程靜新劉雅歆蘇偉袁敏張瑜張怡

1.中南大學湘雅醫(yī)院婦科，湖南 長沙 410000；

2.新疆醫(yī)科大學腫瘤醫(yī)院婦科，新疆 烏魯木齊 830011

新疆南部維吾爾族宮頸鱗癌microRNA研究

程靜新1,2劉雅歆2蘇偉2袁敏2張瑜1張怡1

1.中南大學湘雅醫(yī)院婦科，湖南 長沙 410000；

2.新疆醫(yī)科大學腫瘤醫(yī)院婦科，新疆 烏魯木齊 830011

背景與目的：宮頸癌是新疆地區(qū)尤其是新疆南部維吾爾族高發(fā)腫瘤，發(fā)病機制尚不清楚。微小RNA(microRNA，miRNA)是一類具有重要調(diào)控作用的非編碼小分子RNA，其表達及功能失調(diào)與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。本研究篩選并初步研究新疆南部維吾爾族宮頸鱗癌差異表達的miRNA，預(yù)測并分析靶基因功能。方法：采用miRNA微陣列芯片技術(shù)對5例人乳頭瘤病毒(human papillomavirus，HPV)16陽性的新疆南部維吾爾族宮頸鱗癌進行miRNA篩選，應(yīng)用實時定量RT-PCR方法對篩選出差異表達的miRNA進行初步驗證，并檢測及分析在83例宮頸癌中的表達結(jié)果，應(yīng)用targetscan、miRwalk、miRanda及Pictar四種軟件預(yù)測其靶基因。結(jié)果：新疆南部維吾爾族HPV16陽性宮頸鱗癌差異表達基因18個，對差異表達顯著的miRNA-138和miRNA-720進行了初步驗證并預(yù)測靶基因，預(yù)測兩者共同的靶基因是EZH2；與40例正常對照相比，miRNA-138、miRNA-720在83例宮頸鱗癌組織中均表達下調(diào)(P＜0.05)；下調(diào)的miRNA-138、miRNA-720與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、脈管浸潤有關(guān)(P＜0.05)，但與年齡、宮頸壁累及范圍及HPV16感染無明顯關(guān)系(P＞0.05)；miRNA-720與臨床分期、腫瘤體積有關(guān)(P＜0.05)。結(jié)論：miRNA-138、miRNA-720在新疆南部維吾爾族宮頸鱗癌組織中均表達下調(diào)，兩者共同的靶基因是EZH2，可能與宮頸癌的侵潤和轉(zhuǎn)移有關(guān)。

新疆南部維吾爾族；人乳頭瘤病毒16；宮頸鱗癌；miRNA-138；miRNA-720

宮頸癌是新疆地區(qū)高發(fā)腫瘤，其中以天山以南地區(qū)(新疆南部)為多，當?shù)鼐S吾爾族婦女宮頸癌的患病率為527/10萬，明顯高于我國其他地區(qū)，宮頸癌患病率是北京市婦女的210多倍，死亡率居女性惡性腫瘤之首［1］。宮頸癌主要病因就是人乳頭瘤病毒(human papillomavirus，HPV)感染。我們的前期研究顯示，新疆地區(qū)維吾爾族宮頸癌患者以HPV16感染為主，感染率可達94.31%［2］。但HPV感染導(dǎo)致宮頸浸潤癌的機制尚不明了，研究發(fā)現(xiàn)致瘤病毒在感染人體的過程中表達特定微小RNA(microRNA，miRNA)譜。miRNA是一類在轉(zhuǎn)錄后水平上通過與靶基因miRNA的3′UTR結(jié)合后調(diào)控基因表達的小分子非編碼RNA，越來越多的證據(jù)表明，miRNA的表達及功能失調(diào)與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。在多種腫瘤中都發(fā)現(xiàn)有miRNA的異常表達，并且這些miRNA在調(diào)節(jié)腫瘤的發(fā)生過程中扮演著重要的角色［3］。

目前miRNA常用的檢測方法包括RNA印跡分析方法、miRNA基因芯片和實時定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(Q-RT-PCR)等。本研究擬采用微陣列芯片雜交方法篩選新疆南部維吾爾族HPV16相關(guān)宮頸鱗癌差異表達的miRNA；并進行大樣本臨床研究及其功能分析，尋找與新疆南部地區(qū)維吾爾族宮頸鱗癌相關(guān)的miRNA。

