于 樂，丁雪貞，孫雅靜，高 原，魏 丹，萬學東

（河南科技大學醫(yī)學院，河南洛陽471003）

CD90和VEGF在肝細胞癌組織中的表達

于 樂，丁雪貞，孫雅靜，高 原，魏 丹，萬學東

（河南科技大學醫(yī)學院，河南洛陽471003）

目的研究CD90和血管內皮生長因子（VEGF）在肝細胞癌組織中的表達及其臨床意義。方法利用免疫組化法檢測33例肝細胞癌手術切除標本、25例癌旁組織標本和20例正常肝臟組織標本中CD90和VEGF的表達情況。結果肝細胞癌組織中CD90、VEGF的陽性表達率分別為72.73%和81.82%，高于癌旁組織（48.00%和52.00%）和正常肝臟組織（0.00%和45.00%）（P＜0.05）。結論CD90和VEGF表達與肝細胞癌的發(fā)生、發(fā)展關系密切。

肝細胞癌；CD90；血管內皮生長因子

腫瘤干細胞對腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、侵襲、轉移及耐藥起了決定作用［1］。有研究［2］提出CD90是肝細胞癌干細胞的標志物，在肝細胞癌的發(fā)生和轉移中有重要意義。血管內皮細胞生長因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）是目前所知的作用最強的一種促血管生長因子，在誘導腫瘤血管生成中起著重要作用［3］。作者應用免疫組化法檢測CD90、VEGF在肝細胞癌組織中的表達，探討兩者與肝細胞癌的發(fā)生以及浸潤轉移的關系。

1 材料與方法

1.1 標本來源收集解放軍第150醫(yī)院2006年6月至2011年8月接受手術治療肝細胞癌患者術后存檔的石蠟標本33例、癌旁組織標本25例、正常肝臟存檔石蠟標本20例，所有病例均有完整臨床資料。

1.2 試劑兔抗人CD90和兔抗人VEGF單克隆抗體（美國Bioss公司產品）、二步法免疫組化試劑盒（SP-0023）（美國Zymed公司產品均購自北京博奧森生物技術有限公司。DAB顯色試劑盒（AR-0612）購自北京鼎國昌盛生物技術有限公司。其他試劑均為分析純。

1.3 CD90和VEGF檢測方法采用免疫組化法檢測不同肝臟組織標本中CD90和VEGF的表達：石蠟切片常規(guī)脫蠟、水化，水浴法抗原修復，試劑盒A液封閉，一抗二抗結合，DAB顯色顯微鏡下觀察，自來水終止，蘇木素復染2 min，鹽酸乙醇分化10 s，自來水沖洗，梯度乙醇脫水，二甲苯透明，樹膠封片。顯微鏡下觀察結果。

1.4 結果判斷用試劑盒中的陽性片作為陽性對照，PBS取代一抗作為陰性對照。細胞質染色呈棕黃色視為陽性，染色強度：無染色為0分；淺黃色為1分；黃色為2分；棕黃或棕褐色為3分。陽性細胞百分率：無陽性細胞為0分；陽性細胞數＜25%為1分；陽性細胞數25%～＜50%為2分；50%～＜75%為3分；陽性細胞數≥75%為4分。2項之和：0分為（-）；1～2分為（+），3～4分為（++），5～7分為（+++），均為陽性。

1.5 統(tǒng)計學處理應用SPSS 17.0進行統(tǒng)計學分析，率的比較采用χ2檢驗，檢驗水準α=0.05。

2 結果

CD90陽性著色主要分布于細胞質中，呈棕黃色顆粒（圖1），肝細胞癌組織中CD90的陽性表達率為72.73%，高于癌旁組織（48.00%）和正常肝臟組織（0.00%）（P＜0.05）（表1）。VEGF蛋白陽性著色主要分布于細胞漿，呈棕黃色或棕褐色顆粒（圖2），肝細胞癌組織中VEGF的陽性表達率為81.82%，高于癌旁組織（52.00%）和正常肝臟組織（45.00%）（P＜0.05）（表2）。

圖1 CD90在正常肝臟組織（A）、癌旁組織（B）及肝細胞癌組織（C）中的表達（×200）

圖2 VEGF在正常肝臟組織（A）、癌旁組織（B）及肝細胞癌組織（C）中的表達（×200）

表1 CD90在不同肝臟組織中的表達

表2 VEGF在不同肝臟組織中的表達

3 討論

腫瘤侵襲和轉移的一個重要先決條件是黏附分子介導的細胞黏附。CD90是一種細胞黏附分子免疫球蛋白，主要參與細胞之間以及細胞與基質之間的相互作用。在肝臟的形成過程之中，CD90表達于肝臟干細胞或祖細胞表面，而在成人的肝臟中表達卻十分稀少［4］。目前，CD90已經被認為是肝細胞癌干細胞的表面標志物。肝細胞癌干細胞標志物大部分來源于肝細胞癌細胞系，而CD90在人肝細胞癌組織及肝細胞癌細胞系中的存在均已得到證實。本研究結果顯示，CD90在肝細胞癌組織中的陽性率為72.73%，在癌旁組織中的陽性率為48.00%，在正常肝組織中的陽性率為0.00%，其在肝細胞癌組織中的表達高于癌旁組織及正常肝臟組織，表明CD90可能與肝細胞癌的生長、侵襲和轉移存在密切關系，促進了肝細胞癌的發(fā)生、發(fā)展。

