李鯤鵬　朱磊　馬捷

[摘要] 目的 用外源性硫化氫后處理大鼠肺缺血再灌注損傷模型，檢測其對肺缺血再灌注損傷的影響。 方法 將24只健康SD大鼠，隨機(jī)分成3組，每組8只，分別為：假手術(shù)（Sham）組、肺缺血再灌注（I/R）組及I/R+硫氫化鈉（NaHS）干預(yù)組。在每組實(shí)驗結(jié)束后取大鼠肺組織，觀察肺組織病理學(xué)的變化，檢測大鼠肺濕/干重（W/D）比值，肺組織丙二醛（MDA）含量及超氧化物岐化酶（SOD）活性的測定，提取支氣管肺泡灌洗液（BALF）檢測BALF中白細(xì)胞計數(shù)、中性粒細(xì)胞百分比及肺通透性指數(shù)。結(jié)果 I/R組肺組織W/D值、MDA水平與Sham組比較顯著升高（P<0.05），而I/R+硫氫化鈉（NaHS）干預(yù)組明顯低于I/R組（P<0.05）；I/R組肺組織SOD活性與Sham組比較顯著降低（P<0.05）， I/R+硫氫化鈉（NaHS）干預(yù)組明顯高于I/R組（P<0.05）。肺組織病理結(jié)果表明，I/R+硫氫化鈉（NaHS）干預(yù)組與I/R組比較損傷減輕，肺泡腔內(nèi)炎性細(xì)胞減少。 結(jié)論 硫化氫后處理通過減輕肺水腫、降低氧自由基水平有關(guān)，對肺缺血再灌注損傷具有保護(hù)作用。

[關(guān)鍵詞] 再灌注損傷；硫化氫；氧自由基；肺水腫

[中圖分類號] R363 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] B [文章編號] 1673-9701（2014）13-0010-03

肺缺血/再灌注（Ischemia/Reperfusion，I/R）損傷往往出現(xiàn)于臨床肺移植、體外循環(huán)心臟手術(shù)、機(jī)體大出血等情況下，造成肺缺血，恢復(fù)灌注后，缺血所導(dǎo)致的損傷并沒有減輕，甚至更加嚴(yán)重[1]。如何降低肺缺血/再灌注損傷的危害，改善患者的預(yù)后，是如今尚需解決的重要問題[2]。硫化氫（hydrogensulfide，H2S）具有類似NO和CO的某些生物學(xué)特性，在NO和CO之后被認(rèn)為是第3類內(nèi)源性氣體分子[3]。經(jīng)研究證實(shí)，其對多種臟器以及組織的缺血再灌注損傷有保護(hù)作用。在此研究中，通過建立大鼠在體肺缺血/再灌注模型， 以硫氫化鈉作為預(yù)處理藥物，研究硫化氫（H2S）后處理對肺缺血再灌注損傷的作用及機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗動物

健康SD大鼠24只（山西醫(yī)科大學(xué)動物實(shí)驗中心提供），體重220～280 g，雌雄不拘。

1.2 動物模型復(fù)制

實(shí)驗大鼠通過腹腔注射5%水合氯醛（0.7 mL/100 g），麻醉后取仰臥位固定于手術(shù)臺上。頸部正中切口，予氣管切開插管，動物呼吸機(jī)行機(jī)械通氣[吸入室內(nèi)空氣，呼吸頻率（50～60）次/min]。沿胸骨左緣切斷第3～5肋骨，打開胸腔，游離左側(cè)肺門，切斷左側(cè)肺下韌帶。按Sekido[4]法復(fù)制在體大鼠肺缺血-再灌注模型，結(jié)扎阻斷左側(cè)肺門血管及支氣管，左肺血供及通氣終止30 min后，開放左肺門予再灌注120 min。