1 資料和方法

1.1 臨床資料

收集2011年8月—2013年8月在新疆醫(yī)科大學附屬腫瘤醫(yī)院初治原發(fā)宮頸鱗癌(癌和癌旁)組織88例、其中5例用于微陣列芯片雜交方法差異miRNA篩選，83例宮頸癌進行實時定量RT-PCR檢測，非宮頸病變組織40例為正常對照，均為新疆南部維吾爾族患者。宮頸癌的臨床診斷以FIGO(2009)宮頸癌臨床分期為標準，其中63例為廣泛子宮切除+盆腔淋巴結(jié)清掃術(shù)后標本，25例為宮頸活檢術(shù)后標本。以上患者均有病理證實，且不合并其他惡性腫瘤及嚴重的內(nèi)科疾病。宮頸癌患者年齡為36～73歲，平均52.2歲，正常對照組患者年齡為39～61歲，平均53.4歲，差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。

1.2 實驗方法

1.2.1 瓊脂糖凝膠電泳檢測HPV16

HPV16引物序列為HPV 16 E7-F：5’-CAAGTGTGACTCTACGCTTCGG-3’；HPV 16 E7-R：5’-GTGCCCATTAACAGG TCTTCCAA3’。

用2%瓊脂糖凝膠電泳(agarose gel electrophoresis，AGE)檢測PCR擴增產(chǎn)物，紫外凝膠成像儀下觀察。電泳條帶顯示亮度且電泳亮帶在81 bp長度左右的即為HPV16陽性。

1.2.2 微陣列芯片技術(shù)進行microRNA篩選

CapitalBio?哺乳動物miRNA芯片V4.0，購自北京博奧公司，操作過程嚴格按說明書進行，采用晶芯?Slide WasherTM8芯片洗干儀對芯片進行清洗甩干，晶芯?LuxScanTM10K/A雙通道激光掃描儀對芯片進行掃描，LuxScan 3.0圖像分析軟件提取數(shù)據(jù)，SAM軟件挑選差異基因。

1.2.3 實時定量RT-PCR檢測miRNA

根據(jù)基因芯片檢測結(jié)果，從中選取差異表達顯著的has-miRNA-138、has-miRNA-720進行實時定量RT-PCR檢測，對芯片結(jié)果進行驗證。以U6作為內(nèi)參。引物序列見表1。

1.2.4 miRNA的生物學信息預(yù)測

目前多個研究小組開發(fā)出多個miRNA靶基因預(yù)測軟件為miRNA相關(guān)實驗提供理論指導(dǎo)。我們利用目前常用miRNA靶基因預(yù)測網(wǎng)站(targetscan網(wǎng)址：http://www.targetscan.org；miRwalk網(wǎng)址：http://www.umm.uni-heidelberg. de/apps/zmf/mirwalk/；miRanda網(wǎng)址：http://www. microrna.org/microrna/home.do；Pictar網(wǎng)址：http://pictar.mdc-berlin.de/)進行操作。

1.3 統(tǒng)計學處理

采用SPSS 16.0軟件分析，統(tǒng)計方法采用配對t檢驗、獨立樣本t檢驗及方差分析，實驗數(shù)據(jù)以表示，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié) 果

2.1 組織總RNA質(zhì)量檢測

使用M200Pro酶標儀檢測樣品總RNA純度，A260/A280在1.8～2.0之間，說明總RNA純度較高；1.2%甲醛變性凝膠電泳檢測樣品總RNA完整性，28S條帶亮度約為18S的2倍，5S條帶亮度最淡(圖1)，說明提取的總RNA完整性沒有降解。

圖1 總RNA甲醛變性凝膠電泳圖Fig. 1 The picture of formaldehyde degeneration electrophoresis gel about total RNA

2.2 HPV16檢測

88例宮頸鱗癌組織進行HPV16檢測，67例HPV16陽性(其中5例標本用于芯片檢測，15例收集到完整癌及癌旁組織的標本用于芯片驗證)，21例HPV16檢測結(jié)果陰性，HPV16陽性的表達率為76.1%。瓊脂糖凝膠電泳檢測HPV16結(jié)果見圖2。電泳條帶顯示亮度且電泳亮帶在81 bp長度左右，提示此電泳亮帶為目的條帶，HPV16檢測結(jié)果為陽性；無電泳亮帶及電泳亮帶不在81 bp長度左右，提示此電泳雜帶非目的條帶，可能為引物二聚體或cDNA模板本身所致，HPV16檢測結(jié)果為陰性。

