黃 琦，章佳葉，鮑欣萍，謝琦敏，趙 庭

(浙江科技學(xué)院 生物與化學(xué)工程學(xué)院，杭州 310023）

HPLC法測(cè)定番茄紅素膠囊中番茄紅素的含量

黃 琦，章佳葉，鮑欣萍，謝琦敏，趙 庭

(浙江科技學(xué)院 生物與化學(xué)工程學(xué)院，杭州 310023）

建立了用HPLC法測(cè)定番茄紅素含量的分析方法，采用ODS色譜柱(150 mm×4.6 mm，5μm），流動(dòng)相為乙腈-甲醇-二氯甲烷(60∶25∶15），檢測(cè)波長(zhǎng)472 nm，柱溫32℃。試驗(yàn)結(jié)果表明，番茄紅素在0.2～40μg/m L范圍內(nèi)線性關(guān)系良好(r=0.999 6），加標(biāo)回收率大于96.0%，并可同時(shí)分離番茄紅素和共存的β-胡蘿卜素。該方法準(zhǔn)確、可靠，適用于番茄紅素膠囊中番茄紅素的含量測(cè)定。

番茄紅素；高效液相色譜法；含量測(cè)定

番茄紅素是一種功能性食用天然色素，屬于重要的類胡蘿卜素，廣泛存在于水果和蔬菜當(dāng)中，尤其在番茄中的含量最高。番茄紅素分子僅由碳、氫2種元素組成，含有多個(gè)共軛雙鍵，分子式C40H56，結(jié)晶純品呈深紅色。番茄紅素有較強(qiáng)的抗氧化性，具有防治前列腺癌、肺癌、調(diào)節(jié)機(jī)體免疫等重要功能［1-3］，已成為國(guó)際上功能食品成分研究的一個(gè)關(guān)注熱點(diǎn)［4］。國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)中番茄紅素的測(cè)定方法是高效液相色譜法［5］，所采用的色譜條件出峰時(shí)間較長(zhǎng)(保留時(shí)間約18 min），不適用于大批量樣品的檢測(cè)。本研究對(duì)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)中番茄紅素測(cè)定用流動(dòng)相加以改進(jìn)，該色譜條件縮短了番茄紅素的測(cè)定時(shí)間，并可分離同屬于類胡蘿卜素的番茄紅素和β-胡蘿卜素，具有較強(qiáng)的實(shí)用性。

1 儀器與試藥

島津LC-10AT液相色譜儀，SPD-10A紫外檢測(cè)器，ODS色譜柱(150 mm×4.6 mm，5μm），北京普析通用TU1800紫外可見(jiàn)掃描儀，p HS-25型酸度計(jì)。

番茄紅素、β-胡蘿卜素對(duì)照品(純度96.0%，上海江萊生物科技有限公司），甲醇(色譜純，美國(guó)TEDIA天地試劑公司），乙腈(色譜純，美國(guó)TEDIA天地試劑公司），二氯甲烷(色譜純，美國(guó)B&J生產(chǎn)試劑公司），二氯甲烷(分析純，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司），焦性沒(méi)食子酸(分析純，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）。

2 試驗(yàn)方法及結(jié)果

2.1 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇

取番茄紅素對(duì)照品，精密稱取，置于25 m L棕色容量瓶中用二氯甲烷溶解并定容，搖勻、稀釋，配成質(zhì)量濃度為2μg/m L溶液，以溶劑二氯甲烷為參比，在紫外可見(jiàn)掃描儀掃描得紫外光譜，見(jiàn)圖1。根據(jù)番茄紅素的紫外光譜特性，選擇472 nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)。

2.2 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

十八烷基硅烷鍵合相為固定相；流動(dòng)相為乙腈-甲醇-二氯甲烷(60∶25∶15），流速1.0 m L/min；檢測(cè)波長(zhǎng)472 nm；進(jìn)樣量10μL；柱溫32℃。精密稱取番茄紅素和β-胡蘿卜素對(duì)照品適量，置于棕色容量瓶中，加焦性沒(méi)食子酸-二氯甲烷溶液(稱取焦性沒(méi)食子酸6.0 g，用二氯甲烷溶解并定容至100 m L）溶解并定容至刻度。用焦性沒(méi)食子酸-二氯甲烷溶液稀釋至25.0μg/m L，進(jìn)樣測(cè)試。番茄紅素和β-胡蘿卜素的分離度應(yīng)不小于1.0。

圖1 番茄紅素的紫外掃描譜圖Fig.1 UV spectrum of lycopene

結(jié)果表明，色譜圖中相鄰兩主成分色譜峰的分離度良好，見(jiàn)圖2，理論塔板數(shù)按番茄紅素峰計(jì)算大于3 000，系統(tǒng)適用性試驗(yàn)符合規(guī)定。番茄紅素的保留時(shí)間為9.8 min。

2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.3.1 番茄紅素標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液的制備

精密稱取番茄紅素對(duì)照品2 mg，置10 m L棕色容量瓶中，加焦性沒(méi)食子酸-二氯甲烷溶液溶解再用流動(dòng)相稀釋至刻度，混勻，現(xiàn)用現(xiàn)配。

2.3.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線

圖2 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)色譜圖Fig.2 Chromatogram of system suitability test

精密吸取上述標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液10、50、250、500、1 000、2 000μL，置6個(gè)10 m L容量瓶中，加流動(dòng)相至刻度，搖勻，即配成番茄紅素質(zhì)量濃度為0.2、1.0、5.0、10.0、20.0、40.0μg/m L的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液。照上述色譜條件測(cè)定。經(jīng)回歸計(jì)算，色譜峰面積(A）與質(zhì)量濃度(c）在番茄紅素質(zhì)量濃度為0.2～40μg/m L范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系，其線性回歸方程：A=267 095c-11 821，r=0.999 6。

