PSN高劑量組、中劑量組的平均增重要大于對(duì)照組。

3結(jié)論與討論

仔豬斷奶后消化系統(tǒng)和免疫器官發(fā)育不完善，消化道中酶和胃酸的分泌量不足，正常的腸道微生態(tài)系統(tǒng)尚未建立，往往出現(xiàn)食欲差、消化不良、生長(zhǎng)遲滯、飼料利用率低、抗病力弱、腹瀉、水腫等，給養(yǎng)殖業(yè)帶來(lái)巨大經(jīng)濟(jì)損失[4]。本研究表明，BCG-PSN處理下仔豬的腹瀉頻率顯著下降，平均增重也比對(duì)照組有提高，這可能跟BCG-PSN提高機(jī)體抗氧化能力和增強(qiáng)免疫力有關(guān)。

動(dòng)物機(jī)體內(nèi)SOD、GSH-PX在清除自由基、氧化損傷、維持細(xì)胞結(jié)構(gòu)方面起著重要作用。在應(yīng)激狀態(tài)下，血液中SOD、GSH-PX活性降低，而脂質(zhì)過(guò)氧化物L(fēng)PO含量升高[5-6]。本研究中，隨著B(niǎo)CG-PSN添加水平提高，給藥后5、10、15 d，血清中GSH-PX、T-SOD活性明顯升高，與對(duì)照組差異顯著，添加60、30 μg/kg的BCG-PSN能改善仔豬斷奶后抗氧化能力，緩解應(yīng)激造成的過(guò)氧化損傷，有利于仔豬生長(zhǎng)。本研究中，用藥前，各試驗(yàn)組仔豬血清中LPO含量沒(méi)有顯著差異；給藥5、10 d后，用藥組仔豬血清中LPO含量顯著下降，說(shuō)明BCG-PSN能夠協(xié)同SOD、GSH-PX清除體內(nèi)脂質(zhì)過(guò)氧化物，抑制膜脂質(zhì)過(guò)氧化作用，減少自由基對(duì)機(jī)體的病理?yè)p傷，具有一定的抗氧化作用。

IgG是血液中含量最高的免疫球蛋白，在抗體介導(dǎo)的防衛(wèi)機(jī)理中占主要地位，IgG比其他免疫球蛋白更易逸出血管，參加體表和組織間的防衛(wèi)[7]。本研究表明，BCG-PSN用藥組仔豬血清IgG含量在斷奶應(yīng)激后緩慢上升，但對(duì)照組卻下降，二者間差異顯著，說(shuō)明對(duì)照組仔豬受斷奶應(yīng)激的影響較大，而B(niǎo)CG-PSN能減輕斷奶應(yīng)激，使機(jī)體在短時(shí)間內(nèi)建立免疫保護(hù)。IgM 由漿細(xì)胞分泌，在大多數(shù)家畜血清中的含量?jī)H次于IgG[8]。本研究中斷奶前供試豬血清IgM 含量差異不顯著；用藥后5、10 d，BCG-PSN用藥組仔豬血清IgM含量明顯增高，而對(duì)照組則下降，二者間差異顯著；用藥后15、20 d，雖然用藥組和對(duì)照組沒(méi)有顯著差異，但用藥組IgM含量維持在高水平，表明BCG-PSN能夠提高機(jī)體免疫球蛋白的含量，且這種免疫增強(qiáng)作用和用藥劑量相關(guān)，本研究中以高劑量組效果最為明顯。

參考文獻(xiàn)：

[1]Sun J，Hou J，Li D，et al. Enhancement of HIV-1 DNA vaccine immunogenicity by BCG-PSN，a novel adjuvant[J]. Vaccine，2013，31（3）：472-479.

[2]寧云山，姜德建，劉珊珊.卡介苗及卡介菌多糖核酸提取物的免疫調(diào)節(jié)作用及臨床應(yīng)用[J]. 中國(guó)生物制品學(xué)雜志，2008，21（1）：74-77.

[3]邊傳周，王老七. 黃芪多糖對(duì)斷奶仔豬免疫功能及腹瀉的影響[J]. 畜牧與獸醫(yī)，2005，37（1）：10-12.

[4]席鵬彬，林映才，蔣宗勇，等. 谷氨酰胺二肽對(duì)斷奶仔豬生長(zhǎng)、免疫、抗氧化力和小腸粘膜形態(tài)的影響[J]. 動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)學(xué)報(bào)，2007，19（2）：135-141.

