【摘要】目的探討P16基因缺失與腫瘤的關(guān)系。方法用聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)，檢測(cè)56例肝癌、25例白血病患者的P16基因缺失情況。結(jié)果56例肝癌患者中有13例P16基因缺失，25例白血病患者中有8例P16基因缺失，缺失率分別為23.2%，32.0%。結(jié)論P(yáng)16基因缺失與腫瘤的發(fā)生關(guān)系密切，檢測(cè)P16基因缺失有助于腫瘤的輔助診斷。

【關(guān)鍵詞】P16基因；聚合酶鏈反應(yīng)；腫瘤；基因缺失

100文章編號(hào)：1004-7484（2014）-06-3085-02

腫瘤的發(fā)生發(fā)展與多種遺傳基因改變有關(guān)，P16基因又稱MTS1或CDK4I，位于人類第九號(hào)染色體短臂（9P21）上，全長8.5kb，由三個(gè)外顯子和兩個(gè)內(nèi)含子組成，其編碼16KD產(chǎn)物即P16蛋白。MST1作為CDK4的抑制因子，抑制細(xì)胞的分裂，增殖。

1資料與方法

1.1標(biāo)本

1.1.156例肝癌標(biāo)本來自新沂市第二人民醫(yī)院病理科肝癌標(biāo)本已經(jīng)脫水石蠟包埋。31例肝硬化標(biāo)本來自新沂市第二人民醫(yī)院外科。

1.1.225例白血病標(biāo)本來自新沂市人民醫(yī)院血液科20例正常對(duì)照組來自健康體檢者。

1.2DNA提?、偈灠竦母伟?biāo)本：把標(biāo)本切碎置離心管中，二甲苯脫蠟，12000r/min離心4min，吸取上清夜，加入無水乙醇，混勻離心，吸去乙醇，開蓋靜置5min，讓乙醇揮發(fā)；加入蛋白酶K緩沖液，55°C3h，7000r/min離心5min，95°C8min滅活蛋白酶K，離心后取上清液作反應(yīng)模板。肝硬化標(biāo)本切碎后直接加蛋白酶K緩沖液，以下操作同前。②白血病細(xì)胞標(biāo)本：白血病經(jīng)骨髓片檢查確診。取抗凝血200ul，加500ul溶胞液，冰浴10min，5000r/min離心10min，去盡上清液，沉淀內(nèi)加入500ul溶胞液，混勻，冰浴10min，去盡上清，沉淀內(nèi)加入裂解酶60ul，混勻，100Cmin，8000r/min離心5min，取上清液于另一管內(nèi)加處理液5ul，再加入250ul無水乙醇，倒轉(zhuǎn)幾次，12000r/min離心5min，去盡上清液，開蓋靜置5min，加入20ul雙蒸水溶解沉淀，作為反應(yīng)模板。

2結(jié)果

2.156例肝癌標(biāo)本中有13例P16基因缺失缺失率為23.2%；而31例肝硬化標(biāo)本中僅有1例P16基因缺失，缺失率為3.2%。

2.225例白血病標(biāo)本中有8例P16基因缺失缺失率為32%，而20例正常對(duì)照者則未發(fā)現(xiàn)P16基因缺失。

3討論

真核細(xì)胞分裂必須經(jīng)過兩個(gè)關(guān)鍵環(huán)節(jié)：G1-S期和G2-M期。CDKs是細(xì)胞周期調(diào)節(jié)中心，其成員的激活和磷酸化促進(jìn)細(xì)胞從G1-S期和G2-M期的轉(zhuǎn)變。P16基因通過其表達(dá)產(chǎn)物P16蛋白與CDK4結(jié)合抑制CDK4的功能。CDK4與CyclinD1結(jié)合能使細(xì)胞周期進(jìn)入G1期，而P16蛋白與CDK4結(jié)合后，使pRB（視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤基因蛋白）磷酸化作用減小，導(dǎo)致轉(zhuǎn)錄因子E2F釋放減少，細(xì)胞從G1期至S期受抑制，從而使細(xì)胞生長停滯。在我們檢測(cè)的標(biāo)本中，56例肝癌有13例P16基因缺失，缺失率為23.2%，而31例肝硬化標(biāo)本僅有1例P16基因缺失，缺失率為3.2%。肝癌中P16的變異應(yīng)該高于23%，因?yàn)镻16的其它變異如重排、點(diǎn)突變和P16CPG過度甲基化都沒有進(jìn)行檢測(cè)，并且正常細(xì)胞混雜有可能掩蓋P16基因的缺失，導(dǎo)致檢出率降低。25例白血病中有8例P16缺失，缺失率為32%多重PCR檢測(cè)ALL病人骨髓標(biāo)本，用DNA印跡法檢測(cè)骨髓的缺失率一致。而20例正常對(duì)照者未發(fā)現(xiàn)P16基因缺失。

參考文獻(xiàn)

[1]Kamb A，N A Gruis，J Weaver-Feldhaus，et al.A cell cycle regulator potentially involved in genesis of many tumor types.Science，1994，264：436-440.

[2]Serrano M，Hannon GJ，Beach D.A new regulatory motif in cell-cyle control causing specific inhibition of cyclin D/CDK4，Nature，1993，366：704-707.