2.4 進(jìn)樣精密度

取番茄紅素質(zhì)量濃度為10.0μg/m L的標(biāo)準(zhǔn)溶液10μL進(jìn)樣，連續(xù)測(cè)定6次，計(jì)算得其相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD）為1.76%。

2.5 檢測(cè)限

取上述制備標(biāo)準(zhǔn)曲線用最低質(zhì)量濃度的番茄紅素溶液，采用逐步稀釋法，檢測(cè)限以信噪比S/N=3確定。結(jié)果表明，番茄紅素的檢測(cè)限為0.2 ng。

2.6 加標(biāo)回收率試驗(yàn)

取已知含量的番茄紅素膠囊10份作為基質(zhì)，分別測(cè)定0.2 mg/g和1.0 mg/g 2個(gè)添標(biāo)水平下番茄紅素的加標(biāo)回收率，并計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差。每個(gè)水平測(cè)定5次，回收率及精密度結(jié)果見(jiàn)表1。結(jié)果表明，該方法具有較好的準(zhǔn)確度和精密度。

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果

表1 加標(biāo)回收率(n=5）Table 1 Recovery of standard addition(n=5）

取20μg/m L的番茄紅素標(biāo)準(zhǔn)品溶液，在0～8 h內(nèi)每間隔1 h依法進(jìn)樣測(cè)定峰面積，計(jì)算RSD值。結(jié)果表明，番茄紅素在室溫(25℃以內(nèi)）條件下，4 h內(nèi)是穩(wěn)定的。4 h內(nèi)色譜峰面積的RSD為2.27%。

2.8 樣品含量測(cè)定

取市售番茄紅素膠囊若干，分別取0.2 g，精密稱定，按照國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB/T 22249―2008《保健食品中番茄紅素的測(cè)定》中的試樣制備方法制備樣品［5］，按照2.2節(jié)色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜圖(圖3），計(jì)算樣品中番茄紅素含量。結(jié)果表明，所檢測(cè)樣品的番茄紅素含量均在標(biāo)示含量的95%～105%。

圖3 番茄紅素膠囊樣品色譜圖Fig.3 Chromatogram of lycopene capsule

3 結(jié) 語(yǔ)

本研究建立了HPLC法測(cè)定番茄紅素。因?yàn)榉鸭t素還原性強(qiáng)，容易被氧化，標(biāo)準(zhǔn)溶液和樣品溶液需現(xiàn)配現(xiàn)用，溶解番茄紅素的溶液加入焦性沒(méi)食子酸可以延緩番茄紅素的分解。國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)中番茄紅素測(cè)定用流動(dòng)相由甲醇和乙腈組成(50∶50）；本研究在此基礎(chǔ)上添加了二氯甲烷，提高了乙腈比例，升高柱溫，可以縮短番茄紅素的出峰時(shí)間，有利于大批量樣品的測(cè)定。在該色譜條件下，番茄紅素和β-胡蘿卜素可以分離(分離度＞1.0），可避免β-胡蘿卜素的干擾。該方法能準(zhǔn)確、快速地測(cè)定番茄紅素膠囊中番茄紅素的含量，也可用于含番茄紅素的蔬果及相關(guān)保健品中番茄紅素的測(cè)定。

［1］ Palozza P，Simone R E，Catalano A，et al.Tomato lycopene and lung cancer prevention：from experimental to human studies［J］.Cancers，2011，3(2）：2333-2357.

［2］ Rao A V，Rao L G.Carotenoids and human health［J］.Pharmacological Research，2007，55(3）：207-216.

［3］ 曾瑤池，穆桂萍，黃淑芬，等.番茄紅素對(duì)高糖所致內(nèi)皮祖細(xì)胞功能障礙的保護(hù)作用及機(jī)制初探［J］.天然產(chǎn)物研究與開(kāi)發(fā)，2014，26(1）：19-23.

［4］ 郭軍玲，路新國(guó).番茄紅素的研究開(kāi)發(fā)及在食品中的應(yīng)用［J］.糧食與食品工業(yè)，2013，20(4）：58-61，66.

［5］ 中國(guó)疾病預(yù)防控制中心營(yíng)養(yǎng)與食品安全所.GB/T 22249―2008，保健食品中番茄紅素的測(cè)定［S］.北京：中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社，2008.

Quantitative determination of lycopene from lycopene capsule by HPLC

HUANG Qi，ZHANG Jiaye，BAO Xinping，XIE Qimin，ZHAO Ting
(School of Biological and Chemical Engineering，Zhejiang University of Science and Technology，Hangzhou 310023，China）

HPLC method was developed for the determination of lycopene by ODS column(150 mm×4.6 mm，5μm）under the conditions as：acetonitrile-methyl alcohol-dichloromethane(60∶25∶15）as the mobile phase，UV detection wavelength at 472 nm and column temperature at 32℃.Experimental results showed that lycopene has a good linear relation over the range of 0.2-40μg/m L(r=0.999 6）and the average recovery is over 96.0%.Lycopene andβ-carotene are seperated well under the chromatographic conditions.The method proposed is accurate and reliable for determination of lycopene in lycopene capsule with satisfactory results.

lycopene；HPLC；quantitative determination

TQ460.72；O657.71

A

1671-8798(2014）05-0368-03

10.3969/j.issn.1671-8798.2014.05.010

2014-07-02

浙江省大學(xué)生科技創(chuàng)新活動(dòng)計(jì)劃(新苗人才計(jì)劃）(2013R415040）

黃 琦(1980― ），女，河南省開(kāi)封人，講師，碩士，主要從事藥物分析、食品分析研究。