李鑄鵬張丹李丹蘇丹應(yīng)莉莎毛偉敏,5

1.溫州醫(yī)科大學(xué)第一臨床學(xué)院心胸外科系，浙江 溫州 325000；

2.浙江省中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院藥理系，浙江 杭州 310000；

3.浙江省中醫(yī)藥大學(xué)第一臨床腫瘤學(xué)系，浙江 杭州 310000；

4.浙江省腫瘤醫(yī)院研究所，浙江 杭州 310000；

5.浙江省腫瘤醫(yī)院胸外科，浙江 杭州 310000

HER-2在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)及與預(yù)后的關(guān)系

李鑄鵬1張丹2李丹3蘇丹4應(yīng)莉莎4毛偉敏1,5

1.溫州醫(yī)科大學(xué)第一臨床學(xué)院心胸外科系，浙江 溫州 325000；

2.浙江省中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院藥理系，浙江 杭州 310000；

3.浙江省中醫(yī)藥大學(xué)第一臨床腫瘤學(xué)系，浙江 杭州 310000；

4.浙江省腫瘤醫(yī)院研究所，浙江 杭州 310000；

5.浙江省腫瘤醫(yī)院胸外科，浙江 杭州 310000

背景與目的：人類表皮生長(zhǎng)因子受體2(human epidermal growth factor receptor 2，HER-2)對(duì)非小細(xì)胞肺癌(non-small cell lung cancer，NSCLC)患者預(yù)后的提示作用還處于爭(zhēng)議之中，本研究旨在探索HER-2在NSCLC中的表達(dá)及與預(yù)后的關(guān)系。方法：利用免疫組化檢測(cè)425例NSCLC的HER-2的表達(dá)。χ2檢驗(yàn)評(píng)價(jià)HER-2與臨床病理參數(shù)的關(guān)系。COX比例風(fēng)險(xiǎn)回歸評(píng)估HER-2與預(yù)后的關(guān)系。結(jié)果：在425例組織中，HER-2陽性表達(dá)83例(19.5%)；HER-2表達(dá)與NSCLC的病理類型密切相關(guān)，腺癌中的表達(dá)最高(P=0.05)。COX回歸顯示HER-2與NSCLC的預(yù)后無相關(guān)性。結(jié)論：HER-2表達(dá)與NSCLC的病理類型密切相關(guān)，在腺癌中表達(dá)比較普遍，但與NSCLC的預(yù)后無關(guān)。

非小細(xì)胞肺癌；人類表皮生長(zhǎng)因子2；預(yù)后

在世界范圍內(nèi)，肺癌的死亡率居所有惡性腫瘤的第1位，5年總生存率＜15%［1］。非小細(xì)胞肺癌(non-small cell lung cancer，NSCLC)約占肺癌的80%，盡管治療方法已經(jīng)有很大進(jìn)步，但是患者的預(yù)后依然很差，其中一個(gè)很重要原因是缺乏有效的預(yù)后診斷標(biāo)志物，因此基于分子水平的診斷具有非常重要的意義，如腫瘤標(biāo)志物AFP、CA153可以為肝癌和乳腺癌診斷提供參考［2-3］。

人類表皮生長(zhǎng)因子受體2(human epidermal growth factor receptor 2，HER-2)是一種185×103的酪氨酸激酶I型跨膜受體，含有1 255個(gè)氨基酸，由17號(hào)染色體上的基因編碼。HER-2在乳腺癌、肺癌、胃癌和大腸癌中的過表達(dá)很常見［4-6］。有研究認(rèn)為，HER-2與腫瘤的進(jìn)展和轉(zhuǎn)移有關(guān)，與化療藥物的耐藥性及不良預(yù)后也有關(guān)，可以作為化療藥物治療的潛在靶點(diǎn)［7-9］。然而，HER-2在NSCLC中的表達(dá)情況尚不清楚，與預(yù)后的關(guān)系還具有爭(zhēng)議［1,7,10-12］。因此，本研究希望通過探討HER-2在NSCLC患者中的表達(dá)及與預(yù)后的關(guān)系，從而為NSCLC的個(gè)體化治療提供參考。

1 資料和方法

1.1 患者資料

收集2006年11月—2011年4月在浙江省腫瘤醫(yī)院接受手術(shù)治療的425例NSCLC患者的臨床組織標(biāo)本，患者手術(shù)治療前均未接受任何放化療和免疫治療。病理診斷和分級(jí)參照世界衛(wèi)生組織和國(guó)際肺癌研究協(xié)會(huì)的標(biāo)準(zhǔn)(WHO/IASLC，2007年版)。425例NSCLC患者，男性322例，女性103例，年齡37～82歲，平均年齡60.4歲。鱗癌218例，腺癌200例，其他類型7例。Ⅰ、Ⅱ期284例，Ⅲ、Ⅳ期140例。吸煙患者280例，非吸煙患者123例。本研究通過浙江省腫瘤醫(yī)院倫理委員會(huì)的審查，所有患者在手術(shù)之前都簽署知情同意書。

