劉勝林

(天津市西青醫(yī)院檢驗科，天津 300380)

同型半胱氨酸(Hcy)又稱高半胱氨酸(HHcy)，由Vincent du Vigneaud于1931年首次從膀胱結(jié)石中分離出來，是一種含硫氨基酸。它不屬于組成蛋白質(zhì)的20種氨基酸，本身不參與蛋白質(zhì)合成，也沒有特異的3個DNA堿基對其進(jìn)行編碼，在體內(nèi)不能合成，它是由蛋氨酸和半胱氨酸代謝過程中產(chǎn)生的重要中間產(chǎn)物，只能來源于蛋氨酸的分解代謝。1969年Mc Cuny首次提出高水平的同型半胱氨酸濃度是引起血管病變的原因[1]，從此逐漸引起研究者注意。近年研究發(fā)現(xiàn)，心腦血管疾病患者血漿Hcy水平明顯增高，并且與病變程度及遠(yuǎn)期預(yù)后、生存率、病死率有關(guān)[2-5]。本次研究旨在應(yīng)用全自動生化分析儀(循環(huán)酶法)對各種心腦血管疾病患者和健康對照組進(jìn)行血漿Hcy濃度測定，然后就檢測結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處理，從而探討在基層醫(yī)院實驗室應(yīng)用循環(huán)酶法測定血漿Hcy作為心腦血管疾病發(fā)生獨立危險因素的臨床應(yīng)用價值。

1 材料與方法

1.1研究對象 健康對照組為天津市西青醫(yī)院2011年6月-2013年6月門診健康查體者100例，男女各50例，年齡35～60歲，近期未服用任何藥物，且未患有影響血漿Hcy結(jié)果的疾病。心腦血管疾病組為同期本院收治的住院患者100例，近期未服用任何藥物，且未患有影響血漿Hcy結(jié)果的其它疾病，年齡40～60歲，其中男60例，女40例，均經(jīng)臨床與心電圖及CT確診。心腦血管疾病和健康體檢兩組在年齡、性別等方面差異無統(tǒng)計學(xué)意義。

1.2原理 利用小分子捕獲技術(shù)(SMT)的S-腺苷Hcy(SAH)水解酶的方法[7]。在三-乙-羧乙基膦(TCEP)作用下，氧化型Hcy被轉(zhuǎn)化為游離型Hcy，后者通過與共價底物S-腺苷甲硫氨酸反應(yīng)，生成蛋氨酸和SAH。SAH被SAH水解酶水解成腺苷和Hcy，Hcy經(jīng)循環(huán)反應(yīng)放大信號，同時產(chǎn)生腺苷，腺苷立即水解成氨和次黃嘌呤，氨在谷氨酸脫氫酶的作用下使NADH轉(zhuǎn)化為NAD，樣本中的Hcy含量與NADH轉(zhuǎn)化速率呈正比。

1.3研究方法 清晨抽取空腹靜脈血3 ml，置于密閉干燥管中，1 h內(nèi)常規(guī)離心分離血清待檢。采用Hcy循環(huán)酶法檢測試劑盒。在全自動生化分析儀上進(jìn)行檢測，具體操作嚴(yán)格按說明書進(jìn)行。

1.4儀器和試劑 采用西門子ADVIA-1800全自動生化分析儀測定。同型半胱氨酸試劑盒和膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL)的檢測試劑盒均購自上?？迫A診斷有限公司。具體檢測過程嚴(yán)格按照試劑說明書進(jìn)行。

1.5Hcy正常值范圍 通常認(rèn)為成人空腹血清總Hcy水平正常值為0～15 μmol/L，理想值<10 μmol/L，高于15 μmol/L被認(rèn)為是高同型半胱氨酸血癥。

2 結(jié) 果

2.1兩組血漿Hcy水平及高Hcy血癥的比較 心腦血管疾病組血漿Hcy為(27.80±15.14)μmol/L，對照組為(12.10±4.41)μmol/L，前者血漿Hcy水平明顯高于后者，二者比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。心腦血管疾病組高Hcy血癥的發(fā)生率是83%，也高于對照組的24%，差異具有統(tǒng)汁學(xué)意義(P<0.01)。見表1。

2.2兩組人群其它有關(guān)生化指標(biāo)比較 心腦血管疾病組與對照組相比TC、TG、LDL增高，HDL下降，均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，見表2。

表1 兩組血漿Hcy水平及高Hcy率的比較

表2 兩組人群其它有關(guān)生化指標(biāo)比較(mmom/L)

