趙志強(qiáng)

(吉林市人民醫(yī)院，吉林 吉林 132001）

心肌梗死患者血清HMGB1和H-FABP水平動(dòng)態(tài)變化的研究

趙志強(qiáng)

(吉林市人民醫(yī)院，吉林 吉林 132001）

目的 觀(guān)察心肌梗死患者血清HMGB1和H-FABP表達(dá)水平的動(dòng)態(tài)變化，探討HMGB1和H-FABP在心肌梗死發(fā)病機(jī)制中的臨床意義。方法 患者分兩組：心肌梗死實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組，實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組分別于發(fā)病1 h、6 h、24 h和3 d取空腹靜脈血，采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測(cè)定血清HMGB1和H-FABP表達(dá)水平。結(jié)果 心肌梗死實(shí)驗(yàn)組6 h、24 h和3 d時(shí)血清HMGB1表達(dá)水平顯著高于正常對(duì)照組，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)；而心肌梗死實(shí)驗(yàn)組1 h血清HMGB1表達(dá)水平和對(duì)照組比較無(wú)變化；心肌梗死實(shí)驗(yàn)組中，患者在發(fā)病1 h、6 h、24 h時(shí)間段血清H-FABP表達(dá)水平持續(xù)升高，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)，而患者在發(fā)病3 d時(shí)間段血清H-FABP表達(dá)水平和對(duì)照組比較無(wú)變化。結(jié)論 HMGB1作為重要的炎性因子是心肌梗死晚期炎性反應(yīng)指標(biāo)；而H-FABP是心肌梗死早期反應(yīng)指標(biāo)；二者在發(fā)病6 h、24 h兩個(gè)時(shí)間段H-FABP表達(dá)升高存在正相關(guān)。

心肌梗死；HMGB1；H-FABP

心肌梗死是一個(gè)極其復(fù)雜的病理生理過(guò)程，臨床危害性大，嚴(yán)重者危及患者的生命安全，是臨床的常見(jiàn)急危重癥，若發(fā)病后能迅速得到確診及有效治療，則可以減少病死率及改善預(yù)后。心肌型脂肪酸結(jié)合蛋白(H-FABP)作為最新研究和發(fā)現(xiàn)的細(xì)胞因子，受到了國(guó)內(nèi)外學(xué)者的廣泛關(guān)注。有實(shí)驗(yàn)表明H-FABP在人體血液中表達(dá)時(shí)間早，且特異性高，而高遷移率族蛋白1（HMGB1）是近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)的一種新的炎性細(xì)胞因子，發(fā)揮多種生物學(xué)功能。但二者在心肌梗死患者血清中的表達(dá)變化，目前尚不清楚。因此，本研究通過(guò)觀(guān)察心肌梗死患者血清HMGB1和H-FABP表達(dá)水平的動(dòng)態(tài)變化，探討HMGB1和H-FABP在心肌梗死發(fā)病機(jī)制中的臨床意義及時(shí)間相關(guān)性，為臨床治療心肌梗死和判斷預(yù)后提供一定的理論依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 病例資料

收取我院2008年7月至2011年1月臨床診斷為急性心肌梗死患者共150例，男82例，女68例，年齡50～75歲；對(duì)照組：150例，年齡50～75歲，均來(lái)自我院老年人健康體檢的正常成人，與患者組性別和年齡配對(duì)。實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組的性別、年齡、比較差異無(wú)顯著意義，具有可比性。

1.2 納入與排除標(biāo)準(zhǔn)

本組所選病例為我院住院病例，符合中華心血管科學(xué)會(huì)急性心肌梗死病診斷要點(diǎn)。入選患者排除伴有近期急性感染、及患有肝、腎或心功能衰竭、腫瘤、風(fēng)濕、結(jié)核等疾病。

1.3 血液標(biāo)本

實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組均于心肌梗死患者發(fā)病后1 h、6 h、24 h和3 d空腹采集靜脈血5 mL放入無(wú)菌離心管內(nèi)，成批測(cè)定。

1.4 測(cè)定方法

采用膠體金免疫層析法方法檢測(cè)HMGB1和H-FABP表達(dá)水平；試劑盒由sigma公司提供。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié) 果