2.3 芯片檢測

5例新疆南部維吾爾族HPV16陽性宮頸鱗狀細胞癌組織及癌旁組織(患者年齡為：48～58歲，臨床分期為：Ⅰb1～Ⅱa1期)miRNA芯片掃描結(jié)果見圖3。使用SAM軟件挑選差異miRNA，18個miRNAs在癌組織中表達發(fā)生變化，其中10個miRNAs表達上調(diào)，8個miRNAs表達下調(diào)(圖4、表2)。

2.4 實時定量PCR檢測

2.4.1 實時定量RT-PCR檢測情況

實時定量RT-PCR以U6為內(nèi)參，對miRNA芯片中差異表達的miRNA，從中隨機抽取2個差異表達的miRNA：miRNA-138和miRNA-720，進行實時定量RT-PCR檢測，均可見典型的PCR擴增曲線，說明PCR產(chǎn)物量足夠，引物敏感度高，目的基因和U6內(nèi)參的溶解曲線均為單峰，說明產(chǎn)物單一，無其他非特異性產(chǎn)物(圖5)。

圖2 2%瓊脂糖凝膠電泳檢測HPV16結(jié)果Fig. 2 The result about detection in HPV16 by 2% sepharose gel

圖3 miRNA芯片檢測結(jié)果Fig. 3 miRNA microarray results

圖4 宮頸鱗癌(C)及癌旁(L)比較分析散點圖Fig. 4 The cervical squamous cell carcinoma (C) and their adjacent tissue (L) comparative analysis scatterplot

表2 宮頸鱗癌中差異表達的miRNAsTab. 2 The miRNAs differentially expressed in cervical squamous cell carcinoma

圖5 PCR擴增曲線和溶解曲線Fig. 5 Ampli fi cation plot and melt curve of PCR

2.4.2 實時定量RT-PCR驗證結(jié)果

對已用miRNA微陣列芯片技術(shù)篩選出差異表達顯著的2個miRNAs：miRNA-138和miRNA-720進行實時定量RT-PCR驗證。選取83例中15例Ⅰb～Ⅱa期HPV16檢測陽性的新疆南部維吾爾族宮頸鱗狀細胞癌組織、癌旁組織進行檢測。miRNA-138和miRNA-720在宮頸鱗狀細胞癌組、癌旁組織中的表達率均為100%，對宮頸鱗狀細胞癌組、癌旁組的目的基因數(shù)據(jù)分別進行正態(tài)性檢驗，符合正態(tài)分布，采用配對t檢驗。miRNA-138、miRNA-720在癌組織與癌旁組織中表達差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，癌組織中的表達量均低于癌旁組織；實時定量RTPCR檢測miRNA-138、miRNA-720在宮頸鱗狀細胞癌組織中表達差異均有統(tǒng)計學意義，與芯片檢測結(jié)果一致，說明miRNA芯片檢測結(jié)果可靠(表3)。

2.5 miRNA-138及miRNA-720在宮頸癌中的表達及其與臨床病理的關(guān)系

2.5.1 miRNA-138在宮頸癌中的表達

miRNA-138在宮頸組織中的表達率為100%。與正常對照組相比，miRNA-138在83例(Ⅰb～Ⅳ期)新疆維吾爾族宮頸鱗癌組中表達顯著下調(diào)，宮頸癌組miRNA-138的表達平均是對照組的0.492倍，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)；miRNA-720在宮頸宮頸組表達率亦均為100%。與正常對照組相比，miRNA-720表達也顯著下調(diào)，宮頸癌組miRNA-720的表達平均是對照組的0.294倍，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05，表4)。

表3 miRNA-138、miRNA-720在宮頸鱗癌及癌旁組織中的表達Tab. 3 The expression of miRNA-138 and miRNA-720 in cervical squamous cell carcinoma tissue (C) and para-carcinoma tissue (L)

表4 miR-138、miR-720在宮頸癌組及對照組中的表達Tab. 4 The expression of miRNA-138 and miRNA-720 in cervical squamous cell carcinoma (C) and normal control groups (N)