1.3 實(shí)驗分組

24只大鼠隨機(jī)分成以下3組，假手術(shù)組（Sham）、肺缺血再灌注組（I/R）及I/R+硫氫化鈉（NaHS）干預(yù)組，每組8只。I/R+硫氫化鈉（NaHS）干預(yù)組實(shí)驗前5 d始每天腹腔注射NaHS（NaHS 20 μmol/kg，溶入0.3 mL生理鹽水），于實(shí)驗前15 min再次給藥；Sham組和I/R組實(shí)驗前5 d，每天經(jīng)腹腔注射0.3 mL生理鹽水；實(shí)驗15 min再次注射。

1.4觀察指標(biāo)及檢測方法

1.4.1 肺組織濕/干重（W/D）值測定 大鼠處死后立即留取左肺部分肺組織測量濕重（W）并記錄，然后放入60℃恒溫烘箱烘干至恒重，48 h后測量干重（D），從而算得肺組織濕/干（W/D）值，W/D值可反映肺組織水腫情況。

1.4.2 肺組織勻漿中MDA含量、SOD活性的測定 左肺取部分肺組織凍存，實(shí)驗結(jié)束后，按試劑盒的要求將肺組織制成勻漿， 3500 r/min離心10 min，取上清液，用分光光度計測反應(yīng)后的吸光度值，計算出MDA含量及SOD活性，嚴(yán)格按照試劑盒說明操作。

1.4.3支氣管肺泡灌洗液（BALF）中肺通透性指數(shù)、白細(xì)胞（WBC）計數(shù)、中性粒細(xì)胞（PMN）百分比及肺通透性指數(shù)（LPI）的測定 取左肺上葉，經(jīng)氣管用5 mL生理鹽水行左肺灌洗，收集支氣管肺泡灌洗液，以3000 r/min高速離心15 min取上清液，雙縮脲法測BALF及血清中蛋白含量，BALF中蛋白含量與血清蛋白含量之比為肺通透性指數(shù)。將BALF離心沉渣涂片，瑞氏染色，光鏡下行白細(xì)胞及PMN計數(shù)，求得PMN百分比。

1.4.4 病理學(xué)檢查 留取左肺部分肺組織行病理學(xué)分析，用10%甲醛固定肺組織標(biāo)本，然后常規(guī)石蠟包埋，切片，HE染色，觀察光鏡下病理學(xué)改變。

1.5 統(tǒng)計學(xué)處理

所有結(jié)果均采用SPSS 16.0統(tǒng)計學(xué)軟件進(jìn)行處理，實(shí)驗結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，實(shí)驗數(shù)結(jié)果組間比較行方差分析和t檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 肺組織W/D值

Sham組肺組織基本無水腫，而I/R組肺組織嚴(yán)重水腫，I/R組與Sham組比較W/D值明顯升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01），I/R+ NaHS組W/D值雖比Sham組有所升高（P<0.05），但與I/R組對比，W/D值明顯下降，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）。見表1。

表1 各組大鼠肺組織W /D值比較（x±s）

注：與Sham組比較，*P<0.05；與I/R組比較，#P<0.01

2.2 肺組織血漿丙二醛（MDA）含量及超氧化物岐化酶（SOD）活性

與Sham組比較，I/R組肺組織勻漿中MDA含量明顯增多，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）， I/R+ NaHS組MDA含量雖比Sham組有所升高（P<0.05），但與I/R組對比，肺組織勻漿中MDA含量明顯減少，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）；與Sham組比較，I/R組肺組織勻漿中SOD活性明顯下降，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01），I/R+ NaHS組SOD活性雖比Sham組有所降低（P<0.05），但顯著高于I/R組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）。見表2。

表2 各組血漿MDA含量及超氧化物岐化酶（SOD）活性（x±s）

注：與Sham組比較，*P<0.05；與I/R組比較，#P<0.01

2.3 肺通透性指數(shù)（LPI）和BALF中白細(xì)胞計數(shù)、中性粒細(xì)胞百分比

與Sham組比較，I/R組BALF中WBC總數(shù)及中性粒細(xì)胞百分比明顯升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01），I/R+ NaHS組BALF中WBC總數(shù)及中性粒細(xì)胞百分比雖比Sham組有所升高（P<0.05），但與I/R組對比BALF中WBC總數(shù)及中性粒細(xì)胞百分比明顯降低， 差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P均<0.01）；與Sham組比較，I/R組肺通透指數(shù)明顯升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01），I/R+ NaHS組肺通透指數(shù)雖比Sham組有所升高（P<0.05）但與I/R組對比，肺通透指數(shù)明顯降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）。見表3。

