【摘要】目的對熒光原位雜交技術(shù)在異基因外周血造血干細(xì)胞移植治療白血病中的應(yīng)用意義進行分析。方法資料選自2011年3月——2013年11月在我院行異基因外周血造血干細(xì)胞移植后的白血病患者64例，并選取不同性別之間的移植41例，同性別之間的移植23例，采用基因探針和X、Y性染色體特異性雙色DNA探針進行檢測，分析患者的骨髓嵌合率和病灶殘留率。結(jié)果不同性別受、供者的41例白血病患者移植后第28d的檢測結(jié)果顯示，有24例患者的骨髓嵌合率高達99%以上，MRD為陰性；12例患者的嵌合率相對較低，MRD均為陰性；2例患者檢測出MRD為陽性，均原病復(fù)發(fā)。23例同性移植患者在移植后第28d的檢測中，沒有檢測到原有異?；虻臑?7例，存在微量病灶的患者為3例；3例患者移植后的1-4月后復(fù)發(fā)。結(jié)論熒光原位雜交技術(shù)具有特異性強、快速、準(zhǔn)確的應(yīng)用優(yōu)勢，應(yīng)用于異基因外周血造血干細(xì)胞移植的預(yù)后判斷，具有重要意義。

【關(guān)鍵詞】熒光原位雜交；造血干細(xì)胞；白血?。患?xì)胞移植

050文章編號：1004-7484（2014）-06-3044-01

在目前白血病的治療中，異基因造血干細(xì)胞移植方法已逐步的發(fā)展成為確?；颊唛L期存活率和完全治愈效果較好的選擇。同時，熒光原位雜交技術(shù)主要應(yīng)用于異性基因造血干細(xì)胞移植后微量殘留病灶和植入狀態(tài)的監(jiān)測。我院采用X、Y性染色體特異性雙色DNA探針對異性異基因造血干細(xì)胞移植后的植活情況進行檢測，主要用以臨床治療決策的制定。

1資料和方法

1.1一般資料資料選自2011年3月——2013年5月在我院行異基因外周血造血干細(xì)胞移植后的白血病患者64例。男37例，女27例。并且患者的選取滿足以下條件：①融合基因為陽性表達；②受和供的性別不同，患者應(yīng)滿足全部條件，或是其中的一個條件。并選取不同性別之間的移植41例，同性別之間的移植23例。在原發(fā)病當(dāng)中，41例為慢性粒細(xì)胞白血病，7例為急性非淋巴細(xì)胞白血病，16例為急性淋巴細(xì)胞白血病。

1.2檢測的項目所有患者均在行異基因外周血造血干細(xì)胞移植治療后的第28d，進行骨髓的采集。采用熒光原位雜交技術(shù)對受者的性染色體和融合基因進行檢測，用做評價受、供患者骨髓和微量白血殘留病灶比例及骨髓嵌合狀態(tài)的評價，并進行后續(xù)的觀察和隨訪。其中23例性別相同，但具有特殊染色體異常的異基因外周血造血干細(xì)胞移植受者，通過熒光原位雜交技術(shù)檢測患者殘留的微量病灶，其余的41例受者則進行骨髓嵌合狀態(tài)和融合基因狀態(tài)的檢測。

1.3檢測方法在進行檢測時，采用BCR和X探針用作綠色熒光的標(biāo)記，而ABL和Y探針則用于紅色熒光的標(biāo)記。進而根據(jù)試劑盒所提示的相應(yīng)操作說明，實施標(biāo)本的處理、雜交和變性后的洗脫操作。同時在熒光顯微鏡之下，結(jié)合三色濾光鏡的應(yīng)用，對熒光信號進行觀察。其中綠色的信號為BCR、ETO和X信號，紅色信號為ABL、Y和AML1信號，而融合基因則屬于紅、綠信號的并集。

2結(jié)果

2.1異基因外周血造血干細(xì)胞移植治療后28天的熒光原位雜交技術(shù)檢測結(jié)果表1為患者經(jīng)異基因外周血造血干細(xì)胞移植治療后28天的熒光原位雜交技術(shù)檢測結(jié)果。