2.5.2 miRNA-138、miRNA-720與新疆維吾爾族宮頸鱗癌臨床病理因素的關(guān)系

miRNA-138與臨床病理因素的相關(guān)分析顯示，83例新疆維吾爾族宮頸鱗癌患者中，年齡、臨床分期、腫瘤直徑、浸潤深度與miRNA-138的表達無明顯相關(guān)，差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組比無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的宮頸鱗癌組miRNA-138表達量低，且淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組miRNA-138的表達水平均為無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組的0.334倍，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)；有脈管浸潤組比無脈管浸潤組miRNA-138表達量低，且有脈管浸潤組miRNA-138的表達水平均為無脈管浸潤組的0.272倍，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)；miRNA-720與臨床病理因素的相關(guān)分析：83例新疆維吾爾族宮頸鱗癌患者中，年齡、腫瘤浸潤深度與miRNA-720的表達無明顯相關(guān)，差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)；而臨床分期、腫瘤直徑、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、脈管浸潤與miRNA-720的表達有關(guān)，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)；臨床Ⅱa期miRNA-720的表達最低，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。腫瘤直徑＞4 cm的癌組織中miRNA-720的表達水平均為腫瘤直徑≤4 cm的0.304倍，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移miRNA-720表達水平均為無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的0.105倍，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)；有脈管浸潤miRNA-720表達水平均為無脈管浸潤的0.084倍，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05，表5)。

2.5.3 miRNA-138、miRNA-720與新疆維吾爾族宮頸鱗癌HPV16感染的關(guān)系

83例新疆維吾爾族宮頸鱗狀細胞癌組織中(HPV16陽性62例、HPV16陰性21例)miRNA-138和miRNA-720的表達率為100%。miRNA-138在HPV16陽性宮頸鱗狀細胞癌組織中表達水平為13.949±2.063，在HPV16陰性宮頸鱗狀細胞癌組織中表達水平為13.338±3.716，差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)；miRNA-720在HPV16陽性宮頸鱗狀細胞癌組織中表達水平為6.363±3.774，在HPV16陰性宮頸鱗狀細胞癌組織中表達水平為5.877±4.477，差異也無統(tǒng)計學意義(P＞0.05，表6)。

表5 miRNA-138、miRNA-720與維吾爾族宮頸癌臨床病理因素的關(guān)系Tab. 5 The relationship between miRNA-138, miRNA-720 and clinicopathological factors of cervical squamous cell carcinoma

2.6 miRNA-138、miRNA-720生物信息學預(yù)測

2.6.1 miRNA-138靶基因預(yù)測分析

針對性地應(yīng)用Targetscan、miRwalk、miRanda、Pictar 4個預(yù)測軟件尋找miR-138的靶基因系列。通過數(shù)據(jù)信息交叉比對，獲取miRNAs分子與3’-UTR的可能結(jié)合靶點，發(fā)現(xiàn)共有12個基因被一致預(yù)測為miR-138的靶基因(表7)。

表6 miRNA-138、miRNA-720在HPV16陽/陰性宮頸鱗癌組織中的表達Tab. 6 The expression of miRNA-138 and miRNA-720 in cervical squamous cell carcinoma of HPV16 positive/negative

表7 miRNA-138靶基因預(yù)測結(jié)果及其功能Tab. 7 miRNA-138 predicted target genes and their function

2.6.2 miRNA-720靶基因預(yù)測分析

應(yīng)用上述4個miRNA靶基因預(yù)測網(wǎng)站尋找miRNA-720靶基因，4個軟件預(yù)測靶基因結(jié)果無完全重合者，targetscan網(wǎng)址和miRanda網(wǎng)址預(yù)測靶基因交叉重合者與miRwalk網(wǎng)址和miRanda網(wǎng)址預(yù)測靶基因結(jié)果交叉重合者列入本結(jié)果。基因預(yù)測結(jié)果顯示，EZH2為miRNA-720與miRNA-138共同調(diào)控靶基因(表8)。

3 討 論

miRNA能通過與其靶mRNA的特異性堿基配對引起靶mRNA的降解、抑制或活化，從而對基因進行轉(zhuǎn)錄或轉(zhuǎn)錄后的調(diào)控。檢測和分析miRNA的表達水平是研究miRNA功能的首要環(huán)節(jié)。研究發(fā)現(xiàn)在宮頸癌中有多種miRNA表達，如miRNA-205在宮頸癌組織中高表達［4］，hsa-cer-miRNA1、hsa-cer-miRNA2和hsa-cer-miRNA4在宮頸癌組織中表達上調(diào)［5］；而HR-HPV E7癌蛋白可以通過下游關(guān)鍵分子調(diào)控miRNA-15/miRNA-16的表達水平［6］，細胞分化過程中調(diào)控miRNA-203的活化程度［7］，影響細胞的增殖和細胞周期。本研究采用微陣列芯片技術(shù)，篩選出新疆南部維吾爾族宮頸鱗癌組織差異表達的miRNA，并采用實時定量RTPCR法檢測和分析了miRNA-138、miRNA-720在宮頸鱗癌中的表達。發(fā)現(xiàn)miRNA-138、miRNA-720在新疆南部維吾爾族宮頸鱗癌中呈表達下調(diào)，但未顯示出與HPV16感染具有相關(guān)性。