[5]廖曉霞，葉均安. 早期斷奶仔豬的斷奶應(yīng)激與腹瀉研究[J]. 家畜生態(tài)學(xué)報(bào)，2005，26（3）：74-77.

[6]胡鵬，占秀安，郄彥昭，等. 母種豬飼糧添加DL-硒代蛋氨酸對(duì)后代乳豬胰臟硒含量、抗氧化能力、消化酶活性以及GSH-PX mRNA表達(dá)的影響[J]. 動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)學(xué)報(bào)，2010，22（5）：1361-1366.

[7]邱小田，張蕓，劉培瓊，等. 品種與季節(jié)和日齡對(duì)仔豬血清中IgG含量的影響[J]. 中國(guó)畜牧雜志，2006，42（5）：13-15.

[8]辛凌翔，董靜，王宏宇，等. 卡介菌多糖核酸對(duì)IBDV感染雞的免疫活性研究[J]. 南京農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2010，33（6）：75-80.endprint

摘要：將96頭28日齡斷奶仔豬隨機(jī)分為4組，分別為卡介菌多糖核酸高劑量組（60 μg/kg）、中劑量組（30 μg/kg）、低劑量組（15 μg/kg）、空白對(duì)照組，仔豬按照分組要求注射給藥。分別于注射前、注射后5、10、15、20 d前腔靜脈采血，分離血清，測(cè)定血清中總超氧化物歧化酶（T-SOD）、脂質(zhì)過(guò)氧化物（LPO）、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（GSH-PX）、IgG、IgM含量。結(jié)果表明：卡介菌多糖核酸能顯著提高仔豬血清中T-SOD、GSH-PX、IgG、IgM含量，顯著降低LPO含量，且這種抗氧化和免疫增強(qiáng)作用和用藥時(shí)間、劑量有相關(guān)性。

關(guān)鍵詞：卡介菌多糖核酸；抗氧化；免疫活性；斷奶仔豬

中圖分類(lèi)號(hào)： S858.28 文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A 文章編號(hào)：1002-1302（2014）04-0152-03

收稿日期：2013-08-25

基金項(xiàng)目：江蘇農(nóng)牧科技職業(yè)學(xué)院橫向課題（編號(hào)：PT1209）。

作者簡(jiǎn)介：於敏（1982—），女，江蘇南京人，碩士，講師，主要從事免疫增強(qiáng)劑開(kāi)發(fā)及病理學(xué)研究。E-mail：42019802@qq.com。卡介菌多糖核酸（BCG-PSN） 是從卡介菌中經(jīng)熱酚法處理后提取的新型免疫調(diào)節(jié)劑，含有多糖、核酸等多種免疫活性物質(zhì)。BCG-PSN 具有免疫調(diào)節(jié)及抗炎作用，在改善免疫功能、抗過(guò)敏、抗感染方面具有良好療效[1-2]。仔豬斷奶是一個(gè)較強(qiáng)的應(yīng)激，包括仔豬與母豬隔離，新群體形成，從吃母乳轉(zhuǎn)成吃飼料，環(huán)境小氣候改變等。仔豬斷奶常伴有消化系統(tǒng)紊亂、免疫功能低下、嚴(yán)重腹瀉、生長(zhǎng)停滯甚至死亡，給生產(chǎn)造成巨大經(jīng)濟(jì)損失[3]。雖然BCG-PSN對(duì)機(jī)體有免疫調(diào)節(jié)功能，但在仔豬斷奶應(yīng)激模式下是否具有免疫增強(qiáng)作用，以及能否降低仔豬腹瀉率卻未曾見(jiàn)報(bào)道。本研究以斷奶仔豬為對(duì)象，研究了BCG-PSN對(duì)斷奶仔豬腹瀉指標(biāo)、抗氧化和免疫功能的影響，旨在為解決生產(chǎn)上由于斷奶所產(chǎn)生的一系列問(wèn)題提供依據(jù)。

1材料與方法

1.1試驗(yàn)動(dòng)物

28日齡姜曲海豬斷奶仔豬96頭，購(gòu)于江蘇農(nóng)牧科技職業(yè)學(xué)院姜曲海種豬場(chǎng)，公母各半，常規(guī)飼養(yǎng)，并按分組要求給予藥物。

