楊妙玲 高飛

暨南大學(xué)附屬第一醫(yī)院消化內(nèi)科，廣東 廣州 510630

Hes1在結(jié)腸癌組織中的表達(dá)及對(duì)SW620細(xì)胞成瘤能力的影響

楊妙玲 高飛*

暨南大學(xué)附屬第一醫(yī)院消化內(nèi)科，廣東 廣州 510630

背景與目的：研究發(fā)現(xiàn)Hes1可促進(jìn)多種腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和侵襲轉(zhuǎn)移，且Hes1過(guò)表達(dá)可能會(huì)導(dǎo)致結(jié)腸癌的發(fā)生。本研究探討Hes1在結(jié)腸癌組織中的表達(dá)及其對(duì)結(jié)腸癌SW620細(xì)胞株成瘤能力的影響。方法：免疫組化和定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(quantitative reverse transcription-polymerase chain reaction，qRT-PCR)檢測(cè)Hes1在結(jié)腸癌組織中的表達(dá)并分析其表達(dá)與結(jié)腸癌分化程度的關(guān)系；建立Hes1過(guò)表達(dá)的結(jié)腸癌SW620細(xì)胞株，qRT-PCR和蛋白質(zhì)印跡法(Western blot)分別檢測(cè)Hes1在mRNA水平和蛋白水平的表達(dá)，并在裸鼠體內(nèi)檢測(cè)Hes1對(duì)SW620細(xì)胞皮下成瘤能力的影響。結(jié)果：Hes1在正常結(jié)腸組織中少許表達(dá)，表達(dá)多位于結(jié)腸腺管的底部。然而Hes1在結(jié)腸癌組織中的表達(dá)顯著高于癌旁正常結(jié)腸組織，且Hes1的表達(dá)水平與細(xì)胞分化程度呈負(fù)相關(guān)(P＜0.05)；在結(jié)腸癌SW620細(xì)胞株中穩(wěn)定轉(zhuǎn)染Hes1后，Hes1被成功過(guò)表達(dá)，約380倍(P＜0.05)；用1×105個(gè)Hes1過(guò)表達(dá)的SW620細(xì)胞及對(duì)照細(xì)胞株分別注射至裸鼠皮下，結(jié)果Hes1過(guò)表達(dá)的SW620細(xì)胞成瘤能力增強(qiáng)，瘤體較對(duì)照組大，生長(zhǎng)速度較對(duì)照組快。結(jié)論：Hes1在結(jié)腸癌組織中的表達(dá)顯著高于癌旁正常結(jié)腸組織，并且隨結(jié)腸癌組織分化程度降低而表達(dá)量上調(diào)；Hes1在體內(nèi)促進(jìn)結(jié)腸癌SW620細(xì)胞的成瘤能力。

Hes1；結(jié)腸癌；成瘤能力

目前，我國(guó)結(jié)腸癌發(fā)生率和病死率正在上升，隨著國(guó)人飲食結(jié)構(gòu)的改變，結(jié)腸癌新發(fā)患者日益增多。早期結(jié)腸癌的治療以手術(shù)為主，輔以化療和放療，但很多患者在就診時(shí)已經(jīng)錯(cuò)過(guò)手術(shù)機(jī)會(huì)，晚期結(jié)腸癌的化療效果有限，且容易產(chǎn)生化療耐藥。因此，新的基因治療及生物治療為結(jié)腸癌患者的生存獲益帶來(lái)希望，尋找有價(jià)值的腫瘤標(biāo)志物對(duì)結(jié)腸癌的診斷、治療、預(yù)后尤為重要。研究發(fā)現(xiàn)，Hes1可促進(jìn)多種腫瘤發(fā)生、發(fā)展和侵襲轉(zhuǎn)移［1-4］。另有研究表明，Hes1在消化系統(tǒng)的腫瘤形成中起重要作用［5］，另外，Hes1過(guò)表達(dá)可能會(huì)導(dǎo)致結(jié)腸癌的發(fā)生［6］。然而，Hes1在結(jié)腸癌中的作用及機(jī)制尚不明確。