表3 各組肺通透性指數(shù)及BALF中WBC計數(shù)、PMN百分比（x±s，n=8）

注：與Sham組比較，*P<0.05；與I/R組比較，#P<0.01

2.4 肺組織病理結(jié)果

Sham組肺泡腔完整性好，肺泡間隔均勻無增厚，肺泡壁光滑，無滲出物及炎細(xì)胞浸潤（封三圖1）；I/R組出現(xiàn)明顯的肺組織水腫，毛細(xì)血管擴(kuò)張、充血，肺泡間隔增厚，肺泡腔內(nèi)充滿大量紅細(xì)胞及滲出物（封三圖2）；I/R+ NaHS組肺組織毛細(xì)血管輕微擴(kuò)張，與I/R組比較，肺泡間隔及肺泡水腫減輕，肺泡腔滲出物明顯減少（封三圖3）。

3 討論

H2S本是一種有毒氣體，但近些年發(fā)現(xiàn)H2S是一種新型氣體信號分子，對心血管系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)、消化道系統(tǒng)等均具有重要的調(diào)節(jié)作用[5]。新近研究證實(shí)，H2S對心臟[6]、肝臟[7]、腦[8]、小腸[9]缺血再灌注損傷有一定的保護(hù)作用，其機(jī)制可能與抗氧化凋亡提高缺血耐受性有關(guān)[10]。

肺缺血再灌注損傷（ischemia-reperfusion injury，I/R）的機(jī)制還不特別清晰，近年來認(rèn)為炎性介質(zhì)、氧自由基、內(nèi)皮細(xì)胞的損傷等機(jī)制在肺缺血再灌注損傷中有重要作用[11]。內(nèi)皮細(xì)胞的損傷引起肺毛細(xì)血管擴(kuò)張，從而通透性增高，引發(fā)肺組織水腫，肺組織濕/干重比值可反映肺水腫情況，再灌注后W/D比值，BALF中白細(xì)胞計數(shù)、中性粒細(xì)胞百分比及肺通透性指數(shù)均增高，而NaHS后處理后上述指標(biāo)明顯下降（P<0.05），其對肺缺血再灌注損傷產(chǎn)生了很好的效果。

近年來證明氧自由基和活性氧是引起缺血再灌注損傷的主要影響因素。與缺血再灌注損傷有關(guān)的氧自由基（OFR）有過氧化氫（H2O2）、超氧陰離子（O2-）[12]。正常生理狀態(tài)下，氧自由基所引起的損傷可被機(jī)體“抗氧化屏障”所抑制，然而缺血再灌注使組織產(chǎn)生過多的氧自由基，破壞了內(nèi)源性抗氧化系統(tǒng)，從而引起細(xì)胞壞死和組織的損傷。在此過程中，雙鍵脂肪酸在氧化后形成丙二醛，其含量可間接反映肺組織氧化損傷的情況。本實(shí)驗結(jié)果表明，I/R組中MDA含量與Sham組相比顯著升高，表明肺缺血再灌注時，體內(nèi)大量的氧自由基積累，導(dǎo)致肺水腫。而NaHS處理后，MDA含量雖然比Sham組高，而與I/R組相比顯著下降（P<0.05）。實(shí)驗結(jié)果表明H2S處理后，可降低再灌注后血漿MDA的含量，能減輕氧自由基所引起的氧化損傷，從而達(dá)到一定的保護(hù)能力。SOD是機(jī)體的重要抗氧化活性酶，其活性水平能間接反映機(jī)體的抗氧化能力[13]。本實(shí)驗中觀察到I/R組SOD活性與Sham組相比顯著下降，表明肺缺血再灌注后內(nèi)源性抗氧化活性酶消耗，從而導(dǎo)致氧自由基含量增加，破壞肺組織內(nèi)皮細(xì)胞，引起肺毛細(xì)血管擴(kuò)張，引起肺水腫，而NaHS處理后，SOD活性與I/R組相比顯著升高（P<0.05）。實(shí)驗結(jié)果表明，H2S處理后可以提高機(jī)體內(nèi)源性抗氧化活性酶的活性，從而達(dá)到清除氧自由基的目的。

