麥 妙

(海南省三亞市食品藥品監(jiān)督管理局，海南三亞 572000)

甘草被譽(yù)為中藥中的“國(guó)老”，其性平、味甜，具有益氣補(bǔ)中、緩急止痛、潤(rùn)肺止咳、瀉火解毒之功效，尤其是其特有的甜味能蓋過(guò)其他藥材的苦味，在兒科處方中較為常見(jiàn)[1]。甘草片屬中成藥，具有鎮(zhèn)咳祛痰作用，主要有效成分為甘草流浸膏。由于甘草品的止咳效果顯著，其在臨床上的應(yīng)用十分廣泛。正所謂“十方九草”，隨著現(xiàn)代科學(xué)技術(shù)的發(fā)展，甘草的臨床應(yīng)用更是越來(lái)越廣泛[2～4]，正是如此大的需求量，市面上的甘草多為人工種植品。有機(jī)氯類農(nóng)藥是被廣泛運(yùn)用的殺蟲(chóng)劑，但對(duì)人體百害無(wú)一利，該類農(nóng)藥具有難分解、性質(zhì)穩(wěn)定的特點(diǎn)，故而殘留期長(zhǎng)，且容易在人體內(nèi)累積造成慢性中毒，長(zhǎng)期的大量使用對(duì)環(huán)境已經(jīng)造成了較大的污染[5]，我國(guó)在20世紀(jì)80年代已停用了有機(jī)氯類農(nóng)藥，但目前仍能在中藥中檢出該類農(nóng)藥。為探究有機(jī)氯在中成藥中的殘留[6]，本文將氣相色譜法用于檢測(cè)甘草片中有機(jī)氯含量，期望通過(guò)該檢測(cè)手段快速、準(zhǔn)確地檢測(cè)中成藥中有機(jī)氯類農(nóng)藥的殘留量。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

島津氣相色譜儀GC-2010plus)含氣相色譜工作站和電子捕獲檢測(cè)器(Ni-ECD)，農(nóng)殘專用石英毛細(xì)管柱(30 m ×0.25 mm ×0.25 μm)，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀YRE-202B(上海標(biāo)和儀器公司)，電子分析天平(上海方瑞儀器廠)，循環(huán)水真空泵SHZ-III型(江蘇金壇儀器廠)，超聲波發(fā)生器(江蘇金壇儀器廠)，800B臺(tái)式離心機(jī)(上海安亭科學(xué)儀器廠)。

1.2 試藥

石油醚、丙酮、硫酸、二氯甲烷及無(wú)水硫酸鈉等均購(gòu)自廣州化學(xué)試劑廠，所用試劑均為分析純;六六六(BHC)包括 α-BHC、γ-BHC、β-BHC、δ-BHC 4 種異構(gòu)體;滴滴涕(DDT)也有4種異構(gòu)體，分別為PP'-DDE、PP'-DDD、OP'-DDT 和 PP'-DDT;五氯硝基苯(PCNB)濃度均為100 μg/ml。以上有機(jī)氯標(biāo)準(zhǔn)品購(gòu)自國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)研究中心。

2 方法

2.1 色譜條件

島津氣相色譜儀和氣相工作站，Ni-ECD檢測(cè)器，農(nóng)殘檢測(cè)專用石英毛細(xì)管柱(30 m×0.25 mm×0.25 μm);進(jìn)樣口溫度250℃，檢測(cè)器溫度300℃，柱溫220℃[7]。升溫程序?yàn)?初始溫度120℃，每分鐘升溫10℃，升到200℃終止，保持終止溫度2 min，從200℃以每分鐘2℃的速率升溫，升到230℃后保持2 min，載氣為高純氮?dú)?，流速?.5 ml/min，壓力為100 kPa，尾吹氣流量56.3 ml·min－1，進(jìn)樣量 1 μL 不分流進(jìn)樣[8]。

2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制

混合對(duì)照品溶液的制備:先制備對(duì)照品儲(chǔ)備液，精密吸取 α-BHC、β-BHC、γ-BHC、δ-BHC、PP'-DDE、OP'-DDT、PP'-DDD、PP'-DDT 和五氯硝基苯 1 ml，置于25 ml容量瓶中，用丙酮與石油醚混合有機(jī)溶劑稀釋至刻度，儲(chǔ)備液濃度為4.0 μg·ml－1;精確吸取一定體積的對(duì)照品儲(chǔ)備液于25 ml容量瓶中，用石油醚稀釋至刻度，分別配置 0.01、0.05、0.10、0.50及1.0 μg·ml－1不同濃度的一系列對(duì)照品溶液;在上述的色譜條件下進(jìn)樣1 μL，以濃度為橫坐標(biāo)(X)、峰面積為縱坐標(biāo)(Y)，建立標(biāo)準(zhǔn)曲線方程[9]。

2.3 精密度實(shí)驗(yàn)

精密吸取一定量標(biāo)準(zhǔn)品溶液，相當(dāng)于含量5 μg/L，按照2.1色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄峰高和保留時(shí)間，根據(jù)峰面積計(jì)算RSD值。

2.4 重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn)