本研究通過(guò)檢測(cè)Hes1在結(jié)腸癌組織中的表達(dá)及其對(duì)SW620細(xì)胞體內(nèi)成瘤能力的影響，進(jìn)一步探討Hes1與結(jié)腸癌的分化程度是否相關(guān)，為臨床結(jié)腸癌的早期診斷、靶向治療、預(yù)后判斷提供依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

臨床標(biāo)本均為南方醫(yī)科大學(xué)南方醫(yī)院病理科所收集的2010-2012年的77例結(jié)腸癌組織和38例非腫瘤組織(由該院鄭林博士提供)?；颊咝g(shù)前均未接受放療或化療等抗腫瘤治療。

實(shí)驗(yàn)S P F級(jí)裸鼠3～4周齡，體質(zhì)量16～22 g，雌性(購(gòu)自廣東省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心)。寄養(yǎng)于學(xué)校動(dòng)物中心，在恒溫25～27 ℃、恒濕(45%～50%)、新鮮空氣、除塵除菌的無(wú)特殊病原菌飼養(yǎng)室條件下飼養(yǎng)。裸鼠先放于有機(jī)玻璃盒內(nèi)，再置于超凈生物層流架內(nèi)，每個(gè)飼養(yǎng)盒內(nèi)飼養(yǎng)5～6只，經(jīng)無(wú)菌處理的水和飼料供裸鼠自由攝入，高溫消毒的飼料、墊料每3天更換1次，籠具及飲水瓶每3天紫外線消毒1次，飲用無(wú)菌蒸餾水。更換飼養(yǎng)用品時(shí)嚴(yán)格遵循無(wú)菌原則操作。

SW620人結(jié)腸癌細(xì)胞株是在RPMI-1640培養(yǎng)基中用10%胎牛血清(FBS)，在CO2體積分?jǐn)?shù)為5%、37 ℃的加濕培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

1.2 主要試劑和儀器

培養(yǎng)載玻片購(gòu)自美國(guó)Costar公司。Hes1抗體購(gòu)自美國(guó)Bioss公司，1∶500稀釋。10%牛血清白蛋白購(gòu)自美國(guó)Sigma公司。二次山羊抗小鼠或者山羊抗兔抗體購(gòu)自美國(guó)Bioss公司。0.25%胰蛋白酶購(gòu)自美國(guó)Sigma公司。聚偏二氟乙烯膜(PVDF)購(gòu)自美國(guó)Millipore公司。4-，6-二脒基-2-苯基吲哚(propidiumniodide)購(gòu)自美國(guó)Sigma公司。TRIzol試劑、RT試劑盒、擴(kuò)增預(yù)混試劑(擴(kuò)增產(chǎn)物)購(gòu)自日本TaKaRa公司。免疫組化試劑化學(xué)發(fā)光凝膠成像系統(tǒng)及分析軟件為美國(guó)Bio-Rad公司生產(chǎn)。

1.3 方法

1.3.1 免疫組化分析

石蠟切片脫蠟至水，組織列陣檢測(cè)技術(shù)TMA部分切片高壓2 min，達(dá)到抗原修復(fù)，以實(shí)現(xiàn)抗原性檢索。培養(yǎng)載玻片在4 ℃溫育過(guò)夜，然后將切片顯色劑DAB顯色2 min。每次實(shí)驗(yàn)時(shí)，初級(jí)抗體被PBS取代作為陰性對(duì)照。

染色腫瘤細(xì)胞等級(jí)評(píng)價(jià)：無(wú)陽(yáng)性腫瘤細(xì)胞為0級(jí)，陽(yáng)性腫瘤細(xì)胞＜10%為1級(jí)，10%≤陽(yáng)性腫瘤細(xì)胞≤50%為2級(jí)，陽(yáng)性腫瘤細(xì)胞＞50%為3級(jí)。染色強(qiáng)度評(píng)分：無(wú)染色為0分，弱染色為1分，中度染色為2分，強(qiáng)染色為3分。最后評(píng)分的計(jì)算方法由染色強(qiáng)度評(píng)分乘以染色腫瘤細(xì)胞等級(jí)。根據(jù)上述方法，染色評(píng)分≤4和≥6被分別視為組織的低表達(dá)和高表達(dá)。