2.2不同性別移植后的熒光原位雜交技術(shù)檢測結(jié)果在患者行異基因外周血造血干細(xì)胞移植治療后的第28d，進行的熒光原位雜交檢測結(jié)果顯示，不同性別受、供者的41例白血病患者當(dāng)中，有24例患者的骨髓嵌合率高達99%以上，并且MRD為陰性。但其中12例患者的嵌合率相對較低，其中11例為95%-97%，1例僅為83%，但MRD均為陰性。該類患者在接受減少或停用供者淋巴細(xì)胞輸注和免疫抑制劑處理后，其嵌合率均達到99%以上。但同時其中的2例患者檢測出MRD為陽性，經(jīng)過相應(yīng)的處理后，其嵌合率出現(xiàn)下降的趨勢，并且融合基因存在上升的趨勢，均原病復(fù)發(fā)。

2.3同性別移植后的熒光原位雜交技術(shù)檢測結(jié)果在患者完成移植后的第28d進行熒光原位雜交技術(shù)檢測的結(jié)果中，23例患者當(dāng)中，沒有檢測到原有異?；虻臑?7例，存在微量病灶的患者為3例，但經(jīng)過減少供者淋巴細(xì)胞的輸注和免疫抑制劑之后，殘留病灶減少至1%，最后均得到緩解。另外3例患者存在殘留病灶的量達到0.5%-7.0%，但經(jīng)過多次的熒光原位雜交技術(shù)檢測之后，MRD均呈現(xiàn)上升的趨勢，在移植后的1-4月后復(fù)發(fā)。

3討論

熒光原位雜交技術(shù)為用于性別染色體和融合基因的常用檢測技術(shù)，并且在異基因外周血造血干細(xì)胞移植的預(yù)后判斷中具有廣泛的應(yīng)用。在目前用于融合基因的技術(shù)的重要為熒光原位雜交技術(shù)和PCR技術(shù)，兩者各有各的應(yīng)用優(yōu)勢，但前者的應(yīng)用和RQ-PCR具有較好的相關(guān)性。同時，嵌合體和白血病患者移植是否成功具有較大的關(guān)系。因此，需應(yīng)用相應(yīng)的技術(shù)，對供體細(xì)胞在受者體中的情況進行檢測。若是供體細(xì)胞的嵌合率下降，其導(dǎo)致的原因和原病復(fù)發(fā)、移植物被排斥，具有較大的聯(lián)系?；诖耍瑢η逗蠣顟B(tài)的準(zhǔn)確分析，可有效的指導(dǎo)白血病患者抑制之后應(yīng)用免疫抑制劑的量，以及可較好的對供者淋巴細(xì)胞輸注數(shù)量和時間進行控制，同時還可用作疾病的檢測，以及植物抗宿主病的預(yù)防。

在本次研究中，患者行異基因外周血造血干細(xì)胞移植治療后的第28d所進行的熒光原位雜交檢測結(jié)果顯示，不同性別受、供者的41例白血病患者當(dāng)中，有24例患者的骨髓嵌合率高達99%以上，并且MRD為陰性。但其中12例患者的嵌合率相對較低，其中11例為95%-97%，1例僅為83%，MRD均為陰性。但同時其中的2例患者檢測出MRD為陽性，均原病復(fù)發(fā)。在患者完成移植后的第28d進行熒光原位雜交技術(shù)檢測的結(jié)果中，23例患者當(dāng)中，沒有檢測到原有異常基因的為17例，存在微量病灶的患者為3例。另外3例患者存在殘留病灶的量達到0.5%-7.0%，經(jīng)過多次的熒光原位雜交技術(shù)檢測之后，MRD均呈現(xiàn)上升的趨勢，但在移植后的1-4月后復(fù)發(fā)。其結(jié)果顯示，采用嵌合率和融合基因的檢測，對于單獨應(yīng)用嵌合率的檢測，具有更為重要的作用。同時，在臨床中存在MRD和嵌合率存在不同步的現(xiàn)象，本組中有1例患者的嵌合率為99.4%，但MRD為陰性。同時微量殘留病灶也會導(dǎo)致原病復(fù)發(fā)。

綜上所述，熒光原位雜交技術(shù)能夠顯示出具備不同比例受者和供者的源性染色體。進而顯示出嵌合體的程度和狀態(tài)，并且其具有特異性強、快速、準(zhǔn)確的應(yīng)用優(yōu)勢，應(yīng)用于異基因外周血造血干細(xì)胞移植的預(yù)后判斷，具有重要作用。

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