3 討 論

眾所周知，心腦血管疾病和腫瘤一樣，是目前我國發(fā)病率及死亡率比較高的疾病。對臨床實驗室而言， Hcy測定過去曾用氨基酸分析儀測定，比較復(fù)雜且不穩(wěn)定。目前主要應(yīng)用高壓液相色譜技術(shù)(HPLC)法、熒光偏振法等[6-7]。近幾年出現(xiàn)的新方法——循環(huán)酶法[6]，具有快速、準(zhǔn)確、方便的優(yōu)點，經(jīng)實驗證實其結(jié)果與高效液相色譜法一致性良好，是基層醫(yī)院實驗室檢測血Hcy比較好的方法[6,8-10]。而且由于循環(huán)酶法可利用現(xiàn)有設(shè)備檢測，試劑相對較為經(jīng)濟(jì)，是推廣Hcy的最佳檢測方法。

本次實驗結(jié)果顯示，心腦血管疾病組血漿Hcy水平明顯高于對照組(P<0.01)，而且心腦血管疾病患者中高Hcy血癥發(fā)生概率也遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于健康體檢者(P<0.01)。這表明心腦血管疾病患者血漿Hcy水平及高Hcy血癥發(fā)生率與健康人群相比有明顯差別。而其它生化檢測表明，心腦血管疾病患者TC、TG、LDL水平升高，HDL水平下降，說明血脂水平，對心腦血管疾病的發(fā)生也具有一定的影響，是疾病發(fā)生的危險因素，但是有相當(dāng)一部分患者血脂水平在正常參考范圍內(nèi)，只有Hcy水平不同程度異常，說明Hcy是心腦血管疾病重要臨床指標(biāo)之一，也可能是心腦血管疾病發(fā)生獨立危險因素。

多種原因可使Hcy升高：(1)基因多態(tài)性：MTHFR基因突變最常見為C667T點突變，CBS基因突變以位于287密碼子的844ins68bp和位于307密碼子的C919A最常見，結(jié)果導(dǎo)致MTHFR和CBS活性減低，產(chǎn)生高同型半胱氨酸血癥。(2)疾病與藥物：腎功能衰竭、甲狀腺功能減退、嚴(yán)重貧血、嚴(yán)重硬皮病、惡性腫瘤等疾病以及應(yīng)用氨甲喋呤、一氧化氮、抗癲藥、利尿藥等可致Hcy水平升高。⑶營養(yǎng)因素及飲食習(xí)慣：Hcy代謝過程所需的輔因子葉酸、維生素B6、維生素B12缺乏可能影響酶的活性及Hcy的代謝轉(zhuǎn)化。例如飲酒、吸煙、大量飲用咖啡可影響維生素及葉酸吸收，也會引起Hcy濃度升高。⑷性別與年齡：研究發(fā)現(xiàn)Hcy隨年齡增長而升高，且男性高于女性，女性絕經(jīng)后高于絕經(jīng)前?？紤]Hcy與雌激素水平變化有關(guān)。

臨床研究及大規(guī)模流行病學(xué)調(diào)查表明，血漿Hcy水平升高是動脈硬化，動、靜脈血栓等疾病重要的獨立的危險因素。Uland等[11]對1800例患者的研究表明高Hcy血癥與心血管疾病密切相關(guān)，早期心血管疾病患者血漿Hcy比健康對照組高30%左右，且增高的程度與血管損傷程度呈正相關(guān)。高Hcy組與健康對照組相比，患冠心病的危險性增加23倍。5年后高Hcy組與健康對照組相比急性心肌梗死的危險性增加3倍。另有報道[12]：血漿Hcy水平與腦血管病密切相關(guān)，腦卒中患者Hcy水平明顯高于健康對照組。一項涉及1200例患者和1200例健康對照組流行病學(xué)資料顯示[13]，輕中度高Hcy血癥可明顯增加腦血管病發(fā)生的危險性。盧玉振等[14]對50例腦梗死和50例冠心病患者Hcy的研究結(jié)果表明，冠狀動脈疾病死亡率與患者血漿Hcy水平呈正相關(guān)。有資料表明，冠心病患者中血漿Hcy>15 μmol/L時4年隨訪中死亡率為24.7%，而血漿Hcy<9 μmol/L時死亡率為3.8%；還有報道指出，血漿Hcy每升高4 μmol/L，心肌梗死相對危險性增加1.41倍，血漿Hcy水平每升高5 μmol/L，相當(dāng)于膽固醇升高5005 μmol/L。以上這些研究表明與血脂(膽固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白等)等危險因素相比，高同型半胱氨酸對心血管病的危險性要高。由本實驗結(jié)果可知高血漿Hcy與心腦血管病的發(fā)生有一定的關(guān)系，與以上不同研究的結(jié)果較為一致，可以證明檢測Hcy水平對心腦血管疾病的診斷、療效觀察和預(yù)后判定具有重要意義，是心腦血管疾病發(fā)生的危險因素之一。

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