本實(shí)驗結(jié)果表明，外源性硫化氫可通過清除基體氧自由基，提高抗氧化酶活性，起到對肺缺血再灌注損傷起保護(hù)作用。然而對其劑量、給藥時間等尚需進(jìn)一步研究。

[參考文獻(xiàn)]

[1] Alam S，Chan KM. Noninfectious pulmonary complications after organ transplantation[J]. Curr Opin PulmMed，1996，2（5）：412-418.

[2] 郝茂林，徐正衸，倪世容，等. 葛根素對兔肺缺血再灌注損傷中細(xì)胞凋亡的影響[J]. 溫州醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2005，35（2）：92-95.

[3] WangR. Two's company，three's a crowd：can H2S be the third endogenous gaseous tranamitter[J]. FASEB J，2002， 16 （13）：1792-1798.

[4] Sekido N，Mukadia N，Harada A，et al. Prevention of lung reperfusion injury in rabbits by a monoclonal antibody against interleukin-8 [J]. Nature，1993，365：654-657.

[5] iowicka E，Be3towski J. Hydrogen sulfide （H2S）-the third gas of interest for pharmacologists[J]. Pharmacolo Rep，2007， 59（1）：4-24.

[6] 許言午，張江虹，張麗娜，等. 硫化氫對D-半乳糖所致大鼠心肌組織氧化應(yīng)激和細(xì)胞凋亡的影響[J]. 中國老年學(xué)雜志，2012，32（16）：3471-3473.

[7] 杜津，王國林. 硫化氫對大鼠肝缺血再灌注損傷的影響[J]. 中華麻醉學(xué)雜志，2011，31（9）：1136-1138.

[8] 李國風(fēng)，李蘭芳，張勤增，等. 硫化氫對局灶性腦缺血損傷大鼠腦組織神經(jīng)元凋亡的影響[J]. 中國病理生理雜志，2012，（11）：2105-2106.

[9] 劉浩，白曉斌，史松，等. 硫化氫對大鼠腸缺血再灌注損傷的保護(hù)作用[J]. 西安交通大學(xué)學(xué)報（醫(yī)學(xué)版），2007， 28（6）：668-671.

[10] Szabó C. Hydrogen sulphide and its therapeutic potential[J]. Nat Rev Drug Discov，2007，6（11）： 917-935.

[11] 孟潁，朱仁之. 肺缺血再灌注損傷發(fā)病機(jī)制的研究進(jìn)展[J]. 中國醫(yī)學(xué)理論與實(shí)踐，2002，2002（4）：385-387.

[12] Ruiz-Ginés JA，López-Ongil S，González-Rubio M，et al. Reac tive oxygen species induce proliferation of bovine aortic endo thelial cells[J]. J Cardiovasc Pharmaco，2000， 35（1）：109-113.

[13] 李穎川，姜禎. 尿蛋白酶抑制劑防治肺缺血再灌注損傷的實(shí)驗研究[J]. 復(fù)旦學(xué)報（醫(yī)學(xué)版）， 2004，31（2）：182-184.