稱取甘草片樣品3份，每份按照含甘草流浸膏粉100 mg為標(biāo)準(zhǔn)，加入30 ml丙酮與石油醚混合有機(jī)溶劑，超聲提取25 min過(guò)濾棄渣，并用5 ml石油醚洗滌2次并入上述濾液中，濾液放入旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)瓶中濃縮干，再用石油醚定容并用濃硫酸磺化，2500 r/min離心15 min，靜置取上清液中，再按2.1色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次，根據(jù)峰面積計(jì)算RSD值[10]。

2.5 回收率實(shí)驗(yàn)

稱取相當(dāng)于含甘草流浸膏粉100 mg的甘草片樣品，制備供試品溶液，分別加入濃度為0.05、0.10、0.15 μg/ml的對(duì)照品標(biāo)準(zhǔn)溶液，3 個(gè)濃度均按2.1色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄峰高和峰面積并計(jì)算回收率[11]。

3 結(jié)果

3.1 線性考察結(jié)果

表1顯示，對(duì)照品混合物的濃度在10～1000 μg·ml－1范圍內(nèi)線性良好，相關(guān)系數(shù) r≥0.9961。

表1 標(biāo)準(zhǔn)曲線方程

3.2 精密度和重復(fù)性結(jié)果

根據(jù)對(duì)照品混合溶液峰面積計(jì)算RSD值在2.18% ～6.45%范圍內(nèi)，檢測(cè)儀器的精密度良好;樣品峰面積計(jì)算RSD值為6.17%，檢測(cè)方法重現(xiàn)性好(精密度和重現(xiàn)性就是通過(guò)峰面積計(jì)算RSD值，不要單獨(dú)將各測(cè)定峰面積值列出)。

3.3 回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果

表2顯示，樣品平均回收率89.7% ～101.2%，該檢測(cè)方法回收率高且準(zhǔn)確、可靠。

3.4 樣品檢測(cè)結(jié)果

樣品和對(duì)照品溶液做隨行對(duì)照檢測(cè)，含量計(jì)算采用外標(biāo)法。從色譜圖1、2中可見(jiàn)，本甘草片樣品中只檢測(cè)出β-BHC，檢測(cè)出的殘留量為0.008 mg/kg。

4 結(jié)論

農(nóng)藥殘留會(huì)污染藥材而影響用藥安全，尤其是高毒性的有機(jī)氯類農(nóng)藥，會(huì)對(duì)人體健康和用藥安全產(chǎn)生極大影響[12，13]。中成藥的質(zhì)量不僅要相關(guān)的有效成分合格，同時(shí)農(nóng)殘、重金屬等對(duì)藥品質(zhì)量都有影響，對(duì)人體健康有危害的物質(zhì)，也應(yīng)限定在一定范圍內(nèi)。我國(guó)是中成藥的生產(chǎn)和消費(fèi)大國(guó)，臨床療效也充分證明了中成藥的獨(dú)特作用，但目前中成藥的出口和國(guó)外對(duì)中成藥的接受程度均受到限制，其中農(nóng)殘是一個(gè)很重要的原因[14]，為此加強(qiáng)中成藥的農(nóng)藥殘留分析十分必要。世界衛(wèi)生組織從20世紀(jì)80年代就將農(nóng)殘列為檢測(cè)項(xiàng)目，我國(guó)2000版《中國(guó)藥典》開(kāi)始對(duì)農(nóng)殘進(jìn)行限量要求，特別是《中藥材生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》的實(shí)施，對(duì)從源頭上控制農(nóng)藥殘留量起到了至關(guān)重要的作用[15]。

圖1 混合標(biāo)準(zhǔn)品氣相色譜圖

圖2 樣品的色譜圖

中成藥成分比較復(fù)雜，甘草片中就含有阿片粉、樟腦、八角茴香油、苯甲酸鈉、甘草酸等許多成分，部分化合物的結(jié)構(gòu)、理化性質(zhì)等與有機(jī)氯農(nóng)藥相似，使得樣品與有機(jī)氯農(nóng)藥的分離、凈化難度增大。為保證檢測(cè)結(jié)果的可靠性，中成藥中有機(jī)氯農(nóng)殘的處理技術(shù)一般較為繁瑣，這也是當(dāng)前有機(jī)氯農(nóng)殘檢測(cè)中普遍存在的問(wèn)題。繁瑣的前處理步驟降低了檢測(cè)效率和檢測(cè)的可靠性，不能滿足實(shí)際需要，而建立簡(jiǎn)便、快速、可靠的樣品前處理和分離檢測(cè)方法，已成為未來(lái)中成藥中有機(jī)氯農(nóng)殘檢測(cè)的發(fā)展趨勢(shì)[12]。針對(duì)當(dāng)前中成藥有機(jī)氯農(nóng)殘檢測(cè)主要集中在BHC和DDT上的特點(diǎn)，本文以石油醚和丙酮為超聲提取溶劑，采用外標(biāo)法計(jì)算含量，并參照《中華人民共和國(guó)藥典(2010版)》中“有機(jī)氯類農(nóng)藥殘留檢測(cè)法”。該檢測(cè)相對(duì)簡(jiǎn)便、快速，其準(zhǔn)確度和可靠性高，在實(shí)際檢測(cè)工作中，不但適用于中成藥甘草片的有機(jī)氯檢測(cè)，也可以用于檢測(cè)其他中成藥樣品中有機(jī)氯的農(nóng)藥殘留。

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