1.3.2 RNA提取、逆轉(zhuǎn)錄和定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(quantitative reverse transcriptionpolymerase chain reaction，qRT-PCR)檢測(cè)

采用TRIzol法裂解、氯仿抽提、異丙醇沉淀，從而提取Hes1過(guò)表達(dá)結(jié)腸癌SW620細(xì)胞株總RNA。采用逆轉(zhuǎn)錄試劑盒進(jìn)行反應(yīng)后進(jìn)行聚合酶反應(yīng)。運(yùn)用Stratagene公司Mx3005P軟件設(shè)計(jì)引物，以GAPDH為內(nèi)參照，參照試劑盒說(shuō)明采用SYBR Green熒光染料法完成。Hes1基因引物序列順義鏈：5’-ACGTGCGAGGGCGTTAATAC-3’；反義鏈：5’-GGGGTAGGTCATGGCATTGA-3’。

1.3.3 蛋白質(zhì)印跡法(Western blot)檢測(cè)

取Hes1過(guò)表達(dá)的結(jié)腸癌SW620細(xì)胞株及對(duì)照細(xì)胞，蛋白質(zhì)裂解后由10%～15%SDS-PAGE凝膠分離，濕轉(zhuǎn)法將膠上的蛋白轉(zhuǎn)移至聚偏二氟乙烯膜上，用5%BSA封閉1.5 h，加Hes1抗體(1∶500)溫育，洗膜后加二抗溫育。ECL顯影液及高靈敏化學(xué)發(fā)光成像系統(tǒng)檢測(cè)蛋白表達(dá)。

1.3.4 裸鼠皮下成瘤實(shí)驗(yàn)

生長(zhǎng)狀態(tài)良好的細(xì)胞胰酶消化后，PBS液洗滌2次，用PBS重懸細(xì)胞，計(jì)數(shù)儀計(jì)數(shù)，分別將1×105個(gè)過(guò)表達(dá)Hes1的SW620細(xì)胞(LV-Hes1)和其對(duì)照組(LV-con)隨機(jī)接種在裸鼠背部?jī)蓚?cè)皮膚，待長(zhǎng)出腫瘤后每2～3 d測(cè)量瘤徑(長(zhǎng)徑和短徑)，計(jì)算瘤體積：體積=(長(zhǎng)徑×短徑×短徑)/2。待瘤體積超過(guò)500 mm3時(shí)，處死裸鼠，取出組織。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。結(jié)果采用兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，數(shù)值大小以表示，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 Hes1在結(jié)腸癌組織中的表達(dá)

本研究通過(guò)免疫組化法和qRT-PCR法，發(fā)現(xiàn)Hes1在結(jié)腸癌組織中的表達(dá)明顯高于癌旁正常結(jié)腸組織(圖1A)，且Hes1在結(jié)腸癌組織中的mRNA表達(dá)明顯高于癌旁正常結(jié)腸組織(圖1B)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。

2.2 Hes1與結(jié)腸癌分化程度的關(guān)系

Hes1在正常結(jié)腸組織中少許表達(dá)，表達(dá)主要位于結(jié)腸腺管的底部(圖2A)。然而Hes1在結(jié)腸癌組織中的表達(dá)顯著高于癌旁正常結(jié)腸組織，且在低分化結(jié)腸癌組織中的表達(dá)(圖2C)高于高分化結(jié)腸癌組織(圖2B)。

2.3 建立Hes1穩(wěn)定過(guò)表達(dá)的結(jié)腸癌SW620細(xì)胞株

把LV-Hes1用瑞士包裝系統(tǒng)包裝病毒后感染結(jié)腸癌SW620細(xì)胞。在mRNA水平和蛋白水平檢測(cè)實(shí)驗(yàn)組(LV-Hes1)與對(duì)照組(LV-con)中Hes1的表達(dá)，結(jié)果顯示，在Hes1過(guò)表達(dá)后，LVHes1組在mRNA水平的表達(dá)較LV-con組顯著上調(diào)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01，圖3A)。進(jìn)一步通過(guò)Western blot檢測(cè)Hes1在蛋白水平的表達(dá)，證實(shí)Hes1的過(guò)表達(dá)(圖3B)。