腫瘤的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移是目前腫瘤預(yù)后差的主要原因之一，miRNA在參與細胞增殖、凋亡發(fā)生、遠處轉(zhuǎn)移等方面均發(fā)揮著重要作用，具有評估腫瘤預(yù)后的潛在價值。本研究結(jié)果顯示miRNA-138、miRNA-720在Ⅰb～Ⅳ期新疆南部維吾爾族宮頸鱗癌組織中的表達與對照組相比均明顯下調(diào)，并且在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及脈管浸潤者中表達下調(diào)，而宮頸癌的轉(zhuǎn)移途徑主要有3種：①直接蔓延(最常見)；②淋巴轉(zhuǎn)移(主要轉(zhuǎn)移途徑)；③血行轉(zhuǎn)移。提示miRNA-138、miRNA-720的表達下調(diào)與新疆南部維吾爾族宮頸癌的侵襲與轉(zhuǎn)移有關(guān)，并且宮頸癌患者中這兩者的表達量越低，腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移能力越強，患者預(yù)后越差。除此之外，研究還顯示miRNA-720在腫瘤體積較大的局部晚期宮頸鱗癌組織中表達量降低，提示與腫瘤預(yù)后不良因素有關(guān)。miRNA-720在Ⅱa期表達最低，未表現(xiàn)出與臨床分期呈正相關(guān)，可能與組間病例結(jié)構(gòu)有關(guān)，需進一步擴大樣本研究。

miRNA-138在多種腫瘤中表達下調(diào)，與其作為抑癌基因有關(guān)［8-10］。在鼻咽鱗狀細胞癌的細胞株中，miRNA-138抑制上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化，下調(diào)的miRNA-138增強細胞遷移和侵襲，是一種多功能分子調(diào)節(jié)器［11］。在人胃癌SGC-7901細胞， 通過miR-138轉(zhuǎn)染，上調(diào)細胞內(nèi)miR-138表達豐度之后，能夠明顯抑制SGC-7901細胞的增殖［12］。Yeh等［13］的研究認為，低表達的miRNA-138與卵巢癌細胞的高侵襲性以及卵巢癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)。Takeshi等［14］的研究發(fā)現(xiàn)，miRNA-138作為抑癌基因通過調(diào)控波形蛋白。抑制腎癌的轉(zhuǎn)移，mirRNA介導(dǎo)的致癌通路是腎癌的發(fā)生和轉(zhuǎn)移的潛在機制。

目前國內(nèi)外有關(guān)miRNA-720與宮頸癌以外其他腫瘤的相關(guān)性報道也逐漸增多，Miguel等［15］的研究發(fā)現(xiàn)，miRNA-720、miRNA-21、miRNA-221和miRNA-431在前庭神經(jīng)鞘瘤中均表達上調(diào)，并位于14q32染色體上。Shinozuka等［16］的研究發(fā)現(xiàn)，SnoN/SKIL基因通過下調(diào)hsa-miRNA-720控制食管癌細胞的增殖。而miRNA-720通過靶向調(diào)節(jié)TWIST1基因抑制乳腺癌患者腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移［17］，與本研究結(jié)果相符。