（收稿日期：2014-02-25）

表2 各組血漿MDA含量及超氧化物岐化酶（SOD）活性（x±s）

注：與Sham組比較，*P<0.05；與I/R組比較，#P<0.01

2.3 肺通透性指數(shù)（LPI）和BALF中白細(xì)胞計數(shù)、中性粒細(xì)胞百分比

與Sham組比較，I/R組BALF中WBC總數(shù)及中性粒細(xì)胞百分比明顯升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01），I/R+ NaHS組BALF中WBC總數(shù)及中性粒細(xì)胞百分比雖比Sham組有所升高（P<0.05），但與I/R組對比BALF中WBC總數(shù)及中性粒細(xì)胞百分比明顯降低， 差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P均<0.01）；與Sham組比較，I/R組肺通透指數(shù)明顯升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01），I/R+ NaHS組肺通透指數(shù)雖比Sham組有所升高（P<0.05）但與I/R組對比，肺通透指數(shù)明顯降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）。見表3。

表3 各組肺通透性指數(shù)及BALF中WBC計數(shù)、PMN百分比（x±s，n=8）

注：與Sham組比較，*P<0.05；與I/R組比較，#P<0.01

2.4 肺組織病理結(jié)果

Sham組肺泡腔完整性好，肺泡間隔均勻無增厚，肺泡壁光滑，無滲出物及炎細(xì)胞浸潤（封三圖1）；I/R組出現(xiàn)明顯的肺組織水腫，毛細(xì)血管擴(kuò)張、充血，肺泡間隔增厚，肺泡腔內(nèi)充滿大量紅細(xì)胞及滲出物（封三圖2）；I/R+ NaHS組肺組織毛細(xì)血管輕微擴(kuò)張，與I/R組比較，肺泡間隔及肺泡水腫減輕，肺泡腔滲出物明顯減少（封三圖3）。

3 討論

H2S本是一種有毒氣體，但近些年發(fā)現(xiàn)H2S是一種新型氣體信號分子，對心血管系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)、消化道系統(tǒng)等均具有重要的調(diào)節(jié)作用[5]。新近研究證實(shí)，H2S對心臟[6]、肝臟[7]、腦[8]、小腸[9]缺血再灌注損傷有一定的保護(hù)作用，其機(jī)制可能與抗氧化凋亡提高缺血耐受性有關(guān)[10]。

肺缺血再灌注損傷（ischemia-reperfusion injury，I/R）的機(jī)制還不特別清晰，近年來認(rèn)為炎性介質(zhì)、氧自由基、內(nèi)皮細(xì)胞的損傷等機(jī)制在肺缺血再灌注損傷中有重要作用[11]。內(nèi)皮細(xì)胞的損傷引起肺毛細(xì)血管擴(kuò)張，從而通透性增高，引發(fā)肺組織水腫，肺組織濕/干重比值可反映肺水腫情況，再灌注后W/D比值，BALF中白細(xì)胞計數(shù)、中性粒細(xì)胞百分比及肺通透性指數(shù)均增高，而NaHS后處理后上述指標(biāo)明顯下降（P<0.05），其對肺缺血再灌注損傷產(chǎn)生了很好的效果。

近年來證明氧自由基和活性氧是引起缺血再灌注損傷的主要影響因素。與缺血再灌注損傷有關(guān)的氧自由基（OFR）有過氧化氫（H2O2）、超氧陰離子（O2-）[12]。正常生理狀態(tài)下，氧自由基所引起的損傷可被機(jī)體“抗氧化屏障”所抑制，然而缺血再灌注使組織產(chǎn)生過多的氧自由基，破壞了內(nèi)源性抗氧化系統(tǒng)，從而引起細(xì)胞壞死和組織的損傷。在此過程中，雙鍵脂肪酸在氧化后形成丙二醛，其含量可間接反映肺組織氧化損傷的情況。本實(shí)驗結(jié)果表明，I/R組中MDA含量與Sham組相比顯著升高，表明肺缺血再灌注時，體內(nèi)大量的氧自由基積累，導(dǎo)致肺水腫。而NaHS處理后，MDA含量雖然比Sham組高，而與I/R組相比顯著下降（P<0.05）。實(shí)驗結(jié)果表明H2S處理后，可降低再灌注后血漿MDA的含量，能減輕氧自由基所引起的氧化損傷，從而達(dá)到一定的保護(hù)能力。SOD是機(jī)體的重要抗氧化活性酶，其活性水平能間接反映機(jī)體的抗氧化能力[13]。本實(shí)驗中觀察到I/R組SOD活性與Sham組相比顯著下降，表明肺缺血再灌注后內(nèi)源性抗氧化活性酶消耗，從而導(dǎo)致氧自由基含量增加，破壞肺組織內(nèi)皮細(xì)胞，引起肺毛細(xì)血管擴(kuò)張，引起肺水腫，而NaHS處理后，SOD活性與I/R組相比顯著升高（P<0.05）。實(shí)驗結(jié)果表明，H2S處理后可以提高機(jī)體內(nèi)源性抗氧化活性酶的活性，從而達(dá)到清除氧自由基的目的。