1.2試劑與儀器

BCG-PSN為浙江萬(wàn)馬藥業(yè)有限公司產(chǎn)品，批號(hào)：20110410，其中多糖核酸含量不少于0.3 g/L；酶標(biāo)儀，美國(guó)Biotek公司產(chǎn)品，型號(hào)：ELX800；紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)，日本日立公司產(chǎn)品，型號(hào)：U-2910；超氧化物歧化酶（SOD）、脂質(zhì)過(guò)氧化物（LPO）、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（GSH-PX）、IgG、IgM檢測(cè)試劑盒購(gòu)于南京建成生物工程研究所。

1.3試驗(yàn)設(shè)計(jì)

將96頭斷奶仔豬隨機(jī)分為4組，每組3圈，每圈8頭，分別為BCG-PSN高劑量組（Ⅰ組，60 μg/kg），BCG-PSN中劑量組（Ⅱ組，30 μg/kg），BCG-PSN低劑量組（Ⅲ組，15 μg/kg）、空白對(duì)照組（Ⅳ組），空白對(duì)照組用生理鹽水代替BCG-PSN。每組受試豬進(jìn)行連續(xù)7 d注射給藥，首次用藥前每頭豬空腹稱(chēng)重，以確定給藥量。于首次用藥前以及用藥后5、10、15、20 d，在每圈隨機(jī)選取仔豬5頭，每組15頭，前腔靜脈采血，分離血清，檢測(cè)相應(yīng)指標(biāo)，試驗(yàn)期共20 d。

1.4檢測(cè)指標(biāo)

1.4.1觀(guān)察指標(biāo)試驗(yàn)期間每天觀(guān)察受試豬的精神狀態(tài)、食欲、糞便、發(fā)病、死亡等情況。試驗(yàn)結(jié)束后對(duì)每頭豬再次稱(chēng)重，以確定增重情況。按下式計(jì)算腹瀉頻率：

腹瀉頻率= ∑（腹瀉仔豬數(shù)×仔豬腹瀉時(shí)間）/（試驗(yàn)仔豬數(shù)×正試期時(shí)間）×100%。

1.4.2抗氧化指標(biāo)檢測(cè)用羥胺法測(cè)定血清中總超氧化物歧化酶（T-SOD）含量，LPO、GSH-PX含量檢測(cè)方法嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明進(jìn)行檢測(cè)。

1.4.3免疫球蛋白檢測(cè)用免疫抑制法測(cè)定血清中IgG、IgM 含量。

1.5數(shù)據(jù)分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)用SPSS 18.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)和方差分析。

2結(jié)果與分析

2.1觀(guān)察指標(biāo)

在整個(gè)試驗(yàn)期間，各試驗(yàn)組豬未見(jiàn)明顯的異常臨床表現(xiàn)，采食、行動(dòng)、精神狀態(tài)、呼吸等均正常，部分豬腹瀉。

由表1可以看出，在斷奶仔豬用藥前和用藥后，各試驗(yàn)組間平均增重未見(jiàn)顯著差異（P>0.05），但BCG-PSN高劑量組、中劑量組的平均增重要大于對(duì)照組。

3結(jié)論與討論

仔豬斷奶后消化系統(tǒng)和免疫器官發(fā)育不完善，消化道中酶和胃酸的分泌量不足，正常的腸道微生態(tài)系統(tǒng)尚未建立，往往出現(xiàn)食欲差、消化不良、生長(zhǎng)遲滯、飼料利用率低、抗病力弱、腹瀉、水腫等，給養(yǎng)殖業(yè)帶來(lái)巨大經(jīng)濟(jì)損失[4]。本研究表明，BCG-PSN處理下仔豬的腹瀉頻率顯著下降，平均增重也比對(duì)照組有提高，這可能跟BCG-PSN提高機(jī)體抗氧化能力和增強(qiáng)免疫力有關(guān)。

動(dòng)物機(jī)體內(nèi)SOD、GSH-PX在清除自由基、氧化損傷、維持細(xì)胞結(jié)構(gòu)方面起著重要作用。在應(yīng)激狀態(tài)下，血液中SOD、GSH-PX活性降低，而脂質(zhì)過(guò)氧化物L(fēng)PO含量升高[5-6]。本研究中，隨著B(niǎo)CG-PSN添加水平提高，給藥后5、10、15 d，血清中GSH-PX、T-SOD活性明顯升高，與對(duì)照組差異顯著，添加60、30 μg/kg的BCG-PSN能改善仔豬斷奶后抗氧化能力，緩解應(yīng)激造成的過(guò)氧化損傷，有利于仔豬生長(zhǎng)。本研究中，用藥前，各試驗(yàn)組仔豬血清中LPO含量沒(méi)有顯著差異；給藥5、10 d后，用藥組仔豬血清中LPO含量顯著下降，說(shuō)明BCG-PSN能夠協(xié)同SOD、GSH-PX清除體內(nèi)脂質(zhì)過(guò)氧化物，抑制膜脂質(zhì)過(guò)氧化作用，減少自由基對(duì)機(jī)體的病理?yè)p傷，具有一定的抗氧化作用。