已證實miRNA通過各自不同的靶基因來調(diào)控腫瘤細胞的生物學行為，從而參與腫瘤的發(fā)生過程。我們通過應(yīng)用軟件預(yù)測miRNA-138、 miRNA-720的靶基因，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，EZH2是miRNA-138和miRNA-720共同的靶基因，EZH2是果蠅zeste基因增強子［E(z)］的人類同源物。該基因定位于人7q35染色體上，基因長度約40 kb。EZH2基因編碼的蛋白屬于多梳家族(PcG)成員。PcG家族成員相互結(jié)合形成了多聚蛋白復(fù)合物，EZH2主要通過將3個甲基基團加到組蛋白3的27號賴氨酸(H3K27)上行使基因沉默者的角色，H3K27是維持染色質(zhì)凝聚的一種重要修飾，參與染色體結(jié)構(gòu)的形成，調(diào)節(jié)基因的表達，控制細胞的生長，因而在細胞記憶、生長發(fā)育及X染色體滅活等方面均有重要作用。EZH2β的功能特征揭示，EZH2基因亞型增加了哺乳動物基因表達調(diào)控的復(fù)雜性［18］。EZH2過多表達意味著組蛋白甲基化抑癌基因?qū)?dǎo)致其表達沉默，就可能導(dǎo)致癌癥形成，所以一種靶向EZH2的臨床藥物前模型顯示，其能夠抑制腦癌及前列腺癌的進展［19-20］。在宮頸癌組織中EZH2的高表達與腫瘤細胞分化、臨床分期、浸潤深度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)［21］。

總之，對miRNA-138、miRNA-720在新疆維吾爾族宮頸癌中的表達研究，及預(yù)測靶基因EZH2功能分析均顯示，miRNA-138、miRNA-720與宮頸癌的轉(zhuǎn)移，侵襲及不良預(yù)后有關(guān)。本課題下一步將進行雙熒光素酶報告基因檢測、以驗證靶基因，繼續(xù)了解相關(guān)預(yù)測靶基因的功能，進而應(yīng)用蛋白質(zhì)印跡(Western blot)法提取蛋白，從而得到miRNA-138、miRNA-720調(diào)控的靶基因及其所編碼蛋白。

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Investigation of microRNA expression on Uygur cervical squamous cell carcinoma in southern Xinjiang

CHENG Jing-xin1,2, LIU Ya-xin2, SU Wei2, YUAN Min2, ZHANG Yu1, ZHANG Yi1
(1.Department

of Gynecology, Xiangya Hospital of Central South University, Changsha Hunan 410000, China; 2.Department of Gynecology, Cancer Hospital of Xinjiang Medical University, Urumqi Xinjiang 831100, China)

ZHANG Yi E-mail: zhangyi5588@aliyun.com

Background and purpose: Cervical cancer is one of the most common cancer in Xinjiang, especially for Uygur from southern Xinjiang and its pathogenesis is not clear. MicroRNA (miRNA) is a class of small non-coding RNA playing an important regulatory role. Its expression and dysfunction is closely related to the development of tumors. In this study, we screen and preliminary analyse expression of miRNA in cervical squamous cell carcinoma samples with human papillomavirus (HPV) 16 positive of Uygur patients. The target genes of miRNA were predicted. Methods: miRNAs were pre-screened by using miRNA microarray technology in 5 cases of HPV16 positivity Uygur patients from southern Xinjiang with cervical squamous cell carcinoma. Fifteen cases specimens were examined by qRT-PCR for preliminary veri fi cation, and 83 cases of cervical cancer were detected and analysed the expression of miRNA; Targeted genes were predicted by using four softwares of target scan, miRwalk, miRanda and Pictar. Results: Eighteen differentially expressed miRNAs were selected by SAM software in 5 cases of HPV16 positivity southern Xinjiang Uygur cases with cervical squamous cell carcinoma.miRNA-138 and miRNA-720 were found expressed signi fi cantly different by initial veri fi cation. Contrasted with 40 normal cases, miR-138 and miR-720 were down-regulated in 83 Uygur patients from southern Xinjiang with cervical squamous cell carcinoma (P＜0.05),and correlated with lymph node matastasis and vascular invasion (P＜0.05), no correlation with age and the range of cervical wall involvement and HPV16 (P＞0.05). miRNA-720 was correlated with clinical stage and tumor size (P＜0.05); And the commonly targeted gene between miRNA-138 and miRNA-720 was EZH2. Conclusion: miRNA-138 and miRNA-720 were downregulated in Uygur patients from southern Xinjiang with cervical squamous cell carcinoma, and the common target gene was EZH2.The expression of miR-720 and miR-138 were correlated with relevant risk factors of invasion and metastasis.

Uygur from southern Xinjiang; Human papillomavirus 16; Cervical squamous cell carcinoma; miRNA-138; miRNA-720

10.3969/j.issn.1007-3969.2014.09.009

R737.33

A

1007-3639(2014)09-0690-10

2014-05-06

2014-07-29）

國家自然科學基金課題資助(No：81360380)。

張怡 E-mail:zhangyi5588@aliyun.com