隨訪：在手術(shù)后的2年內(nèi)，每3個(gè)月隨訪1次；第3年每6個(gè)月隨訪1次，之后每年隨訪1次。無病生存期(disease free survival，DFS)為接受手術(shù)到原位復(fù)發(fā)、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、死亡或失訪的時(shí)間?？偵嫫?overall survival，OS)為接受手術(shù)到死亡或失訪的時(shí)間。

1.2 方法

1.2.1 免疫組化檢測(cè)

5 mm的切片在烤箱中烤30 min，二甲苯脫蠟，100%、95%和75%梯度酒精，PBS復(fù)水，枸櫞酸鈉高壓修復(fù)，蒸餾水沖洗，3%雙氧水封閉，蒸餾水沖洗，一抗(1∶50，購自福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司)溫育1～2 h，蒸餾水沖洗，即用型二抗(購自挪威DAKO公司)溫育30 min，蒸餾水沖洗，DAB(購自挪威DAKO公司)顯色5 min，蒸餾水沖洗，蘇木素復(fù)染2 min，自來水沖洗，促藍(lán)液2 min，自來水沖洗，75%、95%和100%梯度酒精脫水，二甲苯透明，中性樹膠封片、觀察。

1.2.2 免疫組化評(píng)分

根據(jù)美國(guó)腫瘤協(xié)會(huì)(ASCO，2007版)的指南給染色的組織評(píng)分：0～10%腫瘤細(xì)胞膜著色為(-)；10%以上細(xì)胞呈輕度和不完整細(xì)胞膜著色為(+)；10%以上細(xì)胞呈中度的完整細(xì)胞膜著色為(++)；30%以上細(xì)胞呈強(qiáng)度完整細(xì)胞膜著色為(+++)。HER-2為細(xì)胞膜、細(xì)胞質(zhì)著色呈棕黃色顆粒。(-)和(+)為陰性；(++)和(+++)為陽性。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

數(shù)據(jù)采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件分析，用χ2檢驗(yàn)分析HER-2與其他變量之間的關(guān)系，COX比例風(fēng)險(xiǎn)回歸模型作單因素和多因素分析。雙側(cè)檢驗(yàn)P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 臨床病理特征及與HER-2表達(dá)的關(guān)系

HER-2蛋白陽性表現(xiàn)為細(xì)胞膜、細(xì)胞質(zhì)棕黃色顆粒狀著色(圖1)，陽性表達(dá)率為19.5% (83/425)。腺癌患者中HER-2陽性表達(dá)49例，占所有腺癌患者的24.5%；其次是鱗癌33例，占所有鱗癌患者的15.1%；其他類型1例，占其他類型肺癌的14.3%(P=0.05)。HER-2表達(dá)與性別、年齡、腫瘤臨床分期、腫瘤的分化及患者是否吸煙等臨床病理參數(shù)無相關(guān)性(表1)。

2.2 HER-2與NSCLC預(yù)后的相關(guān)性

在COX回歸分析中，單因素分析顯示HER-2表達(dá)與DFS和OS的相對(duì)危險(xiǎn)系數(shù)分別為0.95和1.04，P值分別為0.83和0.84。在多因素分析中，利用年齡、性別、分化程度、組織類型、分期和吸煙史等因素進(jìn)行矯正分析時(shí)，HER-2表達(dá)與DFS和OS的相對(duì)危險(xiǎn)系數(shù)分別為1.04和1.03，P值分別為0.85和0.87。HER-2表達(dá)與DFS及OS無相關(guān)性(表2)。

圖1 HER-2免疫組化染色結(jié)果Fig. 1 Immunohistochemical staining for HER-2

表1 NSCLC患者臨床病理特征及與HER-2表達(dá)的關(guān)系Tab. 1 Relationships between the expression of HER-2 expression and clinicopathological variables

表2 HER-2表達(dá)與NSCLC患者預(yù)后的關(guān)系Tab. 2 Relationships between the expression of HER-2 and the prognosis of NSCLC patients