圖1 Hes1在結(jié)腸癌組織中的表達(dá)Fig. 1 Increased expression of Hes1 in human colon cancer tissues

2.4 Hes1增強(qiáng)結(jié)腸癌SW620細(xì)胞的皮下成瘤能力

皮下成瘤實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，兩組裸鼠的腫瘤形態(tài)均為圓形或橢圓形，邊界較清楚，有纖維包膜包裹，符合裸鼠皮下成瘤特點(diǎn)。但LVHes1組腫瘤體積較LV-con組大(圖4A)，且LVHes1組腫瘤生長(zhǎng)較快(圖4B，P＜0.01)。

圖2 Hes1在不同分化程度結(jié)腸癌中的表達(dá)Fig. 2 Hes1 expression in human colon cancer tissues

圖3 過(guò)表達(dá)Hes1后SW620細(xì)胞株中Hes1的表達(dá)Fig. 3 Expression of Hes1 in Hes1 overexpressing SW620 cell lines

圖4 過(guò)表達(dá)Hes1后SW620細(xì)胞的體內(nèi)成瘤能力Fig. 4 Effect of Hes1 on the ability of tumour-formation in Hes1 overexpressing SW620 cells

3 討 論

結(jié)腸癌起病隱匿，患病初期癥狀不明顯，且進(jìn)展迅速，大多數(shù)患者就診時(shí)已是中晚期，因此尋找理想的腫瘤標(biāo)志物用于診斷、治療、預(yù)后評(píng)估將有較高的臨床價(jià)值。在結(jié)腸癌的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中，常涉及到多種蛋白質(zhì)表達(dá)的改變，然而哪些可作為結(jié)腸癌發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后的腫瘤標(biāo)志物成為當(dāng)今研究之難點(diǎn)。

迄今，脊椎動(dòng)物的6種Hes分子(Hes1～6)已被發(fā)現(xiàn)，其中Hes1分子表達(dá)最為廣泛，人類的Hes1含268個(gè)氨基酸殘基，相對(duì)分子質(zhì)量約為35×103。Hes1是前神經(jīng)元堿性螺旋-環(huán)-螺旋(proneural basic helix-loop-helix，bHLH)轉(zhuǎn)錄因子家族中的成員，有研究已經(jīng)證實(shí)，Hes1基因可通過(guò)PTEN/PI3K/Akt/ mTOR信號(hào)通路抑制抑癌基因p53表達(dá)阻止細(xì)胞凋亡［7-8］。Hes1作為Notch蛋白的下游靶基因，將Notch信號(hào)下傳，可使多種不成熟細(xì)胞維持在未分化狀態(tài)，以確保正確的分化方向。有研究表明，Hes1在急性淋巴細(xì)胞白血病［7］、肺癌［9］、宮頸癌［10-11］、卵巢癌［12］、骨肉瘤［13］、星形細(xì)胞瘤［14］和胃癌［15］中起到癌基因的作用，能促進(jìn)腫瘤增殖、轉(zhuǎn)移和浸潤(rùn)侵襲。金黑鷹等［16］及Michael等［17］研究提示，Notch1、Hes1在結(jié)腸癌中的表達(dá)一致，而且Notch1的表達(dá)程度與細(xì)胞的分化程度呈負(fù)相關(guān)。然而，Hes1在結(jié)腸癌中的確切作用尚缺乏系統(tǒng)研究。

本研究首先檢測(cè)了Hes1在結(jié)腸癌組織及癌旁正常結(jié)腸組織中的表達(dá)，結(jié)果Hes1在癌旁正常結(jié)腸組織和結(jié)腸癌組織中都有表達(dá)，但在癌組織中的表達(dá)顯著較癌旁正常組織高，且Hes1的表達(dá)水平與細(xì)胞的分化程度呈負(fù)相關(guān)，即分化程度越低，Hes1的表達(dá)水平越高。結(jié)果表明，Hes1的定性和定量，可能對(duì)結(jié)腸組織的癌變與否及分化程度的診斷有輔助價(jià)值。