IgG是血液中含量最高的免疫球蛋白，在抗體介導(dǎo)的防衛(wèi)機(jī)理中占主要地位，IgG比其他免疫球蛋白更易逸出血管，參加體表和組織間的防衛(wèi)[7]。本研究表明，BCG-PSN用藥組仔豬血清IgG含量在斷奶應(yīng)激后緩慢上升，但對(duì)照組卻下降，二者間差異顯著，說(shuō)明對(duì)照組仔豬受斷奶應(yīng)激的影響較大，而B(niǎo)CG-PSN能減輕斷奶應(yīng)激，使機(jī)體在短時(shí)間內(nèi)建立免疫保護(hù)。IgM 由漿細(xì)胞分泌，在大多數(shù)家畜血清中的含量?jī)H次于IgG[8]。本研究中斷奶前供試豬血清IgM 含量差異不顯著；用藥后5、10 d，BCG-PSN用藥組仔豬血清IgM含量明顯增高，而對(duì)照組則下降，二者間差異顯著；用藥后15、20 d，雖然用藥組和對(duì)照組沒(méi)有顯著差異，但用藥組IgM含量維持在高水平，表明BCG-PSN能夠提高機(jī)體免疫球蛋白的含量，且這種免疫增強(qiáng)作用和用藥劑量相關(guān)，本研究中以高劑量組效果最為明顯。

參考文獻(xiàn)：

[1]Sun J，Hou J，Li D，et al. Enhancement of HIV-1 DNA vaccine immunogenicity by BCG-PSN，a novel adjuvant[J]. Vaccine，2013，31（3）：472-479.

[2]寧云山，姜德建，劉珊珊.卡介苗及卡介菌多糖核酸提取物的免疫調(diào)節(jié)作用及臨床應(yīng)用[J]. 中國(guó)生物制品學(xué)雜志，2008，21（1）：74-77.

[3]邊傳周，王老七. 黃芪多糖對(duì)斷奶仔豬免疫功能及腹瀉的影響[J]. 畜牧與獸醫(yī)，2005，37（1）：10-12.

[4]席鵬彬，林映才，蔣宗勇，等. 谷氨酰胺二肽對(duì)斷奶仔豬生長(zhǎng)、免疫、抗氧化力和小腸粘膜形態(tài)的影響[J]. 動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)學(xué)報(bào)，2007，19（2）：135-141.

[5]廖曉霞，葉均安. 早期斷奶仔豬的斷奶應(yīng)激與腹瀉研究[J]. 家畜生態(tài)學(xué)報(bào)，2005，26（3）：74-77.

[6]胡鵬，占秀安，郄彥昭，等. 母種豬飼糧添加DL-硒代蛋氨酸對(duì)后代乳豬胰臟硒含量、抗氧化能力、消化酶活性以及GSH-PX mRNA表達(dá)的影響[J]. 動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)學(xué)報(bào)，2010，22（5）：1361-1366.

[7]邱小田，張蕓，劉培瓊，等. 品種與季節(jié)和日齡對(duì)仔豬血清中IgG含量的影響[J]. 中國(guó)畜牧雜志，2006，42（5）：13-15.

[8]辛凌翔，董靜，王宏宇，等. 卡介菌多糖核酸對(duì)IBDV感染雞的免疫活性研究[J]. 南京農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2010，33（6）：75-80.endprint

摘要：將96頭28日齡斷奶仔豬隨機(jī)分為4組，分別為卡介菌多糖核酸高劑量組（60 μg/kg）、中劑量組（30 μg/kg）、低劑量組（15 μg/kg）、空白對(duì)照組，仔豬按照分組要求注射給藥。分別于注射前、注射后5、10、15、20 d前腔靜脈采血，分離血清，測(cè)定血清中總超氧化物歧化酶（T-SOD）、脂質(zhì)過(guò)氧化物（LPO）、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（GSH-PX）、IgG、IgM含量。結(jié)果表明：卡介菌多糖核酸能顯著提高仔豬血清中T-SOD、GSH-PX、IgG、IgM含量，顯著降低LPO含量，且這種抗氧化和免疫增強(qiáng)作用和用藥時(shí)間、劑量有相關(guān)性。