3 討 論

本研究發(fā)現(xiàn)，HER-2僅與肺癌的病理類型密切相關(guān)，腺癌患者更易表達(dá)HER-2，且HER-2與NSCLC的預(yù)后無明顯關(guān)聯(lián)。在臨床中，HER-2對(duì)乳腺癌和胃癌的預(yù)后判斷作用及機(jī)制已經(jīng)非常明確，并廣泛應(yīng)用于指導(dǎo)臨床治療。但在NSCLC中，HER-2和預(yù)后的關(guān)系還存在爭(zhēng)議。一些研究者認(rèn)為，HER-2的表達(dá)與NSCLC的預(yù)后呈負(fù)相關(guān)［1,7,13-14］。Selvaggi等［10］的一項(xiàng)研究發(fā)現(xiàn)在130例NSCLC腫瘤組織中，有21例(16%)HER-2過表達(dá)，證明HER-2過表達(dá)與患者的不良預(yù)后有關(guān)，但與病理分期和組織類型無關(guān)。Takenaka等［13］的研究表明，在159例腺癌患者中，HER-2表達(dá)是不良預(yù)后的一個(gè)獨(dú)立的影響因子，但這些患者中Ⅱ、Ⅲ期患者接受了術(shù)前化療。然而，Toh等［15］報(bào)道，在109例東亞女性患者中，HER-2表達(dá)與預(yù)后無關(guān)。Pfeiffer等［16］研究了186例術(shù)前未接受放化療的NSCLC患者HER-2表達(dá)情況及與預(yù)后的關(guān)系，也證實(shí)HER-2表達(dá)與預(yù)后無關(guān)，這與我們的研究結(jié)果一致。

以上研究得到不同的結(jié)論，一部分原因可能歸于免疫組化的評(píng)分系統(tǒng)。肺癌免疫組化的評(píng)分系統(tǒng)參考于乳腺癌HER-2的評(píng)分系統(tǒng)，但和乳腺組織不一樣的是，HER-2在肺癌組織中的表達(dá)是非均一性的，而且免疫組化的評(píng)分系統(tǒng)本身具有很強(qiáng)的主觀性，難免使評(píng)分出現(xiàn)誤差，導(dǎo)致研究者之間得出不一樣的結(jié)論。因此，制定一套適合肺癌的HER-2免疫組化評(píng)分系統(tǒng)很有必要。在一些研究中，患者接受過一些術(shù)前或術(shù)后治療，而這些治療勢(shì)必會(huì)影響患者的生存，從而使研究的結(jié)論不一致。另外，組織固定時(shí)間、抗體稀釋濃度及是否接受過放化療等因素都會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果，導(dǎo)致出現(xiàn)不同的結(jié)論。

總之，由于在非小細(xì)胞肺癌患者中HER-2表達(dá)與預(yù)后相關(guān)性存在爭(zhēng)議，應(yīng)用HER-2表達(dá)指導(dǎo)NSCLC患者的治療需慎重；對(duì)于HER-2表達(dá)與NSCLC預(yù)后的關(guān)系還需要做更多的研究。

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The expression of HER-2 and its prognostic implication in patients with non-small cell lung cancer

LI Zhu-peng1, ZHANG Dan2, LI Dan3, SU Dan4, YING Li-sha4, MAO Wei-min1,5
(Cardiothoracic Surgery Department of The First Clinical College of Wenzhou Medical University, Wenzhou Zhejiang 325000, China; 2.Department of Pharmacology, Zhejiang University of Traditional Chinese Medicine, Hangzhou Zhejiang 310000, China; 3.The First Clinical Oncology Department of Zhejiang University of Traditional Chinese Medicine, Hangzhou Zhejiang 310000, China; 4.Cancer Research Institute, Zhejiang Provincial Cancer Hospital, Hangzhou Zhejiang 310000, China; 5.Department of Thoracic Surgery, Zhejiang Provincial Cancer Hospital, Hangzhou Zhejiang 310000, China)

MAO Wei-min E-mail: maowm1218@163.com

Background and purpose: The prognostic role of human epidermal growth factor receptor 2 (HER-2) remains controversial in patients with non-small cell lung cancer (NSCLC). This study aimed to evaluate the expression of HER-2 and its prognostic implication in patients with NSCLC. Methods: Four hundred and twenty- fi ve NSCLC patients’ specimens were obtained from Zhejiang Cancer Hospital. HER-2 protein expression was determined by immunohistochemistry (IHC). The relationship between HER-2 and clinicopathological parameters and patients’prognosis was analyzed by Chi-square test and COX proportional hazards regression model. Results: Eighty-three patients were positive expression of HER-2 (83/425, 19.5%). The expression of HER-2 was closely related with histological type (P=0.051), most patients with HER-2 positive were adenocarcinoma, then were squamous carcinoma or other histological types. However, HER-2 was not an independent prognostic indicator for the overall survival of patients with NSCLC. Conclusion: We found that the expression of HER-2 was closely connected with histological type, but it was not a predictive marker for the prognosis in patients with NSCLC.

Non-small cell lung cancer; Human epidermal growth factor receptor 2; Prognosis

10.3969/j.issn.1007-3969.2014.09.007

R734.2

A

1007-3639(2014)09-0679-05

2014-05-07

2014-08-21）

衛(wèi)生部科研基金項(xiàng)目(No：WKJ2010-2-004)；浙江省重大科技專項(xiàng)計(jì)劃項(xiàng)目(No：2011C13039-1)。

毛偉敏 E-mail:maowm1218@163.com