接著我們建立了穩(wěn)定過(guò)表達(dá)Hes1的SW620細(xì)胞株，并進(jìn)行了皮下成瘤實(shí)驗(yàn)。結(jié)果表明Hes1的表達(dá)與腫瘤的體積、生長(zhǎng)速度、腫瘤出現(xiàn)時(shí)間有關(guān)。LV-Hes1的最終瘤體積較LV-con的瘤體積大，且生長(zhǎng)明顯迅速，表明Hes1增強(qiáng)結(jié)腸癌SW620細(xì)胞株的成瘤能力。因此我們推測(cè)，Hes1過(guò)表達(dá)，可促進(jìn)腫瘤發(fā)生和生長(zhǎng)。并且我們發(fā)現(xiàn)過(guò)表達(dá)Hes1的瘤體形態(tài)大，充血明顯，推測(cè)可促使腫瘤細(xì)胞進(jìn)入血液循環(huán)，增加腫瘤復(fù)發(fā)及轉(zhuǎn)移的機(jī)會(huì)，此部分將會(huì)實(shí)施進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證。另外，Hes1促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的體內(nèi)成瘤能力，且有報(bào)道表明其與干細(xì)胞的維持相關(guān)，我們推測(cè)Hes1與腫瘤干細(xì)胞的干性維持亦相關(guān)，仍需進(jìn)一步證實(shí)。

綜上所述，目前國(guó)內(nèi)外關(guān)于Hes1在結(jié)腸癌中的表達(dá)、作用及機(jī)制尚很少見(jiàn)，我們的結(jié)果表明Hes1的過(guò)表達(dá)可能導(dǎo)致結(jié)腸癌的發(fā)生和發(fā)展，然而，其具體作用機(jī)制仍需進(jìn)一步探討。

［1］ HARADA K, SATO Y, IKEDA H, et al. Notch1-Hes1 signalling axis in the tumourigenesis of biliary neuroendocrine tumours ［J］. Clin Pathol, 2013, 66(5): 386-391.

［2］ KABOS P, KABOSOVA A, NEUMAN T. Blocking Hes1 expression initiates GABAergic differentiation and induces the expression of p21CIP1/WAF1 in human neural stem cells［J］. Biol Chem, 2002, 277(11): 8763-8766.

［3］ PIPER M, BARRY G, HAWKINS J, et al. NFIA controls telencephalic progenitor cell differentiation through repression of the Notch effector Hes1 ［J］. Neurosci, 2010, 30(27): 9127-9139.

［4］ SCHRECK K C, TAYLOR P, MARCHIONNI L, et al. The Notch target Hes1 directly modulates Gli1 expression and hedgehog signalling: A potential mechanism of therapeutic resistance ［J］. Clin Cancer Res, 2010, 16(24): 6060-6070.

［5］ KATOH M, KATOH M. Notch signaling in gastrointestinal tract review ［J］. Int J Oncol, 2007, 30(1): 247-251.

［6］ FREA S, PALLAVIB S K, HUYGHE M, et al. Notch and Wnt signals cooperatively control cell proliferation and tumourigenesis in the intestine ［J］. Proc Natl Acad Sci U S A, 2009, 106(15): 6309-6314.

［7］ PALOMERO T, SULIS M L, CORTINA M, et al. Mutational loss of PTEN induces resistance to NOTCH1 inhibition in T-cell leukemia ［J］. Nat Med, 2007, 13(10): 1203-1210.

［8］ WEINMASTER G. Notch signal transduction: a real rip and more ［J］. Curr Opin Genet Dev, 2000, 10(4): 363-369.

［9］ DANG T P, GAZDAR A F, VIRMANI A K, et al. Chromosome 19 translocation,overexpression of Notch3, and human lung cancer ［J］. J Natl Cancer Inst, 2000, 92(16): 1355-1357.

［10］ LIU J, YE F, CHEN H, et al. Expression of differentiation associated protein Hes1 and Hes5 in cervical squamous carcinoma and its precursors ［J］. Int J Gynecol Cancer, 2007, 14(6): 789-792.

［11］ 江金群, 張玉心, 徐成嶺, 等. Hes1基因啟動(dòng)子的克隆及活性研究［J］. 蚌埠醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào), 2013, 38(9): 1073-1076.