本實(shí)驗結(jié)果表明，外源性硫化氫可通過清除基體氧自由基，提高抗氧化酶活性，起到對肺缺血再灌注損傷起保護(hù)作用。然而對其劑量、給藥時間等尚需進(jìn)一步研究。

[參考文獻(xiàn)]

[1] Alam S，Chan KM. Noninfectious pulmonary complications after organ transplantation[J]. Curr Opin PulmMed，1996，2（5）：412-418.

[2] 郝茂林，徐正衸，倪世容，等. 葛根素對兔肺缺血再灌注損傷中細(xì)胞凋亡的影響[J]. 溫州醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2005，35（2）：92-95.

[3] WangR. Two's company，three's a crowd：can H2S be the third endogenous gaseous tranamitter[J]. FASEB J，2002， 16 （13）：1792-1798.

[4] Sekido N，Mukadia N，Harada A，et al. Prevention of lung reperfusion injury in rabbits by a monoclonal antibody against interleukin-8 [J]. Nature，1993，365：654-657.

[5] iowicka E，Be3towski J. Hydrogen sulfide （H2S）-the third gas of interest for pharmacologists[J]. Pharmacolo Rep，2007， 59（1）：4-24.

[6] 許言午，張江虹，張麗娜，等. 硫化氫對D-半乳糖所致大鼠心肌組織氧化應(yīng)激和細(xì)胞凋亡的影響[J]. 中國老年學(xué)雜志，2012，32（16）：3471-3473.

[7] 杜津，王國林. 硫化氫對大鼠肝缺血再灌注損傷的影響[J]. 中華麻醉學(xué)雜志，2011，31（9）：1136-1138.

[8] 李國風(fēng)，李蘭芳，張勤增，等. 硫化氫對局灶性腦缺血損傷大鼠腦組織神經(jīng)元凋亡的影響[J]. 中國病理生理雜志，2012，（11）：2105-2106.

[9] 劉浩，白曉斌，史松，等. 硫化氫對大鼠腸缺血再灌注損傷的保護(hù)作用[J]. 西安交通大學(xué)學(xué)報（醫(yī)學(xué)版），2007， 28（6）：668-671.

[10] Szabó C. Hydrogen sulphide and its therapeutic potential[J]. Nat Rev Drug Discov，2007，6（11）： 917-935.

[11] 孟潁，朱仁之. 肺缺血再灌注損傷發(fā)病機(jī)制的研究進(jìn)展[J]. 中國醫(yī)學(xué)理論與實(shí)踐，2002，2002（4）：385-387.

[12] Ruiz-Ginés JA，López-Ongil S，González-Rubio M，et al. Reac tive oxygen species induce proliferation of bovine aortic endo thelial cells[J]. J Cardiovasc Pharmaco，2000， 35（1）：109-113.

[13] 李穎川，姜禎. 尿蛋白酶抑制劑防治肺缺血再灌注損傷的實(shí)驗研究[J]. 復(fù)旦學(xué)報（醫(yī)學(xué)版）， 2004，31（2）：182-184.