血清HMGB1和H-FABP表達(dá)水平：心肌梗死實(shí)驗(yàn)組6 h、24 h和3 d時(shí)血清HMGB1表達(dá)水平顯著高于正常對(duì)照組，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)；而心肌梗死實(shí)驗(yàn)組1 h血清HMGB1表達(dá)水平和對(duì)照組比較無(wú)變化；心肌梗死實(shí)驗(yàn)組中，患者在發(fā)病1 h、6 h、24 h時(shí)間段血清H-FABP表達(dá)水平持續(xù)升高，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)，而患者在發(fā)病3 d時(shí)間段血清H-FABP表達(dá)水平和對(duì)照組比較無(wú)變化；數(shù)據(jù)見(jiàn)表1和表2。

表1 血清HMGB1表達(dá)水平[pg/mL，（）]

表1 血清HMGB1表達(dá)水平[pg/mL，（）]

組別 病例數(shù) 發(fā)病時(shí)間1 h 6 h 24 h 3 d實(shí)驗(yàn)組 150 10.87±2.38 36.89±4.27 48.66±4.32 67.19±1.92對(duì)照組 150 5.31±1.83 4.33±1.42 4.55±1.79 5.88±1.12

表2 血清H-FABP表達(dá)水平[pg/mL，（）]

表2 血清H-FABP表達(dá)水平[pg/mL，（）]

組別病例數(shù) 發(fā)病時(shí)間1 h 6 h 24 h 3 d實(shí)驗(yàn)組 150 34.23±6.78 42.67±3.54 52.11±4.67 14.35±1.79對(duì)照組 150 7.32±2.44 7.39±1.29 8.66±2.45 8.17±1.22

3 討 論

心肌梗死是指心肌的缺血性壞死，為在冠狀動(dòng)脈病變的基礎(chǔ)上，冠狀動(dòng)脈的血流急劇減少或中斷，血液循環(huán)障礙最終導(dǎo)致心肌的缺血性壞死，是一個(gè)多病因、多發(fā)病機(jī)制過(guò)程，大量研究表明炎癥，組織和細(xì)胞凋亡，氧化應(yīng)激等多種生物反應(yīng)參與了心肌梗死的病理生理過(guò)程，心肌梗死發(fā)生一段時(shí)間后一些炎性介質(zhì)和細(xì)胞因子的釋放，可導(dǎo)致心肌組織損傷的發(fā)生。

H-FABP是一種心肌特異性胞質(zhì)蛋白，其分子量小，具有心肌特異性，直接參與細(xì)胞脂肪的攝取、轉(zhuǎn)運(yùn)、代謝。H-FABP對(duì)早期心肌梗死診斷有較高的敏感性和特異性，可作為診斷早期心肌梗死的生化指標(biāo)，該分子可以在心肌梗死發(fā)病后迅速釋放并立即進(jìn)入血液循環(huán)。目前H-FABP的臨床應(yīng)用非常廣闊，H-FABP比其他心肌標(biāo)志物更適合用于再梗死的診斷，是目前學(xué)者研究較多的判斷心肌梗死的敏感性非常高的生化指標(biāo)[1]。H-FABP在細(xì)胞內(nèi)與長(zhǎng)鏈脂肪酸結(jié)合，將其轉(zhuǎn)運(yùn)至線(xiàn)粒體，并最終生成三磷酸腺苷，50%～80%的心臟能量都是由脂質(zhì)氧化提供的，H-FABP在心肌代謝中特別重要，為心肌細(xì)胞提供能量。因此，H-FABP對(duì)于維持心肌細(xì)胞的穩(wěn)態(tài)非常重要[2]。研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)心肌細(xì)胞受損時(shí)，H-FABP在心肌梗死的早期診斷中明顯優(yōu)于cTnT等其他指標(biāo)[3]。