關(guān)鍵詞：卡介菌多糖核酸；抗氧化；免疫活性；斷奶仔豬

中圖分類(lèi)號(hào)： S858.28 文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A 文章編號(hào)：1002-1302（2014）04-0152-03

收稿日期：2013-08-25

基金項(xiàng)目：江蘇農(nóng)牧科技職業(yè)學(xué)院橫向課題（編號(hào)：PT1209）。

作者簡(jiǎn)介：於敏（1982—），女，江蘇南京人，碩士，講師，主要從事免疫增強(qiáng)劑開(kāi)發(fā)及病理學(xué)研究。E-mail：42019802@qq.com?？ń榫嗵呛怂幔˙CG-PSN） 是從卡介菌中經(jīng)熱酚法處理后提取的新型免疫調(diào)節(jié)劑，含有多糖、核酸等多種免疫活性物質(zhì)。BCG-PSN 具有免疫調(diào)節(jié)及抗炎作用，在改善免疫功能、抗過(guò)敏、抗感染方面具有良好療效[1-2]。仔豬斷奶是一個(gè)較強(qiáng)的應(yīng)激，包括仔豬與母豬隔離，新群體形成，從吃母乳轉(zhuǎn)成吃飼料，環(huán)境小氣候改變等。仔豬斷奶常伴有消化系統(tǒng)紊亂、免疫功能低下、嚴(yán)重腹瀉、生長(zhǎng)停滯甚至死亡，給生產(chǎn)造成巨大經(jīng)濟(jì)損失[3]。雖然BCG-PSN對(duì)機(jī)體有免疫調(diào)節(jié)功能，但在仔豬斷奶應(yīng)激模式下是否具有免疫增強(qiáng)作用，以及能否降低仔豬腹瀉率卻未曾見(jiàn)報(bào)道。本研究以斷奶仔豬為對(duì)象，研究了BCG-PSN對(duì)斷奶仔豬腹瀉指標(biāo)、抗氧化和免疫功能的影響，旨在為解決生產(chǎn)上由于斷奶所產(chǎn)生的一系列問(wèn)題提供依據(jù)。

1材料與方法

1.1試驗(yàn)動(dòng)物

28日齡姜曲海豬斷奶仔豬96頭，購(gòu)于江蘇農(nóng)牧科技職業(yè)學(xué)院姜曲海種豬場(chǎng)，公母各半，常規(guī)飼養(yǎng)，并按分組要求給予藥物。

1.2試劑與儀器

BCG-PSN為浙江萬(wàn)馬藥業(yè)有限公司產(chǎn)品，批號(hào)：20110410，其中多糖核酸含量不少于0.3 g/L；酶標(biāo)儀，美國(guó)Biotek公司產(chǎn)品，型號(hào)：ELX800；紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)，日本日立公司產(chǎn)品，型號(hào)：U-2910；超氧化物歧化酶（SOD）、脂質(zhì)過(guò)氧化物（LPO）、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（GSH-PX）、IgG、IgM檢測(cè)試劑盒購(gòu)于南京建成生物工程研究所。

1.3試驗(yàn)設(shè)計(jì)

將96頭斷奶仔豬隨機(jī)分為4組，每組3圈，每圈8頭，分別為BCG-PSN高劑量組（Ⅰ組，60 μg/kg），BCG-PSN中劑量組（Ⅱ組，30 μg/kg），BCG-PSN低劑量組（Ⅲ組，15 μg/kg）、空白對(duì)照組（Ⅳ組），空白對(duì)照組用生理鹽水代替BCG-PSN。每組受試豬進(jìn)行連續(xù)7 d注射給藥，首次用藥前每頭豬空腹稱(chēng)重，以確定給藥量。于首次用藥前以及用藥后5、10、15、20 d，在每圈隨機(jī)選取仔豬5頭，每組15頭，前腔靜脈采血，分離血清，檢測(cè)相應(yīng)指標(biāo)，試驗(yàn)期共20 d。

1.4檢測(cè)指標(biāo)

1.4.1觀(guān)察指標(biāo)試驗(yàn)期間每天觀(guān)察受試豬的精神狀態(tài)、食欲、糞便、發(fā)病、死亡等情況。試驗(yàn)結(jié)束后對(duì)每頭豬再次稱(chēng)重，以確定增重情況。按下式計(jì)算腹瀉頻率：