［12］ 吳利英, 王明義, 辛?xí)匝? 等. 人卵巢癌A2780細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移與HES1 相關(guān)性的實(shí)驗(yàn)研究［J］. 現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展, 2012, 12(5): 829-832.

［13］ ENGIN F, BERTIN T, MA O, et al. Notch signaling contributes to the pathogenesis of human osteosarcomas ［J］. Hum Mol Genet, 2009, 18(14): 1464-1470.

［14］ 王春華, 鄭志竑, 楊衛(wèi)忠, 等. Notch1 和Hes1、Hes5 在星形細(xì)胞瘤中的表達(dá)及其相關(guān)性研究［J］. 福建醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào), 2009, 43(3): 207-209.

［15］ 王依滿, 楊晶金, 權(quán)明明, 等. HES1 與ICN1、Notch1在胃癌組織中的表達(dá)及其意義［J］. 中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志, 2012, 22(1): 87-92.

［16］ 金黑鷹, 徐俊華, 王小峰, 等. 腫瘤干細(xì)胞調(diào)節(jié)基因Hes1在結(jié)直腸癌中的表達(dá)及其臨床意義［J］. 中華醫(yī)學(xué)雜志, 2011, 91(41): 2891-2894.

［17］ MICHAEL R, SILVIA O, HUI Z, et al. Activation of Notch signaling in human colon adenocarcinoma ［J］. Int J Oncol, 2008, 33(6): 1223-1229.

Increased expression of Hes1 and its effect on tumour-formation ability in colon cancer

YANG Miao-ling, GAO Fei*
(Department of Gastroenterology, the First Af fi liated Hospital of Jinan University, Guangzhou Guangdong 510630, China)

GAO Fei E-mail: gaofeidoc@163. com

Background and purpose: It is reported that Hes1 is related to the progression and metastasis of many kinds of tumor. This study was to investigate the expression of Hes1 in colon cancer and its effect on tumourformation ability of SW620 cells. Methods: The expression of Hes1 in colon cancer tissues and control normal samples was analyzed by immunohistochemistry and quantitative reverse transcription-polymerase chain reaction (qRTPCR), and the relationship between Hes1 expression and differentiation in human colon cancer was detected. Hes1 overexpressing SW620 cell lines were established, and the expression of Hes1 mRNA and protein was detected by qRTPCR and Western blot simultaneously. We also detected the effect of Hes1 on the ability of tumour-formation in Hes1 overexpressing SW620 cells in nude mice in vivo. Results: We found that Hes1 was expressed in almost all normal tissues, particularly at the bottom of the crypts, and in all cancer tissues, including moderate and poorly differentiated cancer samples and well-differentiated cancer samples. In addition, the expression of Hes1 in poorly differentiated cancer samples was higher than that observed in well-differentiated tumor (P＜0.05). After stably transfected Hes1 in SW620 colon cancer cell lines, Hes1 was overexpressed successfully (P＜0.05). We injected 1×105Hes1-overexpressing colon cancer cells and the control cells into nude mice subcutaneously, and found Hes1-overexpressing tumours exhibited signi fi cantly bigger size compared with that observed in controls. The growth of the Hes1-overexpressingtumours was found to be slightly faster than those of the controls. Conclusion: Hes1 is overexpressed in colon cancer than that in normal tissue, and Hes1 is upregulated in poorly differentiated cancer samples compared with welldifferentiated tumour samples. Hes1 has a positive in fl uence on the ability of tumour-formation in SW620 cells in vivo.

Hes1; Colon cancer; Tumor-formation ability

10.3969/j.issn.1007-3969.2014.09.002

R735.3+5

A

1007-3639(2014)09-0646-06

2014-04-24

2014-06-20）

＊：原工作單位為南方醫(yī)科大學(xué)。

國(guó)家自然科學(xué)基金青年項(xiàng)目(No：81401973)；廣東省醫(yī)學(xué)科研基金(No：B2014222)；中央高?；究蒲袠I(yè)務(wù)費(fèi)專項(xiàng)資金(No：21614304)。

高飛 E-mail:gaofeidoc@163.com