HMGB1是存在于真核細(xì)胞核內(nèi)的非組蛋白染色體結(jié)合蛋白，非組核蛋白含量豐富，普遍存在于哺乳動(dòng)物組織細(xì)胞中，在胞內(nèi)參與脫氧核糖核酸的復(fù)制、轉(zhuǎn)錄、翻譯和修復(fù)，在膿毒血癥、急性胰腺炎等疾病中HMGB1作為重要的晚期炎性介質(zhì)起著非常重要的作用，是內(nèi)毒素致死效應(yīng)的晚期重要炎性介質(zhì)[4-6]。研究顯示，HMGB1在動(dòng)脈粥樣硬化斑塊病理切片中表達(dá)指標(biāo)高，在動(dòng)脈粥樣硬化的早期炎性反應(yīng)中就起到了重要作用。Oozawa[7]發(fā)現(xiàn)缺血的心肌再灌注損傷1 h后血清HMGB1比缺血前表達(dá)水平明顯增高。HMGB1在體外可直接刺激巨噬細(xì)胞，其合成TNF量增加，且TNF mRNA表達(dá)量也增加。受HMGB1刺激的單核細(xì)胞釋放TNF，腫瘤壞死因子(TNF)和干擾素(IFN)等炎性因子，這些炎性因子反過(guò)來(lái)也可刺激HMGB1生成，維持并放大炎性反應(yīng)。研究發(fā)現(xiàn)[8]，HMGB1蛋白水平在離體實(shí)驗(yàn)中心肌體外缺氧30 min和在體心肌缺血性損傷中均有高表達(dá)，純化的HMGB1蛋白又反作用加重了心肌缺血再灌注損傷。那么HMGB1在急性心肌梗死發(fā)病機(jī)制中發(fā)揮什么作用呢？這正是我們想要探討的問(wèn)題所在，目前國(guó)內(nèi)外尚無(wú)此方面的研究。

我們采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測(cè)了實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組心肌梗死患者發(fā)病1、6、24 h和3 d的血清HMGB1和H-FABP表達(dá)水平，實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，心肌梗死實(shí)驗(yàn)組6 h、24 h和3 d時(shí)血清HMGB1表達(dá)水平顯著高于正常對(duì)照組，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)；而心肌梗死實(shí)驗(yàn)組1 h血清HMGB1表達(dá)水平和對(duì)照組比較無(wú)變化；心肌梗死實(shí)驗(yàn)組中，患者在發(fā)病1、6、24 h時(shí)間段血清H-FABP表達(dá)水平持續(xù)升高，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)，而患者在發(fā)病3 d時(shí)間段血清H-FABP表達(dá)水平和對(duì)照組比較無(wú)變化；這說(shuō)明HMGB1和H-FABP作為重要的炎性因子都參與了心肌梗死的炎癥發(fā)生過(guò)程，是一組與心肌梗死疾病發(fā)生進(jìn)展相關(guān)的重要標(biāo)志物。實(shí)驗(yàn)結(jié)果心肌梗死患者在發(fā)病6、24兩個(gè)時(shí)間段血清HMGB1表達(dá)水平持續(xù)性升高與患者在發(fā)病6、24兩個(gè)時(shí)間段H-FABP表達(dá)升高存在正相關(guān)，這說(shuō)明損傷后的早期心肌組織細(xì)胞缺氧，HFABP在細(xì)胞內(nèi)與長(zhǎng)鏈脂肪酸結(jié)合，將其轉(zhuǎn)運(yùn)至線(xiàn)粒體，參與B氧化，并最終生成三磷酸腺苷，為心肌細(xì)胞提供能量，導(dǎo)致H-FABP水平急劇升高，進(jìn)而局部炎癥激化，所以HMGB1作為炎性介質(zhì)，在發(fā)病6、24兩個(gè)時(shí)間段也表達(dá)升高，而在發(fā)病3 d時(shí)間段HMGB1作為炎癥晚期調(diào)節(jié)因子持續(xù)性升高，而H-FABP表達(dá)水平開(kāi)始下降，這說(shuō)明HMGB1由壞死、損傷的細(xì)胞釋放到胞外，對(duì)周?chē)难仔苑磻?yīng)進(jìn)行調(diào)控，維持并放大晚期炎性反應(yīng)，而H-FABP并沒(méi)有參與晚期炎性反應(yīng)發(fā)生。這些結(jié)果提示HMGB1和以H-FABP在腦心肌梗死炎性反應(yīng)中表達(dá)具有時(shí)間相關(guān)性。

因此，我們可以得出結(jié)論HMGB1作為重要的炎性因子是心肌梗死晚期炎性反應(yīng)指標(biāo)；而H-FABP是心肌梗死早期反應(yīng)指標(biāo)；二者在發(fā)病6 h、24 h兩個(gè)時(shí)間段H-FABP表達(dá)升高存在正相關(guān)。臨床動(dòng)態(tài)觀(guān)察和檢測(cè)心肌梗死患者血清的HMGB1和H-FABP表達(dá)水平可能對(duì)觀(guān)察病情變化及臨床治療具有重要的意義。

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