腹瀉頻率= ∑（腹瀉仔豬數(shù)×仔豬腹瀉時(shí)間）/（試驗(yàn)仔豬數(shù)×正試期時(shí)間）×100%。

1.4.2抗氧化指標(biāo)檢測(cè)用羥胺法測(cè)定血清中總超氧化物歧化酶（T-SOD）含量，LPO、GSH-PX含量檢測(cè)方法嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明進(jìn)行檢測(cè)。

1.4.3免疫球蛋白檢測(cè)用免疫抑制法測(cè)定血清中IgG、IgM 含量。

1.5數(shù)據(jù)分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)用SPSS 18.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)和方差分析。

2結(jié)果與分析

2.1觀(guān)察指標(biāo)

在整個(gè)試驗(yàn)期間，各試驗(yàn)組豬未見(jiàn)明顯的異常臨床表現(xiàn)，采食、行動(dòng)、精神狀態(tài)、呼吸等均正常，部分豬腹瀉。

由表1可以看出，在斷奶仔豬用藥前和用藥后，各試驗(yàn)組間平均增重未見(jiàn)顯著差異（P>0.05），但BCG-PSN高劑量組、中劑量組的平均增重要大于對(duì)照組。

3結(jié)論與討論

仔豬斷奶后消化系統(tǒng)和免疫器官發(fā)育不完善，消化道中酶和胃酸的分泌量不足，正常的腸道微生態(tài)系統(tǒng)尚未建立，往往出現(xiàn)食欲差、消化不良、生長(zhǎng)遲滯、飼料利用率低、抗病力弱、腹瀉、水腫等，給養(yǎng)殖業(yè)帶來(lái)巨大經(jīng)濟(jì)損失[4]。本研究表明，BCG-PSN處理下仔豬的腹瀉頻率顯著下降，平均增重也比對(duì)照組有提高，這可能跟BCG-PSN提高機(jī)體抗氧化能力和增強(qiáng)免疫力有關(guān)。

動(dòng)物機(jī)體內(nèi)SOD、GSH-PX在清除自由基、氧化損傷、維持細(xì)胞結(jié)構(gòu)方面起著重要作用。在應(yīng)激狀態(tài)下，血液中SOD、GSH-PX活性降低，而脂質(zhì)過(guò)氧化物L(fēng)PO含量升高[5-6]。本研究中，隨著B(niǎo)CG-PSN添加水平提高，給藥后5、10、15 d，血清中GSH-PX、T-SOD活性明顯升高，與對(duì)照組差異顯著，添加60、30 μg/kg的BCG-PSN能改善仔豬斷奶后抗氧化能力，緩解應(yīng)激造成的過(guò)氧化損傷，有利于仔豬生長(zhǎng)。本研究中，用藥前，各試驗(yàn)組仔豬血清中LPO含量沒(méi)有顯著差異；給藥5、10 d后，用藥組仔豬血清中LPO含量顯著下降，說(shuō)明BCG-PSN能夠協(xié)同SOD、GSH-PX清除體內(nèi)脂質(zhì)過(guò)氧化物，抑制膜脂質(zhì)過(guò)氧化作用，減少自由基對(duì)機(jī)體的病理?yè)p傷，具有一定的抗氧化作用。

IgG是血液中含量最高的免疫球蛋白，在抗體介導(dǎo)的防衛(wèi)機(jī)理中占主要地位，IgG比其他免疫球蛋白更易逸出血管，參加體表和組織間的防衛(wèi)[7]。本研究表明，BCG-PSN用藥組仔豬血清IgG含量在斷奶應(yīng)激后緩慢上升，但對(duì)照組卻下降，二者間差異顯著，說(shuō)明對(duì)照組仔豬受斷奶應(yīng)激的影響較大，而B(niǎo)CG-PSN能減輕斷奶應(yīng)激，使機(jī)體在短時(shí)間內(nèi)建立免疫保護(hù)。IgM 由漿細(xì)胞分泌，在大多數(shù)家畜血清中的含量?jī)H次于IgG[8]。本研究中斷奶前供試豬血清IgM 含量差異不顯著；用藥后5、10 d，BCG-PSN用藥組仔豬血清IgM含量明顯增高，而對(duì)照組則下降，二者間差異顯著；用藥后15、20 d，雖然用藥組和對(duì)照組沒(méi)有顯著差異，但用藥組IgM含量維持在高水平，表明BCG-PSN能夠提高機(jī)體免疫球蛋白的含量，且這種免疫增強(qiáng)作用和用藥劑量相關(guān)，本研究中以高劑量組效果最為明顯。

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