（收稿日期：2014-02-25）

表2 各組血漿MDA含量及超氧化物岐化酶（SOD）活性（x±s）

注：與Sham組比較，*P<0.05；與I/R組比較，#P<0.01

2.3 肺通透性指數(shù)（LPI）和BALF中白細(xì)胞計數(shù)、中性粒細(xì)胞百分比

與Sham組比較，I/R組BALF中WBC總數(shù)及中性粒細(xì)胞百分比明顯升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01），I/R+ NaHS組BALF中WBC總數(shù)及中性粒細(xì)胞百分比雖比Sham組有所升高（P<0.05），但與I/R組對比BALF中WBC總數(shù)及中性粒細(xì)胞百分比明顯降低， 差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P均<0.01）；與Sham組比較，I/R組肺通透指數(shù)明顯升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01），I/R+ NaHS組肺通透指數(shù)雖比Sham組有所升高（P<0.05）但與I/R組對比，肺通透指數(shù)明顯降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）。見表3。

表3 各組肺通透性指數(shù)及BALF中WBC計數(shù)、PMN百分比（x±s，n=8）

注：與Sham組比較，*P<0.05；與I/R組比較，#P<0.01

2.4 肺組織病理結(jié)果

Sham組肺泡腔完整性好，肺泡間隔均勻無增厚，肺泡壁光滑，無滲出物及炎細(xì)胞浸潤（封三圖1）；I/R組出現(xiàn)明顯的肺組織水腫，毛細(xì)血管擴(kuò)張、充血，肺泡間隔增厚，肺泡腔內(nèi)充滿大量紅細(xì)胞及滲出物（封三圖2）；I/R+ NaHS組肺組織毛細(xì)血管輕微擴(kuò)張，與I/R組比較，肺泡間隔及肺泡水腫減輕，肺泡腔滲出物明顯減少（封三圖3）。

3 討論

H2S本是一種有毒氣體，但近些年發(fā)現(xiàn)H2S是一種新型氣體信號分子，對心血管系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)、消化道系統(tǒng)等均具有重要的調(diào)節(jié)作用[5]。新近研究證實(shí)，H2S對心臟[6]、肝臟[7]、腦[8]、小腸[9]缺血再灌注損傷有一定的保護(hù)作用，其機(jī)制可能與抗氧化凋亡提高缺血耐受性有關(guān)[10]。

肺缺血再灌注損傷（ischemia-reperfusion injury，I/R）的機(jī)制還不特別清晰，近年來認(rèn)為炎性介質(zhì)、氧自由基、內(nèi)皮細(xì)胞的損傷等機(jī)制在肺缺血再灌注損傷中有重要作用[11]。內(nèi)皮細(xì)胞的損傷引起肺毛細(xì)血管擴(kuò)張，從而通透性增高，引發(fā)肺組織水腫，肺組織濕/干重比值可反映肺水腫情況，再灌注后W/D比值，BALF中白細(xì)胞計數(shù)、中性粒細(xì)胞百分比及肺通透性指數(shù)均增高，而NaHS后處理后上述指標(biāo)明顯下降（P<0.05），其對肺缺血再灌注損傷產(chǎn)生了很好的效果。

近年來證明氧自由基和活性氧是引起缺血再灌注損傷的主要影響因素。與缺血再灌注損傷有關(guān)的氧自由基（OFR）有過氧化氫（H2O2）、超氧陰離子（O2-）[12]。正常生理狀態(tài)下，氧自由基所引起的損傷可被機(jī)體“抗氧化屏障”所抑制，然而缺血再灌注使組織產(chǎn)生過多的氧自由基，破壞了內(nèi)源性抗氧化系統(tǒng)，從而引起細(xì)胞壞死和組織的損傷。在此過程中，雙鍵脂肪酸在氧化后形成丙二醛，其含量可間接反映肺組織氧化損傷的情況。本實(shí)驗結(jié)果表明，I/R組中MDA含量與Sham組相比顯著升高，表明肺缺血再灌注時，體內(nèi)大量的氧自由基積累，導(dǎo)致肺水腫。而NaHS處理后，MDA含量雖然比Sham組高，而與I/R組相比顯著下降（P<0.05）。實(shí)驗結(jié)果表明H2S處理后，可降低再灌注后血漿MDA的含量，能減輕氧自由基所引起的氧化損傷，從而達(dá)到一定的保護(hù)能力。SOD是機(jī)體的重要抗氧化活性酶，其活性水平能間接反映機(jī)體的抗氧化能力[13]。本實(shí)驗中觀察到I/R組SOD活性與Sham組相比顯著下降，表明肺缺血再灌注后內(nèi)源性抗氧化活性酶消耗，從而導(dǎo)致氧自由基含量增加，破壞肺組織內(nèi)皮細(xì)胞，引起肺毛細(xì)血管擴(kuò)張，引起肺水腫，而NaHS處理后，SOD活性與I/R組相比顯著升高（P<0.05）。實(shí)驗結(jié)果表明，H2S處理后可以提高機(jī)體內(nèi)源性抗氧化活性酶的活性，從而達(dá)到清除氧自由基的目的。