VEGF是腫瘤血管生成過程中最重要的促血管生成因子，在誘導腫瘤血管生成、促進腫瘤生長、侵襲以及轉移中起著重要作用［5］。研究［6-8］表明，VEGF在肝細胞癌組織中表達明顯增強。本研究結果顯示，VEGF在肝細胞癌組織中的陽性率為81.82%，在癌旁組織中的陽性率為52.00%，在正常肝組織中的陽性率為45.00%，其在肝細胞癌組織中的表達明顯高于癌旁組織及正常肝臟組織，提示VEGF表達增高在肝細胞癌的生長過程中起重要作用，并且與腫瘤轉移有關。

綜上所述，CD90及VEGF的異常表達可能與肝細胞癌組織的過快生長、對周圍組織的侵襲破壞能力強、淋巴管或血行轉移早等存在密切關系。

［1］ Couzin J.Medicine.Tracing the steps of metastasis，cancer′s menacing ballet［J］.Science，2003，299（5609）：1002-1006.

［2］ Yang ZF，Ho DW，Ng MN，et al.Significance of CD90+cancer stem cells in human liver cancer［J］.Cancer Cell，2008，13（2）：153-166.

［3］ 王洪海，任寧，張輝，等.聯(lián)合檢測VEGF、PD-ECGF和PCNA表達預測肝細胞癌術后復發(fā)及預后［J］.中國臨床醫(yī)學，2005，12（3）：448-451.

［4］ Rege TA，Hagood JS.Thy-1 as a regulator of cell-cell and cell-matrix interactions in axon regeneration，apoptosis，adhesion，migration，cancer，and fibrosis［J］.FASEB J，2006，20（8）：1045 -1054.

［5］ Jackson MW，Roberts JS，Heckford SE，et al.A potential autocrine role for vascular endothelial growth factor in prostate cancer［J］.Cancer Res，2002，62（3）：854-859.

［6］ Iizuka N，Oka M，Yamada-Okabe H，et al.Differential gene expression in distinct virologic types of hepatocellular carcinoma：association with livercirrhosis［J］.Oncogene，2003，22（19）：3007 -3014.

［7］ 陳永杰，付艷忠，趙志華.原發(fā)性肝癌組織中血管內皮生長因子、微血管密度檢測［J］.鄭州大學學報：醫(yī)學版，2007，42（5）：925-927.

［8］ 溫韜，錢海利，謝立，等.肝癌患者血管內皮生長因子、內皮素和一氧化氮的水平變化及其意義［J］.中華肝臟病雜志，2004，12（7）：441.

Expressions of CD90 and VEGF in the Hepatocellular Carcinoma

Yu Le，Ding Xuezhen，Sun Yajing，Gao Yuan，Wei Dan，Wan Xuedong
（Medical College，Henan University of Science and Technology，Luoyang 471003，China）

ObjectiveTo investigate the expressions and clinical significance of CD90 and vascular endothelial growth factor（VEGF）in the hepatocellular carcinoma.MethodsImmunohistochemistry was used to detect the expressions of CD90 and VEGF in the 33 cases of hepatocellular carcinoma tissues，the 25 cases of paraneoplastic tissues and 20 cases of normal liver tissues.ResultsThe positive expression rate of CD90 and VEGF in the hepatocellular carcinoma tissues（72.73%and 81.82%）were higher than those in the paraneoplastic tissues（48.00% and 52.00%）and the normal liver tissues（0.00%and 45.00%）（P＜0.05）.ConclusionThe expressions of CD90 and VEGF are closely related to the canceration and development of hepatocellular carcinoma.

hepatocellular carcinoma；CD90；vascular endothelial growth factor

10.3969/j.issn.1673-5412.2014.02.003

R735.7；R730.23

A

1673-5412（2014）02-0102-03

2014-01-26）

河南科技大學大學生研究訓練計劃項目（編號：2012194）；國家級大學生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓練計劃項目（編號：201210464020）

于樂（1991-），女，學士在讀，參與了肝細胞癌的發(fā)生發(fā)展機制探討工作。E-mail：fishle2012@163.com

萬學東（1966-），男，博士，副教授，主要從事生物化學與分子生物學教學與研究。E-mail：lywxd97@163.com