冷英梅董向光

RP-HPLC法測(cè)定不同產(chǎn)地牡丹皮中丹皮酚的含量

冷英梅1董向光2

目的建立采用反相高效液相色譜法（RP-HPLC）測(cè)定不同產(chǎn)地牡丹皮中丹皮酚的含量。方法采用Hypersil ODS2 C18色譜柱，以甲醇-水（45:55）為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為274nm。結(jié)果丹皮酚在0.046～9.200μg/L范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系（r為0.9996），平均回收率為99.3%，RSD為2.16%。結(jié)論本法簡(jiǎn)便、快捷、重復(fù)性好，可用于不同產(chǎn)地牡丹皮藥材中丹皮酚的含量測(cè)定。

高效液相色譜法；牡丹皮；丹皮酚

牡丹皮在我國(guó)已有近2000年的藥用歷史，占有十分重要的地位。隨著對(duì)牡丹皮需求的不斷擴(kuò)大，各地人工種植的規(guī)模亦逐漸增大，牡丹皮中主要活性丹皮酚，不同產(chǎn)地牡丹皮中含量有比較大的差異，影響藥材質(zhì)量[1]。為提高臨床治療的效果，本文采用反相高效液相色譜（RP-HPLC）法對(duì)不同產(chǎn)地牡丹皮中丹皮酚的含量進(jìn)行測(cè)定，為合理選用藥材及原藥材質(zhì)量控制提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料丹皮酚對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：110708-200507）；不同產(chǎn)地牡丹皮原藥材均購(gòu)自河北安國(guó)藥材市場(chǎng)，經(jīng)鑒定為牡丹皮，乙腈（山東禹王試液有限公司禹成化工廠，色譜純）、甲醇（上海振興化工一廠，色譜純），其余試劑均為分析純。

1.2 儀器超聲波清洗器（上海必能信超聲有限公司）；Agilent 1100高效液相色譜儀（Agilent 1100色譜泵，Agilent 1100自動(dòng)進(jìn)樣器紫外檢測(cè)器，Agilent 1100色譜工作站）；AL104/01電子天平（梅特勒－托利多儀器有限公司）。

1.3 方法

1.3.1 色譜條件 色譜柱為Hypersil ODS2 C18色譜柱；丹皮酚的色譜條件以甲醇-水（45:55）為流動(dòng)相，流速1ml/min；檢測(cè)波長(zhǎng)為274nm。

1.3.2 丹皮酚對(duì)照品溶液的制備 精密稱定丹皮酚對(duì)照品適量，置于10ml量瓶中，加甲醇溶解并定容，即得丹皮酚對(duì)照品，濃度為9.2μg/L，備用。

1.3.3 供試品溶液的制備 取牡丹皮粉末（過45目篩）0.5g，精密稱定，置于100ml具塞的錐形瓶中，加入75%甲醇30ml超聲（500W，40Hz）提取45min，放冷，補(bǔ)足減失的重量，靜置10min后濾過。精密量取續(xù)濾液1ml，置于10ml的量瓶中，用甲醇適量定容，即得。

1.4 方法學(xué)考察

1.4.1 線性關(guān)系的考察 精密吸取丹皮酚對(duì)照品溶液0.05、0.5、1、2、5ml置于10ml量瓶中，定容，吸取對(duì)照品溶液20μl，測(cè)定，以濃度（X）與峰面積（Y）作圖得標(biāo)準(zhǔn)曲線，經(jīng)回歸得 Y1=1.9325X＋7.1648，r=0.9996。結(jié)果表明，丹皮酚在 0.046～9.200μg/L范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系。

1.4.2 精密度實(shí)驗(yàn) 取供試品溶液，在色譜條件下，連續(xù)進(jìn)樣5次，每次進(jìn)樣20μl，測(cè)定丹皮酚的峰面積，RSD值為1.46%。表明精密度良好。

1.4.3 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 取供試品溶液，在色譜條件下，每隔2h精密吸取20μl注入高效液相色譜儀，連續(xù)進(jìn)樣7次，測(cè)定峰面積，RSD值為0.96%。表明供試品溶液中丹皮酚在12h內(nèi)基本穩(wěn)定。

1.4.4 重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 取同一批樣品，按照“2.3”項(xiàng)下方法平行制備5份供試品溶液，精密吸取20μl注入高效液相色譜儀，按照丹皮酚的色譜條件測(cè)定丹皮酚的峰面積，計(jì)算含量。RSD值為1.25%。表明此方法測(cè)定丹皮酚的含量，重現(xiàn)性良好。

1.4.5 加樣回收率實(shí)驗(yàn) 精密稱取已知含量的同一批牡丹皮藥材粉末（過45目篩）樣品6份，每份0.2g，按比例加入丹皮酚對(duì)照品，按照“2.3”項(xiàng)下方法制備溶液，分別精密吸取20μl注入高效液相色譜儀，按照色譜條件測(cè)定丹皮酚的峰面積，計(jì)算回收率。丹皮酚回收率為99.3%，RSD值為2.16%，回收率符合相關(guān)規(guī)定。

1.4.6 樣品含量測(cè)定 按照“2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按照色譜條件測(cè)定8個(gè)不同產(chǎn)地牡丹皮樣品中丹皮酚的峰面積，按照回歸方程，計(jì)算各樣品中丹皮酚的含量。

2 結(jié)果

不同產(chǎn)地牡丹皮中丹皮酚的含量，見表1。

表1 不同產(chǎn)地牡丹皮中丹皮酚的含量(%)

3 討論

牡丹皮是一種較為常用的大宗藥材，《中國(guó)藥典》2010年版規(guī)定[2]，牡丹皮為毛茛科植物牡丹的干燥根皮，具有清熱涼血、散瘀活血等功效，臨床主要用于熱入營(yíng)血、溫毒發(fā)斑、無汗骨蒸、經(jīng)閉痛經(jīng)等。在臨床中應(yīng)用非常廣泛。牡丹皮中主要活性成分為丹皮酚，研究表明，丹皮酚具有抗菌消炎、抗心律失常、保肝護(hù)肝、增強(qiáng)免疫等作用[3]。本研究采用 RP-HPLC測(cè)定不同產(chǎn)地牡丹皮中丹皮酚的含量，可客觀評(píng)定不同產(chǎn)地藥材的質(zhì)量，有利于選用合適的藥材。

本文研究結(jié)果表明，不同產(chǎn)地牡丹皮藥材中丹皮酚的含量差別非常大，藥材質(zhì)量參差不齊。出現(xiàn)差異的原因可能是由生長(zhǎng)環(huán)境、生產(chǎn)管理等多因素造成。為保證牡丹皮藥材的質(zhì)量，須從源頭抓起在，生產(chǎn)基地實(shí)施GAP種植。

[1] 李向陽,屠萬倩,張留記.RP-HPLC法測(cè)定不同產(chǎn)地的牡丹皮中芍藥苷和丹皮酚的含量[J].中藥新藥與臨床藥理,2011,22(5):563-565.

[2] 中華人民共和國(guó)國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典Ⅰ部[S].北京:化學(xué)工業(yè)出版社, 2010:160-161.

[3] 李方軍.牡丹皮化學(xué)成分及藥理作用研究進(jìn)展[J].安徽醫(yī)藥, 2004,8(1):9-10.

R927.2

A

1673-5846(2014)01-0211-02

1 山東省海陽市食品藥品稽查大隊(duì)，山東煙臺(tái) 265100

2 山東省海陽經(jīng)濟(jì)開發(fā)區(qū)管理委員會(huì)，山東煙臺(tái) 265100