本實(shí)驗結(jié)果表明，外源性硫化氫可通過清除基體氧自由基，提高抗氧化酶活性，起到對肺缺血再灌注損傷起保護(hù)作用。然而對其劑量、給藥時間等尚需進(jìn)一步研究。

[參考文獻(xiàn)]

[1] Alam S，Chan KM. Noninfectious pulmonary complications after organ transplantation[J]. Curr Opin PulmMed，1996，2（5）：412-418.

[2] 郝茂林，徐正衸，倪世容，等. 葛根素對兔肺缺血再灌注損傷中細(xì)胞凋亡的影響[J]. 溫州醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2005，35（2）：92-95.

[3] WangR. Two's company，three's a crowd：can H2S be the third endogenous gaseous tranamitter[J]. FASEB J，2002， 16 （13）：1792-1798.

[4] Sekido N，Mukadia N，Harada A，et al. Prevention of lung reperfusion injury in rabbits by a monoclonal antibody against interleukin-8 [J]. Nature，1993，365：654-657.

[5] iowicka E，Be3towski J. Hydrogen sulfide （H2S）-the third gas of interest for pharmacologists[J]. Pharmacolo Rep，2007， 59（1）：4-24.

[6] 許言午，張江虹，張麗娜，等. 硫化氫對D-半乳糖所致大鼠心肌組織氧化應(yīng)激和細(xì)胞凋亡的影響[J]. 中國老年學(xué)雜志，2012，32（16）：3471-3473.

[7] 杜津，王國林. 硫化氫對大鼠肝缺血再灌注損傷的影響[J]. 中華麻醉學(xué)雜志，2011，31（9）：1136-1138.

[8] 李國風(fēng)，李蘭芳，張勤增，等. 硫化氫對局灶性腦缺血損傷大鼠腦組織神經(jīng)元凋亡的影響[J]. 中國病理生理雜志，2012，（11）：2105-2106.

[9] 劉浩，白曉斌，史松，等. 硫化氫對大鼠腸缺血再灌注損傷的保護(hù)作用[J]. 西安交通大學(xué)學(xué)報（醫(yī)學(xué)版），2007， 28（6）：668-671.

[10] Szabó C. Hydrogen sulphide and its therapeutic potential[J]. Nat Rev Drug Discov，2007，6（11）： 917-935.

[11] 孟潁，朱仁之. 肺缺血再灌注損傷發(fā)病機(jī)制的研究進(jìn)展[J]. 中國醫(yī)學(xué)理論與實(shí)踐，2002，2002（4）：385-387.

[12] Ruiz-Ginés JA，López-Ongil S，González-Rubio M，et al. Reac tive oxygen species induce proliferation of bovine aortic endo thelial cells[J]. J Cardiovasc Pharmaco，2000， 35（1）：109-113.

[13] 李穎川，姜禎. 尿蛋白酶抑制劑防治肺缺血再灌注損傷的實(shí)驗研究[J]. 復(fù)旦學(xué)報（醫(yī)學(xué)版）， 2004，31（2）：182-184.

（收稿日期：2014-02-25）